本文旨在探讨如何有效地检测和应用4，6－二氯－2－(丙硫基)－5－氨基嘧啶。

背景：替格瑞洛是一种选择性P2Y12受体抑制剂，属于新型环戊基三唑嘧啶类口服抗血小板药物，可有效抑制新血凝块的形成，适用于治疗动脉粥样化血栓患者。4，6－二氯－2－(丙硫基)－5－氨基嘧啶（DCPA）是替格瑞洛的原料之一，可能存在工艺杂质5－硝基－2－(丙硫基)嘧啶－4，6－二醇（DHPN）。DCPA和DHPN结构中含有基因毒性杂质警示结构，如含芳杂环的一级芳胺和硝基取代芳香化合物。DCPA的氨基和DHPN的硝基邻位均为双取代基团，DCPA和DHPN可视为一般杂质。在替格瑞洛合成工艺中，DCPA和DHPN可能残留，使替格瑞洛成品有基因毒性杂质的风险。基因毒性杂质又称致突变杂质，能引起DNA损伤，导致DNA突变。

检测：王庆鹏等人建立LC－MS/MS法检测替格瑞洛中基因毒性杂质4，6－二氯－2－(丙硫基)－5－氨基嘧啶 (DCPA)的方法，采用Ultimate®UHPLC XB－Phenyl 色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.8μm)，以0.1%甲酸溶液为流动相A，0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.3 m L·min－1 ，柱温为40℃;采用AB SCIEX Exion LC－QTRAP5500三重四极杆串联离子阱液质联用仪进行检测，电喷雾离子源(ESI+)、多反应监测模式(MRM)，定量离子对为m/z 240.1→197.8(DC PA)、m/z 232.2→213.9(DHPN)。

DCPA质量浓度在0.10～16.1 ng·m L－1 范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9);检测限为0.03 ng·m L－1 ，定量限为0.10 ng·m L－1 ，平均加样回收率为97.5%(RSD= 9.9%，n=9);DHPN质量浓度在0.20～16.1 ng·m L－ 1 范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 5)，检测限为0.06 ng·m L－ 1 ，定量限为0.20 ng·m L－1 ，平均加样回收率为98.1%(RSD=1.5%，n=9)。对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液中DCPA和DHPN室温放置24 h内稳定。3批替格瑞洛样品(批号 Q19010701G、Q19010702G、Q19010703G)中均未检测到DCPA的含量依次为1.2、1.1和1.1μg· g－ 1 ，均符合规定。

该方法简便、准确、可靠，可用于替格瑞洛中DCPA的检测。

应用：制备替卡格雷。具体步骤如下：

(1)化合物VII在溶剂中，碱作用下，与化合物LCH2CH2OR发生亲核取代反应制备化合物VI；溶剂为四氢呋喃或者N，N-二甲基甲酰胺或者二乙醚或者二异丙醚或者甲基叔丁基醚或者苯或者甲苯或者二甲苯中的一种或者几种；强碱为叔丁醇钾或者氢化钠或者叔戊醇钠；L为氯或者溴或者碘；

(2)化合物VI在溶剂中，加入重金属催化剂，加压氢化脱Cbz保护得到化合物V：溶剂为甲醇或者乙醇或者异丙醇或者正丁醇或者叔丁醇或者四氢呋喃中的一种或者几种；重金属催化剂为钯碳或者氢氧化钯；

(3)化合物V在溶剂中，加入适当的碱，在高温条件下与4，6-二氯-2-(丙硫基)-5-氨基嘧啶反应得到化合物IV：溶剂为甲醇或者乙醇或者异丙醇或者正丁醇或者叔丁醇或者四氢呋喃中的一种或者几种；碱为氢氧化钠或者氢氧化钾或者氢氧化锂或者三(C1-6)烷基胺类；高温条件为100℃-180℃；

(4)化合物IV在水中，加入酸，与碱金属的亚硝酸盐反应得到化合物III：酸为甲酸或者醋酸或者稀盐酸或者稀硫酸中的一种或者几种；碱金属的亚硝酸盐为亚硝酸钠或者亚硝酸钾；

(5)化合物III在溶剂中，加入碱，与(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)环丙胺反应得到化合物II：溶剂为甲醇或者乙醇或者异丙醇或者正丁醇或者叔丁醇或者乙腈中的一种或者几种；碱为三(C1-6)烷基胺类；

(6)化合物II在溶剂中，加入脱保护试剂，脱保护基得到化合物I：溶剂为甲醇或者乙醇或者异丙醇或者正丁醇或者叔丁醇或者四氢呋喃中的一种或者几种；脱保护试剂为三氟乙酸或者盐酸；其中，R为三乙基硅基或者叔丁基二甲基硅基或者叔丁基二苯基硅基或者甲氧甲基或者四氢吡喃基或者四氢呋喃基。

参考文献：

[1]王庆鹏;骆献丽;陈晓英;李原;张明辉;刘山崎. LC-MS/MS法检测替格瑞洛原料药中4,6-二氯-2-(丙硫基)-5-氨基嘧啶和5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶-4,6-二醇 [J]. 药物分析杂志, 2022, 42 (10): 1822-1830. DOI:10.16155/j.0254-1793.2022.10.16

[2]张燕梅;卢丽霞;折宇婷;陈乐文;吴华敏;谭洁梅;余邦伟. 替卡格雷中间体4,6-二氯-5-氨基-2-丙硫基嘧啶的合成 [J]. 化学试剂, 2014, 36 (07): 667-669. DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2014.07.022

[3]上海皓元化学科技有限公司. 一种替卡格雷的制备方法:CN201210146500.7[P]. 2012-09-19.