做小鼠免疫球蛋白M实验中，需要注意什么?

  小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶联免疫分析

  试剂盒使用说明书

  本试剂盒仅供研究使用。

  检测范围：0.1ng/ml - 4ng/ml

  使用目的：

  本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白 M(IgM)含量。

  实验原理

  本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白 M(IgM)，再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白 M(IgM)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)浓度。

  计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

  注意事项

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔D一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，

  计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物请避光保存。

  7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9.本试剂不同批号组分不得混用。

  保存条件及有效期

  1.试剂盒保存：;2-8℃。

  2.有效期：6 个月

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