真皮微血管内皮细胞的提取及应用？

背景^[1-3]

人真皮微血管内皮细胞是从真皮组织中提取的原代冻存细胞。经过免疫荧光染色验证，这些细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

皮肤血管主要由多种细胞和非细胞物质组成，其中内皮细胞是主要的细胞类型。内皮细胞不仅是血管内腔和血管外的分界，还起到细胞和大分子物质扩散的选择性屏障作用。与其他内皮细胞相比，皮肤微血管内皮细胞具有自身的特点，如参与创伤愈合、止血、温度调节和炎症调整等生理过程。内皮细胞的结构和功能在不同的时间和空间会发生变化，通过增殖、休眠、凋亡和老化等细胞状态来维持和重塑皮肤微血管。

真皮是位于表皮深层的组织，与皮下组织相连。真皮由胶原纤维和弹性纤维交织在一起的结缔组织构成，具有弹性和韧性。真皮微血管内皮细胞在炎症反应、肿瘤生长和创面愈合过程中起着重要作用。然而，由于真皮微血管内皮细胞的体外分离培养技术困难，相关研究受到限制。

应用^[4][5]

如何提取人真皮微血管内皮细胞并建立低氧后处理模型？

我们采用酶消化和磁珠分选的方法提取人皮瓣微血管内皮细胞，并确定了低氧后处理的最佳缺氧和复氧时间，建立了低氧后处理模型。

通过酶消化和磁珠分选法，我们成功得到了人真皮微血管内皮细胞(HDMECs)，并进行了体外培养。通过免疫荧光和流式细胞学鉴定，我们确认了细胞的特征。我们还检测了乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化、细胞凋亡率以及相关蛋白的表达。

结果显示，经过4天的培养，我们观察到散在的细胞集落，周边有成纤维状细胞生长。经过7天的培养，细胞呈铺路石样排列。经过第二次磁珠分选后，细胞呈紧密排列的漩窝状或同心圆状外观，呈铺路石样排列。流式细胞鉴定结果显示，CD309阳性率为95.4%，CD34阳性率为42.5%。

参考文献

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[3]An in vitro model of warm hypoxia–reoxygenation injury in human liver endothelial cells[J].Neal R.Banga,K.Raj Prasad,J.Lance Burn,Shervanthi Homer-Vanniasinkam,Anne Graham.Journal of Surgical Research.2012(1)

[4]Quantitative histological assessment of hepatic ischemia-reperfusion injuries following ischemic pre-and post-conditioning in the rat liver[J].Journal of Surgical Research.2012

[5]鲁昆.人真皮微血管内皮细胞的提取及其低氧后处理模型的建立[D].南华大学,2015.