人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)ELISA试剂盒的原理是什么? ELISA试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)。试剂盒中的微孔板上预先包被了人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)捕获抗原。然后,依次加入待测样本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过温育和洗涤后,使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并计算样品的浓度。 如何处理样本并满足试验要求? 1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后离心,取上清进行检测。也可以将标本冷冻保存,但要避免反复冻融。 2. 血浆:使用EDTA或肝素作为抗凝剂,采集后30分钟内离心,或将标本冷冻保存,但要避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其他生物标本:离心后取上清进行检测,或将标本冷冻保存,但要避免反复冻融。 如何进行ELISA试验? 1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需的微孔板,剩余的微孔板密封放回4℃保存。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔中加入不同浓度的标准品,样本孔中加入待测样本,空白孔不加。 3. 在除空白孔外的标准品孔和样本孔中加入HRP标记的检测抗体,使用封板膜封住反应孔,进行温育。 4. 弃去液体后,使用洗涤液进行洗板,重复洗板5次。 5. 加入底物A和B进行孵育。 6. 加入终止液后,在450nm波长处测定各孔的OD值。 ELISA试剂盒的应用领域有哪些? ELISA试剂盒可用于人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因工程抗体的研究。通过利用原核细胞和哺乳动物细胞表达系统,可以实现全抗体的真核分泌表达。利用亲和层析纯化后的抗体,可以进行功能活性的检测。ELISA试剂盒在研究人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的表达和功能鉴定方面具有重要的应用价值。 参考文献 [1] Epidemiology of Hepatitis Virus B and C[J]. Archives of Medical Research. 2007(6) [2] Mechanism of viral persistence and resistance to nucleoside and nucleotide analogs in chronic Hepatitis B virus infection[J]. Fabien Zoulim. Antiviral Research. 2004(1) [3] Baculovirus expression cassette vectors for rapid production of complete human IgG from phage display selected antibody fragments[J]. Mifang Liang, Stefan Dübel, Dexin Li, Iris Queitsch, Wei Li, Ekkehard K.F Bautz. Journal of Immunological Methods. 2001(1) [4] Efficacy and limitations of a specific immunotherapy in chronic hepatitis B[J]. Journal of Hepatology. 2001(6) [5] 刘洋. 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因工程抗体的研究[D]. 中国疾病预防控制中心, 2012. 查看更多