在研究结肠癌时，科学家使用了一种名为RKO-E6的细胞系。这种细胞系是通过脂质体法将pCMV-E6转染到结肠癌RKO细胞中得到的。RKO-E6细胞含有人乳头状病毒（HPV）E6癌基因，该基因受巨细胞病毒启动子的控制。这种细胞系可以与其母系RKO一起用于研究p53缺失引起的细胞参数改变、p53介导的转录和凋亡等。

这种细胞系是从人体中提取的，并且性别未知。它的来源是结肠癌，转染插入到pCMV中的HPV E6。这种细胞系的形态是上皮细胞。

如何培养RKO-E6人结肠癌转基因细胞？

细胞传代：

1）当细胞生长至培养瓶表面的80%时，将培养液倒掉，用PBS清洗细胞一次。

2）向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移到15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）倒掉上清液，用12ml完全培养基重悬细胞，按1:2的比例进行分瓶传代，然后放入37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

4）等待细胞完全附着在培养瓶上后，观察培养结果，然后进行换液培养或传代。

细胞冻存：

1）当细胞生长至培养瓶表面的80%时，将培养液倒掉，用PBS清洗细胞一次。

2）向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移到15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）将细胞重悬于适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）中，并放入冻存管中。

4）首先将细胞冻存管放置于-20℃，1.5小时，然后将其移入-80℃过夜，24小时后转入液氮中进行长期保存。也可以使用程序降温盒直接放入-80℃。

细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

2）将冻存管中的细胞转移到含有5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）倒掉上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，接种到25cm²培养瓶中，在37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

4）第二天，继续使用新鲜的完全培养基进行培养。

主要参考文献

[1] Hyun Kyung Lim, Woori Bae, Hyi-Seung Lee, Joohee Jung. Anticancer Activity of Marine Sponge Hyrtios Sp. Extract in Human Colorectal Carcinoma RKO Cells With Different p53 Status. Biomed Res Int.