大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA，这种状态下的细胞被称为感受态细胞。OrigamiB(DE3)菌株含有突变的还原酶基因，能够增强蛋白的可溶性和正确折叠。该菌株还能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，适用于多种质粒的蛋白表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞的转化效率达到了很高的水平。

操作方法

1. 将OrigamiB(DE3)感受态细胞从-80℃取出，迅速放入冰中，等待菌块融化后加入目的DNA并轻轻混匀，然后在冰上静置25分钟。

2. 将混合物置于42℃水浴中加热45秒，然后迅速放回冰上静置2分钟。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基，混匀后在37℃、200rpm下复苏60分钟。

4. 以5000rpm离心1分钟，留取约100μl上清液，轻轻吹打重悬菌块并涂布到含有相应抗生素的培养基上。

5. 将平板倒置放在37℃培养箱中过夜培养。

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

注意事项

1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞，加入目标DNA的时间不宜超过8分钟，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒时，可以减少最终涂板的菌量。

4. IPTG的浓度可以根据需要选择(0.1-2mM均可)。

5. 为了获得所需的蛋白，最佳的诱导时间、温度和IPTG浓度需要进行优化。

主要参考资料

[1] OrigamiB(DE3)感受态细胞说明书