elisa常规指标实验常见问题——白介素

  elisa试剂盒在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现elisa标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

  白介素elisa试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面，分析白介素elisa试剂盒试验操作中的一些常见问题：

  一、选择试剂

  选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

  二、加样

  可能原因：

  1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;

  2)手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);

  3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

  解决办法：

  1) 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

  2) 加样后及时放入孵箱。

  3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

  4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

  5) 标本较多时，请分批操作。

  三、 孵育

  可能原因：

  1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*;

  2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。

  解决办法：

  1) 贴封片或加盖;

  2) 按说明步骤严格控制操作时间。

  四、洗板

  ELISA试剂盒可能原因：

  1) 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。

  2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*;洗板针堵塞，抽吸不*;洗板不畅，导致洗板效果差。

  3) 反应板过多造成洗板等待时间长。

  解决办法：

  1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干。

  2) 合理安排，或多用几台洗板机。

  五、显色

  可能原因：

  1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;

  2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。

  解决办法：

  1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

  2) 加样时保持显色剂不外流。

  3) A、B液应避免接触金属器械。

  六、终止

  可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。

  七、读板

  如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。

  白介素试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。