普瑞色替（Prexasertib），又称LY2606368，CAS号为1234015-52-1，是一种高效、选择性的ATP竞争性Chk1抑制剂，其Ki值为0.9 nM，对CHK1和CHK2的IC50值分别为<1 nM和8 nM。那么，普瑞色替的生物活性是什么？如何进行实验呢？下面将详细说明。 首先，我们来介绍普瑞色替的生物活性： 1）体外活性 普瑞色替是一种有效且选择性的Chk1抑制剂，其IC50值小于1 nM，并且还能抑制CHK2，其IC50值为8 nM。普瑞色替通过丝氨酸296的自磷酸化对CHK1活性具有1 nM的EC50，对于HT-29CHK2自磷酸化具有小于31 nM（S516）。普瑞色替能有效地消除p53缺陷型HeLa细胞中多柔比星激活的G2-M检查点，其EC50为9 nM。 然而，100 nM的普瑞色替不会抑制PMA刺激的RSK，而是会弱刺激丝氨酸235/236上S6的磷酸化。普瑞色替对U-2 OS、Calu-6、HT-29、HeLa和NCI-H460细胞系的IC50分别为3 nM、3 nM、10 nM、37 nM和68 nM。普瑞色替（4 nM）能够导致细胞周期从G1和G2-M向S期的大幅度转变，并伴随着U-2 OS细胞中H2AX的磷酸化诱导[1]。 普瑞色替（25 μM）表现出对AGS和MKN1细胞增殖的抑制活性。普瑞色替（20 nM）能够抑制HR修复能力的DR-GFP细胞。普瑞色替（5 nM）与PARP抑制剂BMN673联合使用，在胃癌细胞中显示出协同抗癌作用[2]。 2）体内活性 普瑞色替（15 mg/kg，s.c.）能够显著抑制异种移植肿瘤模型中的肿瘤生长，且动物体重减轻较少[1]。普瑞色替（2 mg/kg，s.c.）与BMN673的组合在胃癌PDX模型中具有协同抗癌作用，其效果优于单独使用任何一种药物[2]。 我们已经了解了普瑞色替的生物活性，接下来介绍如何进行活性实验。一般来说，有以下两种方法： 1）细胞实验 通过MTS细胞增殖比色测定试剂盒检测Chk1的消融、IR敏感性、BMN673和普瑞色替的抗癌作用的增殖抑制作用。将细胞接种到96孔细胞培养板中，然后按照指定的实验条件处理，接着向每个孔中加入20 μL的MTS试剂，培养2小时后，使用酶标仪以490 nm的波长检测每个孔的细胞活力[2]。 2）动物实验 使用雌性CD-1 nu-/nu-小鼠（26-28g）进行实验。首先，在每只受试动物的后胁腹部皮下注射1×106Calu-6细胞，以开始肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150 mm3时，根据肿瘤大小和体重将动物随机分组，并将其置于各自的治疗组中。 通过皮下注射200 μL的20% Captisol pH4或普瑞色替载体进行给药。给药后的4、8、12、24和48小时，通过心脏穿刺采集血液，用于测定血浆中的药物暴露，并使用Sciex API 4000 LC/MS-MS系统进行分析。迅速取出并准备异种移植组织。通过免疫印迹分析裂解物中的蛋白质磷酸化水平。使用Kronos计算组均值、标准误差和P值。 通过以上实验方法，我们可以了解普瑞色替的生物活性和抗肿瘤效果。 综上所述，普瑞色替（Prexasertib）是一种具有潜在抗肿瘤活性的检查点激酶1（Chk1）抑制剂。它的靶点活性主要针对Chk1和Chk2。