生物医学工程

IRS－1的western为什么这么难?

在做IRS-1（胰岛素受体底物－1）的western，按说明书推荐一抗1:1000（cell signaling)稀释，空白一片；再用1:500稀释，仍为空白！！请战友指教。多谢！！转膜和二抗都没问题。

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绅士

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爱我吗

，销售 2019-03-09回答

我也做过这个蛋白，但是这个蛋白很好出来的，不难啊，我用的是1：700的稀释，二抗为抗兔的抗体，条带很清楚，几乎没有背景。我觉得可能和抗体有关系，我用的是upstate公司的抗体

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温文尔雅

，设备维修 2019-03-09回答

这个蛋白很难杂的，分子量太大，转膜最好用湿转。不过，我建议你最好做IP，然后杂，这样问题就不大了。

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君踏桃花归

，实验员 2019-03-09回答

如果有好的抗体卖，就换一个抗体做，不要犹豫，少数情况下，找不到任何好的抗体的情况下，或者某些细胞内目的蛋白含量特别低，考虑做IP。

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