准确检测白芥子中对羟基苯乙腈的含量对于质量控制和药物疗效评估至关重要。

背景：对羟基苯乙腈广泛存在于中药炒白芥子中，是一种重要的医药中间体。白芥子为2010版《中国药典》收载中药，为十字花科(Cruciferae)芥属植物白芥(Sinapis alba L．)的干燥成熟种子，辛，温，归肺经，具有温肺豁痰利气、 结、通络、止痛等功效。

关于白芥子中对羟基苯乙腈含量的变化

1. 炒制前后白芥子中对羟基苯乙腈含量的变化

杨雪萍等人对白芥子按照2005年版《中华人民共和国药典》规定的清炒法进行炒制,得到5 min和10 min的炒制品,然后对生、炒白芥子用石油醚脱脂,再用乙醇提取。采用RP-HPLC测定白芥子生品和炒制品中对羟基苯乙腈的含量。实验方法为：

（1）炒制品的制备

取净白芥子,置炒制容器内,用文火加热,炒至表面呈黄色,有爆裂声,并放出香辣气味,取出,放凉。作者分别制备了5min和10min炒制品。取生白芥子与炒制品各20g,粉碎,置具塞瓶中,加入石油醚脱脂,过滤,药渣用体积分数为95%乙醇回流提取3次,合并提取液;浓缩至无醇味,得其浸膏。

（2）对照品溶液的制备

精密称取对羟基苯乙腈对照品,加甲醇溶解,并定容至50 mL容量瓶中,得质量浓度为5.0g·L-1的溶液,备用。

（3）色谱条件

色谱柱为Luna 5uPheny1-Hexy1(250mm×4.60mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比为35∶65)流速为0.6 mL·min-1,检测波长为287nm,柱温为室温。对照品和样品的色谱图见图。

结果为白芥子生品所得浸膏中对羟基苯乙腈的含量质量分数是0.76%,5 min白芥子炒制品所得浸膏中对羟基苯乙腈的含量质量分数为16.53%,10 min白芥子炒制品所得浸膏中对羟基苯乙腈的含量质量分数是21.44%。结果表明炒制可导致白芥子中对羟基苯乙腈的含量显著增加。

2. 不同炮制时间对白芥子中对羟基苯乙腈含量的变化影响

李怡萱等人建立了超高效液相色谱法（UPLC）同时测定炒白芥子中有效成分（羟基苯乙腈和芥子碱硫氰酸盐）含量的方法，探究不同炮制时间对白芥子中活性成分含量的影响。方法：采用UPLC法与色谱柱为Waters BEH C1 8 色 谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7μm），以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱，检测波长为222 nm，流速为0.3 mL/min，柱温为25℃，进样量为2μL，测定其白芥子中对羟基苯乙腈和芥子碱硫氰酸盐的含量。色谱条件和溶液配制具体如下：

2.1 色谱条件

色谱柱为Waters BEH C18 色谱柱（2.1 mm× 100 mm，1.7μm）；流动相为乙腈（A）-0.02 mol/L 磷酸二氢钾水溶液（B），依照表1进行梯度洗脱， 并在检测波长222 nm，流速为0.3 mL/min，柱温为25℃，室温为15℃下，进样量2μL，按WatersAcquity H-class型超高效液相色谱仪说明书中方法 测定其含量。详见表1。

2.2 溶液的制备

（1）对照品溶液的制备

分别取对羟基苯乙腈、芥子碱硫氰酸盐对照品适量，精密称定，置于20 mL 容量瓶中，加50%甲醇液溶解，定容至刻度，即得各成分单一对照品储备液，备用。精密移取上述对照品储备液各1 mL，置于同 一5 mL容量瓶中，加50%甲醇液稀释，定容至刻度，即得对羟基苯乙腈浓度63.07μg/mL和芥子碱硫氰酸盐147.18μg/mL的混合对照品溶液。

（2）供试品溶液的制备

取炒白芥子样品粉末（过4号筛）0.3 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加 50%甲醇液25 mL，称定其质量，超声提取30 min，取出放冷，再次称其质量并用50%甲醇液补足其原有质量，摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

（3）空白对照溶液的制备

以50%甲醇液为空白对照溶液。

结果：羟基苯乙腈和芥子碱硫氰酸盐浓度分别在0.006 307~0.1 577μg/mL（r2=1，n=6）、0.01 472~0.3 680μg/mL（r2=1，n=6）范围内呈良好的线性关系。该炒白芥子的含量测定方法，操作简单，结果准确，具有较好的可重复性和稳定性，为炒白芥子饮片的质量控制提供依据。

参考文献：

[1]李怡萱,盛一梁,吴嫣等. 基于超高效液相色谱定量测定法探究不同炮制时间对白芥子中有效成分含量的影响 [J]. 抗感染药学, 2021, 18 (03): 316-320. DOI:10.13493/j.issn.1672-7878.2021.03-003.

[2]冯宝民,邱琳,谌启鹏等. 基于炮效关系研究白芥子镇咳药效物质基础 [J]. 中国药理学通报, 2010, 26 (09): 1173-1176.

[3]杨雪萍,王惠国,冯宝民等. 白芥子炒制前后对羟基苯乙腈含量的变化 [J]. 沈阳药科大学学报, 2010, 27 (08): 623-625. DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2010.08.009.