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转基因元件7S 3‘终止子染料法qPCR试剂盒操作方法
转基因元件7S 3‘终止子染料法qPCR试剂盒 操作方法: 1 确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中,向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。 2 将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。 3 12,000 rpm离心1min,弃滤液。 注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。 若溶液体积大于纯化柱容积(800 μl),可分两次离心。 4 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。 注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,以获得高质量DNA片段。 5 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。 6 12,000 rpm 离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。 注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。 7 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 μl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。 注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段、用户对目的片段浓度要求而定。
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H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法操作步骤
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法 操作步骤 : 实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 选择抗凝的注意点: ①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致; ②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固; ③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆); ④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。
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简介
职业: -
学校: -
地区:上海市
个人简介:
上海联祖生物科技有限公司shanghai rayzbio Technology Co. , Ltd.主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售,主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司产品。 公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司的服务和业务 在同行获得*。其立足于生命科学领域,全力打造高品质生物科技产品链和技术服务链,也具备丰富的管理经验,同时我们建立了集、售后服务等多方位的服务体系。我们有**、有理想,更有责任感,是您科研道路上值得信赖的伙伴。 公司的理念是:以诚信为本,努力打造优质品牌,为您提供的售中、售后服务。 公司主推品牌: (进口、国产) Amresco 、Sigma、 Peprotech 、Corning 、BD Faclon 、Axygen、 Invitrogen、 Qiagen、 Hyclone 、Uscnlife、 Wako 、SantaCruz、sciencell、Gibco、R&D、Linco、Amersham、Millipore。
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企业简介
企业名称:上海联祖生物科技有限公司
企业性质:代理商,
主营业务:PCR检测试剂盒、PCR试剂盒, 核酸检测试剂盒,荧光定量检测试剂盒,生化试剂盒 ,比色法试剂盒,酶...
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