背景^[1-3]

BLUE-BANDIT蛋白染色液是一种新型的PAGE胶染色试剂，采用考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行染色。与传统染色液相比，BLUE-BANDIT不含有毒或刺激性物质，且无需脱色步骤。它具有蛋白固定、蛋白染色和非蛋白区域着色屏蔽等功能，染色分辨率与传统方法相当。此外，染色的蛋白带或蛋白点可进行高效电洗脱，非常适用于蛋白质谱分析。

在实验室中，考马斯亮蓝染色法被广泛用于对凝胶上分离的蛋白进行染色。它不仅克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，而且比银染更简便易操作。目前，常用的考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中，考马斯亮蓝G250常用于蛋白质含量的测定，因为它与蛋白质结合反应十分迅速。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应较缓慢，但可以被洗脱下去，因此适用于对电泳条带的染色。

染色步骤

1）将电泳完毕的SDS-PAGE或native-PAGE胶（约10×10cm，厚度小于1mm）剥下，放入微波炉加热的带盖塑料盒中（注意：一定要有盖以防止水汽蒸发过度）；

2）加入50ml BLUE-BANDIT染色液，放入微波炉中高火加热1分钟，然后取出放在水平摇床上，中速震荡3-5分钟。倒掉染色液；

3）再加入50ml新的染色液，高火加热1分钟，接着用低火加热染色3-8分钟；

4）倒掉染色液，用清水冲洗掉残余染色液即可观察或拍照。如果在旋转摇床上进行染色，可多次用清水漂洗，以彻底去除微弱背景。

应用^[4][5]

BLUE-BANDIT蛋白染色液在大豆疫霉菌株可溶性蛋白和酯酶同工酶电泳分析中的应用

大豆疫霉(Phytophthora sojae)是一种重要的植物病原卵菌，它是大豆疫病的病原菌，对大豆生产造成严重经济损失。之前的研究表明，大豆疫霉的致病力存在分化，可以划分为不同的致病型或小种。然而，关于大豆疫霉的可溶性蛋白和酯酶同工酶电泳图谱与致病型或小种的关系目前知之甚少。

为了研究不同大豆疫霉菌株的遗传差异，我们使用BLUE-BANDIT蛋白染色液结合SDS-PAGE和PAGE电泳技术对34株不同来源的大豆疫霉菌体进行了分析。通过构建树状聚类图，我们发现大豆疫霉的可溶性蛋白图谱与地理来源存在一定的相关性。

这些研究结果为利用可溶性蛋白和酯酶同工酶电泳分析进行大豆疫霉菌种下分类及致病型鉴定提供了可能性。同时，这也为大豆疫霉抗病品种的选育、合理使用以及大豆疫霉的综合治理提供了试验基础。

参考文献

[1] A Molecular Phylogeny of Phytophthora and Related Oomycetes[J]. D.E.L.Cooke, A.Drenth, J.M.Duncan, G.Wagels, C.M.Brasier. Fungal Genetics and Biology. 2000(1)

[2] Expanding the glycoengineering toolbox: the rise of bacterial N-linked protein glycosylation[J]. Jenny L.Baker, Eda?elik, Matthew P.DeLisa. Trends in Biotechnology. 2013(5)

[3] Rhodamine‐Inspired Far‐Red to Near‐Infrared Dyes and Their Application as Fluorescence Probes[J]. Yuan‐Qiang Sun, Jing Liu, Xin Lv, Yunlong Liu, Yun Zhao, Wei Guo. Angew.Chem.Int.Ed.. 2012(31)

[4] Functional protein microarray: an ideal platform for investigating protein binding property[J]. Shu-Min Zhou, Li Cheng, Shu-Juan Guo, Heng Zhu, Sheng-Ce Tao. Frontiers in Biology. 2012(4)

[5] 闫立润. 新型氧杂多环荧光染料的合成及其在蛋白染色中的应用[D]. 西北大学, 2018.