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重叠PCR,屡次失败,求助大神们?
最近在做重叠pcr,片段A(409bp)、B(1777bp),目的片段为2100多bp。我的做法是,第一轮用引物对E\F扩增出A、R\T扩增出B、胶回收,引物F和R有26bp重叠,重叠部分Tm59℃。第二轮用片段A和B为模版,不加引物扩增5循环,然后用加引物E和T扩增25循环。(10ul体系:酶5ul;片段A 15ng;片段B 45ng;引物E\T 各0.5ul;水补到10ul)(反应条件:94℃ 2min;98℃ 10s,58℃ 5s,72℃ 40s;72℃ 2min)5和25循环条件都是如此,用的是塔克拉的快速高保真酶。但是总是没有目标条带,而在600bp位置出现非特异条带,而且条带非常的亮。退火温度也换过53℃,55℃,60℃,结果都是一样。大伙觉得我这是哪里出了问题,有没有好的解决办法呢?
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格氏试剂正常颜色是什么样?
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酯化反应中碰到的问题?
现在在做一个 均苯三甲酸 和氯 丙烯 的酯化反应,目前在重复一个专利探索,具体就是用二 氯乙烷 作溶剂,三乙胺作为缚酸剂,加入原料60摄氏度反应18小时。 有几个疑问想要请教一下朋友 1、反应过程中产生了粘稠的白色固体(氯丙烯几乎没有反应),想知道白色固体可能是什么物质?白色固体逐渐分解,分解成可溶于水的盐,本来想干燥一下分析一下盐的,结果融化成了胶。 2、如果要改进这个实验,更改一下缚酸剂可不可行,如果可行的话,有什么其他的缚酸剂可以推荐的。(ps:如果有其它改进方法也可,因为污染严重,所以暂时不考虑酰氯法) 谢谢大家!
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锂电池极性反转了?
对四节锂电池 串联 充电,充超过24小时。可能过充了,中间—节居然极性反了,电压为正常电池负的—半。哪位大侠指点下,这是什么什么情况?怎么能再反转恢复正常?
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超级电容器的组装问题?
超级电容器的材料,长到基底上的材料三电极 测试 的结果很好,组装两电极的时候都测不出来是什么原因呢?
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普鲁士蓝中有钾吗?
看了一晚上文献,发现 普鲁士蓝 有FeFe(CN)6和Fe4[Fe(CN)6]3两种写法,那么它里面有钾吗?如果有的话该怎么算呢?如果没有的话,它为什么可以做钾电正极的?拜托大家告知,谢谢
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乙二硫醇的性质?
最近在做实验,有使用到 乙二硫醇 ,想请问各位大侠,有使用过这个乙二硫醇的吗? 说明书上写了有剧毒,有臭味,请问各位大侠使用有什么注意事项吗?乙二硫醇使用结束了,怎么做后处理,怎么把它变成安全的物质倒到废液桶中? 多谢各位大侠!
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用双螺杆挤出机制造FDM用丝线,还需要添置哪些设备?
实验室目前有 双螺杆挤出机 , 造粒机 ,想制备FDM用的丝线,不知道还需要添置哪些设备,才可以做出一定直径的丝线,用到FDM中。谢谢!
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EDS能谱图中的一列数字代表什么含义?
如图是用场发射 扫描电镜 拍的eds能谱图,,第一列数字wt% 代表质量比,各元素质量比加起来是100%。。请教各位第二列数字(加起来不是100%)代表的是什么?? 11111.png
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聚醚醚酮荧光染色?
本人做 聚醚醚酮 (PEEK)FI-TC荧光染色发现背底很大,什么没有染色的PEEK也会发出强烈的荧光,请各位老师帮忙解答下,谢谢
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现实生活中手性物质的获取?
本人物理学专业,借助化学板块咨询一些手性物质的问题,请教大家,现实生活中有没有比较容易弄到的手性物质?有打算研究一下手性分子的旋光效应,但苦于化学知识的匮乏,请大家不吝赐教~
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空心微球?
请问谁知道韩国有一种微米级,用在化妆品上的 空心微球 。
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有关PCR的问题求助?
急需PCR大神的帮助,刚刚开始PCR设计了一段简并引物,我的目的条带大小是1500bp左右,可是P出来只有500bp,而且条带也很弱,在100bp那里还有比较粗的条带,但是不是很亮,是不是引物二聚体呢?不知道是什么原因,希望朋友能指点一二,不胜感激。 微信图片_20180731215545.jpg
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关于硅溶胶生产中的浮渣问题?
各位前辈好,请问一下硅粉水解法制备 硅溶胶 的生产中,压滤以后滤液放置一段时间以后,会浮出一层灰色的 杂质 ,请问你们是怎么解决这个问题的。目前试了0.5vm的滤袋和精密 过滤器 ,效果都不太理想。求指教
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找文章?
有人知道清华大学李艳梅老师或她实验室的文章怎么找吗?
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析氢LSV曲线不出平台?
请问大家有谁知道电化学析氢LSV曲线为什么会出现图中这种情况,求各位大神指点
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石油分馏(Fractional Distillation of Crude Oil)?
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化学传记:1912年诺贝尔化学奖得主-Paul Sabatier?
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求助无序问题?
晶体精修求助! 本人新手,晶体比较简单,配体如图, 金属盐 是 溴化锌 。 初结构找到了,末端三个 甲基 好像是无序,溴旁边还有一个q峰,搞不懂怎么修,实在解决不了,不知道是什么原因求大神帮忙。 数据已经上传,邮箱1021944685@qq.com。 配体图.png
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黑色染料无法溶解,求助,感谢?
打扰各位,我有一个重要材料,被污染黑了,想把黑色的染料去掉,有机溶剂试过丙酮、 乙酸 乙酯 、四氢 呋喃 ,醇的话能微溶,出来一点淡淡的颜色。 不知道有没有高手能提供一些染料的溶剂配方。感谢
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简介
职业:泉州振戎石化仓储有限公司 - 给排水工程师
学校:陕西银行学校 - 会计电算化
地区:台湾省
个人简介:
只有人们的社会实践,才是人们对于外界认识的真理性的标准。真理的标准只能是社会的实践。
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