Recombinant Rat KGF-2能否稳定并延长其作用时间? KGF家族是成纤维生长因子家族 (fibroblast growth factors, FGFs) 的亚族,其主要功能是作为旁分泌因子调控上皮细胞增殖、分化、迁移,与上皮组织的生长和修复密切相关。Recombinant Rat KGF-2也被称为FGF10,是含有208个氨基酸残基的多肽,隶属于FGF家族,结构与KGF相似,能够高亲和力结合FGF-2受体。Recombinant Rat KGF-2受体广泛分布于各种上皮细胞。Recombinant Rat KGF-2可由间质细胞分泌,能有效促进各种上皮细胞的增殖、迁移和分化,并直接作用于上皮细胞,促进伤口边缘细胞再生和修复,或间接刺激其他细胞因子的分泌,促进肉芽组织形成并减少瘢痕的产生,对脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) 引起的急性肺损伤有较强的保护性作用。 Recombinant Rat KGF-2的应用研究 Recombinant Rat KGF-2释放后与上皮组织中特异性表达的受体FGFR2b和FGFR1b结合,主要作为旁分泌因子促进上皮细胞增殖分化、生成血管和维持毛细血管的分子屏障功能。既往研究证实KGF-2对DSS诱导的小鼠结肠炎的保护作用。Miceli等的研究结果显示KGF-2可以降低体重减轻、粪便评分和病理评分,其作用具有剂量依赖性,腹腔注射用药最小起效浓度为1~3mg/kg。Greenwood-Van等的研究则显示5mg/kg腹腔注射的KGF-2可以重建和修复被炎症破坏的电子转运。KGF-2对DSS诱导的小鼠结肠炎肠道黏膜屏障的保护作用及其机制尚待进一步研究。 Recombinant Rat KGF-2的稳定性研究 Recombinant Rat KGF-2蛋白极不稳定,新鲜纯化制备的KGF-2蛋白溶液中降解成分少,但4℃放置一段时间KGF-2蛋白就会完全降解为小分子蛋白带。因此,有必要进行KGF-2蛋白的稳定性研究,寻找合适的增加KGF-2蛋白稳定性的方法和手段。 理化因素:考察不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH 4.0~9.0)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、吉斐氏缓冲溶液)及反复冻融对于KGF-2蛋白稳定性的影响,发现KGF-2蛋白在低温和pH 6.0~7.0中性条件下稳定。高温、偏酸性和偏碱性条件下均不利于KGF-2蛋白稳定。柠檬酸缓冲液有利于r KGF-2蛋白稳定。反复冻融对KGF-2蛋白稳定性影响不明显。但是,也有研究显示,KGF-2蛋白在20mmol·L -1 磷酸盐、pH值6.0缓冲体系下-20℃、4℃、25℃均保持相对稳定,且保持澄清。 PEG化修饰:PEG连接到富含负电荷的戊聚糖多硫酸盐(PPS)和硫酸葡聚糖(DS)上形成聚阴离子络合物,进而与含正电荷的Recombinant Rat KGF-2蛋白结合,以实现稳定KGF-2蛋白的目的。PEG化修饰原理(见图1)。 生物蛋白海绵:生物蛋白海绵具有优良的生物相容性、生物可降解性、止血性、可吸收性和缓释性,并可在温和的条件下加工成各种形状的载体。生物蛋白海绵作为Recombinant Rat KGF-2蛋白的缓释载体,可以使KGF-2蛋白的半衰期延长,在体内发挥有效作用的时间也相应延长,从而能更好的发挥其作用。 参考文献 [1]KGF-2对COPD小鼠保护性作用的免疫学研究.张鸽,常美佳,黄嘉楠. [2]角质细胞生长因子-2对右旋葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎和肠道黏膜屏障的保护作用.黄盈瑜,刘红春. [3]角质细胞生长因子-2(KGF-2)研究进展.杨志伟 查看更多
小鼠甲状腺上皮细胞提取物的应用研究? 甲状腺是人体最大的内分泌腺,具有重要的生理功能。为了进行基因克隆、表达图谱分析以及其他分子生物学实验的研究,研究人员提取了小鼠甲状腺上皮细胞提取物。这种提取物采用酶解法制备,细胞纯度高达90%以上,并且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等有害物质。 甲状腺滤泡是甲状腺的基本结构单位,滤泡外周是一层排列整齐的上皮细胞。甲状腺上皮细胞是甲状腺激素合成和释放的部位,同时具有吸收碘化物的能力。研究人员发现,甲状腺上皮细胞在甲状腺体活动减弱时呈扁平状。这些细胞负责生产和分泌甲状腺激素,对人体的代谢和生长发育至关重要。 小鼠甲状腺上皮细胞提取物的应用 小鼠甲状腺上皮细胞提取物在麻黄多糖治疗自身免疫性甲状腺炎的实验研究中具有潜在的应用价值。研究人员从麻黄中提取麻黄多糖,并通过实验方法观察其对正常小鼠免疫功能的影响和有效剂量。此外,他们还制作了小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型,观察麻黄多糖对EAT小鼠在甲状腺激素、自身抗体、外周血淋巴细胞亚群分析、甲状腺组织病理形态及甲状腺组织蛋白的表达等方面的影响和作用机制。 参考文献 [1]The thyrotropin-releasing hormone receptor:interact ion with TSH and autoantibodies.Rapopart B,Chazenbalk GD,Jaume JC,et al.Endocrine Reviews.1998 [2]Ant i thyroid perox idase ant ibody in patients with autommune thyroid disease:posible identity with antimicrosomal anti body.Pormann L,Hamada N,He inr i ch G,et al.The Journal of Clinical Endocrinology.1985 [3]Osorio Salazar C et al.Ann EndocrinoI Paris.1994 [4]Disfunction of suppressor Tcells in thyroid glands from patlents with graves,disease.Ueki Y,Eguchi K,Fukuda T,et al.The Journal of Clinical Endocrinology.1987 [5]Apoptosis in thyroiddisease:a histochemical study.Tanimoto C,HirakawaS,Kawasaki H,et al.Endocrine Journal.1995 [6]Fas/FasL Ligard up-regulation and Bcl-2 down regulation may be significant in the pathogenesis of Hashimoto‘s thyroiditis.Mitsiades N,Ponlaki V,Kotoula V,et al.Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism.1998 [7]Apoptosis and thyroiditis.Patricia L Arscott,and James R,Baker J r.Clinical Immunology.1998 [8]孟达理.麻黄多糖治疗自身免疫性甲状腺炎的实验研究[D].南京中医药大学,2007. 查看更多
为什么N-氨甲酰谷氨酸在猪的生产性能中起重要作用? N-氨甲酰谷氨酸是N-氨甲酰谷氨酸合成酶(N-acetylglutamatesynthase,NAGS)及5-羧基-吡咯啉合成酶的代谢变构激活剂。然而,在哺乳仔猪的小肠粘膜和肝脏的线粒体中,由于甲酰谷氨酸合成酶的不足,导致N-氨甲酰谷氨酸的合成量不足。因此,N-氨甲酰谷氨酸在调节哺乳仔猪小肠合成瓜氨酸和精氨酸的过程中可能发挥着重要作用。含有N-氨甲酰谷氨酸的饲料可以有效提高猪机体内源性精氨酸的合成,促进猪生长和缓解断奶应激,从而提高其生产性能。 为什么N-氨甲酰谷氨酸在医药和饲料添加剂中有广泛应用? N-氨甲酰谷氨酸是内源性精氨酸产生途径中鸟氨酸生产瓜氨酸的中间体的类似物,因此在医药、饲料添加剂等工业领域中得到应用。氮甲酰氨基酸类衍生物在抗菌治疗领域发挥重要的作用,如作为合成抗菌剂的关键侧链基团发挥生理效应,同时预防高血氨病症方面也起到良好的作用。此外,氮甲酰氨基酸是杂环和肽类物质的十分有用的化学中间体。 国内外研究资料表明,N-氨甲酰谷氨酸作为一种绿色、高效的功能性氨基酸促进剂具有极高的药用价值。在国外,它被用于临床代谢类疾病的治疗,如乙酰谷氨酸合成酶缺乏引起的高血氨症病人的治疗。同时,它也被用于营养强化剂或者保健品,可以显著增加肌肉产量,用于许多流行的健美运动促肌肉增长产品中。此外,N-氨甲酰谷氨酸还有望在罕见遗传性疾病枫糖尿症的治疗中发挥作用。 在国内的研究方向上,N-氨甲酰谷氨酸作为精氨酸内源激活剂,通过机体自身需要来分解、合成提高机体精氨酸含量,改善动物生产和健康的目的饲料活性添加剂。它在调控机体内源性精氨酸的过程中具有明显的效果,体内和体外实验证明,它可以促进日龄仔猪小肠上皮细胞瓜氨酸和精氨酸的合成。因此,在我国进一步研究N-氨甲酰谷氨酸是非常有必要的。 如何制备N-氨甲酰谷氨酸? 一种制备饲料添加剂N-氨甲酰谷氨酸的方法如下: a. 取甲醇20L,谷氨酸0.30kg,加硫酸2L混合,室温(20-25℃以下相同)反应4h,用三乙胺调pH值至8.5,得L-γ-谷氨酸甲酯; b. 将步骤a得到的L-γ-谷氨酸甲酯滴加到2L甲醇和2L二硫化碳的混合液中,一边滴加,一边通入氨气至饱和,在32℃密闭放置42h,在1500Pa压力条件下浓缩除氨后得γ-甲酯-L-谷氨酸-N-氨基酸二胺盐浓缩液; c. 将步骤b得到的γ-甲酯-L-谷氨酸-N-氨基酸二胺盐浓缩液加热至50℃,加入醋酸至pH值为6.5,在2000Pa压力条件下减压除去二硫化碳,此时析出大量结晶,即N-氨甲酰谷氨酸粗品; d. 将步骤c所得N-氨甲酰谷氨酸粗品结晶经活性炭脱色、冷却至室温重结晶得N-氨甲酰谷氨酸成品。 主要参考资料 [1]CN201010028927.8一种饲料添加剂N-氨甲酰谷氨酸的制备方法及应用 [2]N-氨甲酰谷氨酸合成及其生理功能研究 查看更多
酸性罗氏培养基的用途是什么? 酸性罗氏培养基是一种用于结核杆菌的培养、计数、保存、照光试验、药物敏感性测定及菌型鉴定等的培养基。结核杆菌引起的结核病是一种具有强烈传染性的慢性消耗性疾病,可侵入人体的多个器官和系统,其中肺结核最为常见。肺结核通过呼吸道传播,患者咳嗽、打喷嚏、高声谈笑时会将带有结核杆菌的飞沫喷出体外。 如何配置酸性罗氏培养基? 配置酸性罗氏培养基的步骤如下: (一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,并确保所需试剂的纯净。 (二)校正pH值:将称量好的培养基成分放入容器内,加热溶解并补充水分,然后使用精密试纸或酸度计测定pH值,通常调节到pH6.8~8.0的范围内。 (三)过滤:将培养基倒入玻璃漏斗中,通过纱布或滤纸进行过滤,直至透明。 (四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内,每支试管装5mL,三角瓶中装100~150ml,然后用棉塞和牛皮纸包扎好,准备灭菌。 (五)灭菌:常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌,高压蒸汽灭菌比干热灭菌效果更好,因为蒸汽的穿透力强,能够彻底杀死微生物。 酸性罗氏培养基的应用领域是什么? 酸性罗氏培养基广泛应用于临床,特别是用于培养结核分枝杆菌。它是一种固体培养基,以鸡蛋为基础,制作方法简便,价廉,便于观察菌落形态等特点。由于其中添加了抑制普通细菌生长的孔雀绿,所以罗氏培养基上罕见普通细菌的生长。此外,还有对罗氏培养基进行改良的研究,以进一步提高其应用效果。 参考文献 [1]A selective oleic acid albumin agar medium for tubercule bacilli.Mitchison,D.A.,B.W Allen,L.Carrol,J.M.Dickinson,V.R.Aber.J.Med.Microbiol.1972 [2]Diagnostic Methods in Tuberculosis.Ⅱ.Demonstration of M.tuberculosis by Culture.Cummings,M.M.Am.J.Clin.Path.1951 [3][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958 [4][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958 [5]于滨.对罗氏培养基进一步改良的初步研究[D].大连医科大学,2008. 查看更多