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化工工艺工程师

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使用潮霉素，壮观霉素抗性的质粒构建载体，空白DH5a平板上成片菌膜生长？大家好，请教一下，我使用整合型质粒，pMS82（潮霉素抗性）和pPM927（壮观霉素抗性）连接基因片段构建重组载体，使用吉布森组装法构建载体。在实验过程中发现，转化DH5a感受态细胞后，37度培养过夜，平板总是成片生长，而没有单个菌落。为了验证是否是抗性的问题，重新买了潮霉素（易见光分解），配置好母液（浓度是50 mg/ml），使用浓度是 50 ug/ml（参考链霉素资料）。在分别含有潮霉素和壮观霉素的LB液体培养基中，分别培养pMS82和pPM927菌，空白的DH5a作为对照。在12小时内，pMS82和pPM927菌正常生长，DH5a基本上没有生长，培养液基本澄清，但是在16-20小时后，DH5a在潮霉素培养基中也能够开始明显生长，菌液浑浊。我当时认为可能是潮霉素不稳定的原因，把平板生长的时间控制在12小时以内即可。然后用双酶切线性化好的载体pMS82，pPM927分别连接基因片段，吉布森组装后转化DH5a感受态细胞，同时将空白的DH5a感受态细胞作为对照，分别涂布潮霉素和壮观霉素平板。平板是现用现配的，浓度是50 ug/ml。37度培养过夜后，仍然看到实验组和对照组都是长成一片菌膜，而没有单个菌落生长。尤其是潮霉素的平板。想请教各位高手，有没有这种经验，到底是什么原因导致现在的结果呢？请大家多多指教，感激不尽！ P.S. 实验室常用的载体是氨苄青霉素和安普霉素抗性，这两个抗性的载体连接组装没有出现过一片菌膜的现象，并且最近使用安普霉素抗性的质粒成功构建过载体。DH5a对其它载体，其它抗性也是能够正常使用的。我是最近刚开始用这两个载体，pMS82和pPM927，对这两个载体不熟悉，潮霉素和壮观霉素抗性也是第一次用，不知道是这两个抗生素到底是什么地方我做的不对，导致了现在的问题。附上37度培养12小时的平板图片，请大家多指教，再次感谢！ 20191218 潮霉素DH5a空白平板.jpg 20191218 潮霉素组装平板.jpg 20191218 壮观霉素DH5a空白平板.jpg 20191218 壮观霉素组装平板.jpg查看更多 1个回答 . 20人已关注

#质粒构建载体

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工业用水处理工程？ 求工业用水处理工程第二版答案查看更多 1个回答 . 12人已关注

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大赛璐提供的拆分方法无法重复，？ 怎么办查看更多 5个回答 . 14人已关注

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应用化学专业实习？ 山东省内有没有好的实习单位，同学校的生物专业的都去中科院和省科院实习，想问一下我们这个专业的有没有好些的查看更多 1个回答 . 1人已关注

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稠油？ 请问哪里能够购买稠油，做实验用的，黏度500mpa.s以上的查看更多 1个回答 . 11人已关注

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一个关于缩醛去去保护的问题？ 原料氢谱a、b、c、d均有出峰，产物氢谱有c的峰，无d峰和醛基峰。非常不解！求助。。。 QQ截图20191118150401.png查看更多 5个回答 . 11人已关注

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招车间主任？ 陕西，招车间主任，待遇1万2起步，如工作经验丰富可商量，有意向私聊，谢谢大家查看更多 7个回答 . 8人已关注

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吡啶红外（Py-IR）上酸定量及消光系数的判定？本人在外面做的吡啶红外，测试方给出了每个催化剂对应的酸量。而本人通过该酸量关联了催化活性，该内容却被审稿人始终抓着不放。第一次修改稿中问了计算方法及消光系数是多少？在咨询测试方后得知该计算是基于经典文献 (J. Catal. 141 (1993) 347)。而第二次提出的问题实在让我无法回答，只能寻求万能的朋友。本人理解的问题：吡啶红外给出的峰面积，数值上与吸光度的关系是什么？相等？测试方给出的峰面积是所有B酸峰面积还是只针对1545cm-1处的峰面积？审稿人的提问如下：the extinction coefficients, the authors used for Brønsted and Lewis acid sites in the revised ms, should be calculated only for 1545 and 1455 cm-1 IR bands characteristic of pyridine on BAS and LAS, respectively. However, the authors used more than one bands (BASs for 1544 and 1637 cm-1: LASs for 1444, 1453, 1600 and 1620 cm-1) for the quantification, which cannot be correct.查看更多 9个回答 . 5人已关注

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富锂锰基前驱体颜色问题？采用的是共沉淀法，但是反应完后是粉色，之前还能合出土黄色的沉淀，最近不知为什么一直是粉色，不过烘干后就成土黄色了，这个前驱体颜色到底是粉色还是土黄色，求大佬解释下！查看更多 1个回答 . 17人已关注

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有机化学反应，半胱胺和缩醛的反应过程解析，能不能得到脒基? 求助大家帮忙看一下这个反应——单体半胱胺和缩醛反应想要生成脒基（如下图所示），在60℃ 氮气保护下反应是怎么进行的？产物打了核磁峰位移完全与目标产物不一致。是不是生成了其他东西去了？？另外，将两种单体搅拌后点板发现了新物质。万分感激！答案满意再另外追加币~ 图2.png查看更多 1个回答 . 6人已关注

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通路？ 一般怎么做细胞通路的实验查看更多 1个回答 . 5人已关注

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想问一下大家，微米级别的铁粉放在微波炉中加热会爆炸吗? 据说短时间会发生火花，长时间会爆炸？求大佬解答！查看更多 10个回答 . 17人已关注

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紫外光电探测？ 请问有哪里可以做薄膜的紫外光电探测？有偿付费的都可以。我们做了一个氧化物的pn结，想看看有没有紫外光电探测的性能，谢谢！查看更多 1个回答 . 19人已关注

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关于晶体荧光寿命的问题？ 本人测了晶体的荧光寿命，但在衰减过程中40ns处出现了一个小鼓包，不知如何解释，请大家帮帮忙 1.png查看更多 3个回答 . 9人已关注

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单层聚苯乙烯微球的制备？单层聚苯乙烯微球的制备，最近在再用水-空气两相界面制备单层聚苯乙烯微球，用微量注射器将质量分数5%的聚苯乙烯分散到水面然后滴加十二烷基硫酸钠不能成膜实验方法是这样的：将制备的聚苯乙烯微球与乙醇体积2:1混合，然后用注射器滴加查看更多 10个回答 . 19人已关注

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碳点合成中的问题？求助大神们，在碳点的合成后处理中，要经过透析步骤：1、新买的透析袋该如何预处理才可以使用呢？ 2、透析过程如何进行呢，在什么溶液中透析得到碳点呢？ 3、最后要得到碳点的粉末如何得到？第一次做碳点的合成，求助有经验的大神！谢谢谢谢！查看更多 6个回答 . 12人已关注

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近红外检测单线态氧？ 请问各位大佬，有谁知道哪个学校或者检测公司有InGaAs近红外检测设备嘛，检测单线态氧的，跪求orz…… 查看更多 2个回答 . 6人已关注

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简介

职业：（HOTO）青岛金尔农化研制开发有限公司 - 化工工艺工程师

学校：深圳大学 - 化学与化工学院

地区：重庆市

个人简介：理想是人生的太阳。查看更多

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