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重叠PCR，屡次失败，求助大神们？最近在做重叠pcr，片段A（409bp）、B（1777bp），目的片段为2100多bp。我的做法是，第一轮用引物对E\F扩增出A、R\T扩增出B、胶回收，引物F和R有26bp重叠，重叠部分Tm59℃。第二轮用片段A和B为模版，不加引物扩增5循环，然后用加引物E和T扩增25循环。（10ul体系：酶5ul；片段A 15ng；片段B 45ng；引物E\T 各0.5ul；水补到10ul）（反应条件：94℃ 2min；98℃ 10s，58℃ 5s，72℃ 40s；72℃ 2min）5和25循环条件都是如此，用的是塔克拉的快速高保真酶。但是总是没有目标条带，而在600bp位置出现非特异条带，而且条带非常的亮。退火温度也换过53℃，55℃，60℃，结果都是一样。大伙觉得我这是哪里出了问题，有没有好的解决办法呢？查看更多 2个回答 . 1人已关注

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格氏试剂正常颜色是什么样? 查看更多 1个回答 . 20人已关注

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酯化反应中碰到的问题？现在在做一个均苯三甲酸和氯丙烯的酯化反应，目前在重复一个专利探索，具体就是用二氯乙烷作溶剂，三乙胺作为缚酸剂，加入原料60摄氏度反应18小时。有几个疑问想要请教一下朋友 1、反应过程中产生了粘稠的白色固体（氯丙烯几乎没有反应），想知道白色固体可能是什么物质？白色固体逐渐分解，分解成可溶于水的盐，本来想干燥一下分析一下盐的，结果融化成了胶。 2、如果要改进这个实验，更改一下缚酸剂可不可行，如果可行的话，有什么其他的缚酸剂可以推荐的。（ps：如果有其它改进方法也可，因为污染严重，所以暂时不考虑酰氯法）谢谢大家！查看更多 3个回答 . 2人已关注

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锂电池极性反转了？对四节锂电池串联充电，充超过24小时。可能过充了，中间—节居然极性反了，电压为正常电池负的—半。哪位大侠指点下，这是什么什么情况?怎么能再反转恢复正常? 查看更多 7个回答 . 11人已关注

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超级电容器的组装问题？ 超级电容器的材料，长到基底上的材料三电极测试的结果很好，组装两电极的时候都测不出来是什么原因呢？查看更多 1个回答 . 5人已关注

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普鲁士蓝中有钾吗? 看了一晚上文献，发现普鲁士蓝有FeFe（CN）6和Fe4[Fe(CN)6]3两种写法，那么它里面有钾吗？如果有的话该怎么算呢？如果没有的话，它为什么可以做钾电正极的？拜托大家告知，谢谢查看更多 3个回答 . 11人已关注

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乙二硫醇的性质？最近在做实验，有使用到乙二硫醇，想请问各位大侠，有使用过这个乙二硫醇的吗？说明书上写了有剧毒，有臭味，请问各位大侠使用有什么注意事项吗？乙二硫醇使用结束了，怎么做后处理，怎么把它变成安全的物质倒到废液桶中？多谢各位大侠！查看更多 3个回答 . 1人已关注

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用双螺杆挤出机制造FDM用丝线，还需要添置哪些设备？ 实验室目前有双螺杆挤出机，造粒机，想制备FDM用的丝线，不知道还需要添置哪些设备，才可以做出一定直径的丝线，用到FDM中。谢谢！查看更多 3个回答 . 2人已关注

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EDS能谱图中的一列数字代表什么含义? 如图是用场发射扫描电镜拍的eds能谱图，，第一列数字wt% 代表质量比，各元素质量比加起来是100%。。请教各位第二列数字（加起来不是100%）代表的是什么？？ 11111.png查看更多 11个回答 . 7人已关注

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聚醚醚酮荧光染色？ 本人做聚醚醚酮（PEEK）FI-TC荧光染色发现背底很大，什么没有染色的PEEK也会发出强烈的荧光，请各位老师帮忙解答下，谢谢查看更多 1个回答 . 9人已关注

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现实生活中手性物质的获取？本人物理学专业，借助化学板块咨询一些手性物质的问题，请教大家，现实生活中有没有比较容易弄到的手性物质？有打算研究一下手性分子的旋光效应，但苦于化学知识的匮乏，请大家不吝赐教~查看更多 2个回答 . 18人已关注

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空心微球？ 请问谁知道韩国有一种微米级，用在化妆品上的空心微球。查看更多 2个回答 . 8人已关注

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有关PCR的问题求助？急需PCR大神的帮助，刚刚开始PCR设计了一段简并引物，我的目的条带大小是1500bp左右，可是P出来只有500bp，而且条带也很弱，在100bp那里还有比较粗的条带，但是不是很亮，是不是引物二聚体呢？不知道是什么原因，希望朋友能指点一二，不胜感激。微信图片_20180731215545.jpg查看更多 8个回答 . 14人已关注

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关于硅溶胶生产中的浮渣问题？各位前辈好，请问一下硅粉水解法制备硅溶胶的生产中，压滤以后滤液放置一段时间以后，会浮出一层灰色的杂质，请问你们是怎么解决这个问题的。目前试了0.5vm的滤袋和精密过滤器，效果都不太理想。求指教查看更多 1个回答 . 14人已关注

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找文章？ 有人知道清华大学李艳梅老师或她实验室的文章怎么找吗？查看更多 1个回答 . 2人已关注

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析氢LSV曲线不出平台？ 请问大家有谁知道电化学析氢LSV曲线为什么会出现图中这种情况，求各位大神指点查看更多 2个回答 . 6人已关注

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石油分馏（Fractional Distillation of Crude Oil）？ 查看更多 1个回答 . 18人已关注

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化学传记：1912年诺贝尔化学奖得主－Paul Sabatier？ 查看更多 1个回答 . 7人已关注

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求助无序问题？晶体精修求助！本人新手，晶体比较简单，配体如图，金属盐是溴化锌。初结构找到了，末端三个甲基好像是无序，溴旁边还有一个q峰，搞不懂怎么修，实在解决不了，不知道是什么原因求大神帮忙。数据已经上传，邮箱1021944685@qq.com。配体图.png查看更多 1个回答 . 20人已关注

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黑色染料无法溶解，求助，感谢？打扰各位，我有一个重要材料，被污染黑了，想把黑色的染料去掉，有机溶剂试过丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃，醇的话能微溶，出来一点淡淡的颜色。不知道有没有高手能提供一些染料的溶剂配方。感谢查看更多 2个回答 . 20人已关注

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简介

职业：泉州振戎石化仓储有限公司 - 给排水工程师

学校：陕西银行学校 - 会计电算化

地区：台湾省

个人简介：只有人们的社会实践，才是人们对于外界认识的真理性的标准。真理的标准只能是社会的实践。查看更多

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