western blot 检测NF-κB ,电泳时间大约是多少?NF-κB以前涉及过一点,做的不深,只是做经典的NF-κB信号通路,我的个人经验和体会是:1. 电泳时间从积层胶到分离胶到转膜,大概要2个小时左右,我做的是积层胶90V,分离胶120V,转膜12V干转,2个小时就行了。我也是试过28V湿转的,大概要8小时左右,效果都可以;2.额外的问一下,不知道你用的多少的细胞核蛋白,我个人体会是要收集多点细胞核,比如说2-3个dish的收集,这样有时候会有好的结果;3. 有条件可以辅助免疫荧光技术观察NF-κB的核转位; 4. EMSA、荧光素酶报告基因或者CHIP来看NF-κB的转录活性也可以是很好的佐证,和支持材料,或者是下游的分子。个人体会,大家共同讨论。 查看更多