该细胞株的名称是BRL-3A,属于大鼠肝细胞,经过种属鉴定确认。
细胞来源于肝脏组织,具有贴壁生长特性。
细胞形态呈现上皮细胞样。
该细胞的生物安全等级为1。
生长培养基的配方为DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)。
推荐的传代比例为1:2-1:4。
推荐的换液频率为每周2~3次。
冻存条件为冻存液: 55%基础培养基+40%FBS + 5%DMSO,存放在液氮中。
细胞的培养条件为气相:空气, 95%; CO2, 5%;温度: 37°C。
该细胞株由RCB机构(RCB0273)进行保藏。
收到细胞后,首先用75%酒精喷洒整个管子进行消毒,然后将小管中的细胞转移到T25培养瓶或6cm培养皿中(无需离心),加入约5ml含FBS的培养基,放入培养箱中过夜培养。之后,检查细胞的汇合度:如果汇合度未超过80%,则继续换液并继续培养,根据需要进行传代或冻存。如果汇合度超过80%,则可以直接进行传代(采用细胞贴壁处理方法)。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗涤1-2次。
2. 在培养瓶中加入1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA),将培养瓶倒置放入37℃培养箱中预热1-3分钟,然后将培养瓶翻转,使胰酶与细胞接触10-30秒,通过倒置显微镜观察细胞的消化情况,如果大部分细胞变圆,则迅速将培养瓶取回操作台,在轻轻敲击培养瓶后加入少量完全培养基以终止消化。
3. 补充6-8ml完全培养基,轻轻混合后吸出一半,分装到新的培养瓶中。一般情况下,收到细胞后的第一次传代是一传三。
[1] 姚娟娟,周晓蓉,牛廷勇;单壁碳纳米管对大鼠肝细胞株BRL-3A的毒性作用。《毒理学杂志》。