微生物培养基是微生物检测中的重要组成部分。在过去实验室往往是自制培养基使用,但是随着社会的发展,现在大多数的实验室已经完全用商品化培养基代替了自制,这样一来大大减少了工作量并且保证了质量的稳定。但是我们作为使用者,依然需要对培养基的基本成分的作用机理进行了解.
微生物生长所需要的营养物质主要以相对应的有机物与无机物的形式存在。这些营养物质按照它们在微生物机体中的生理作用不同,区分成碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六大类.
其中,化能异养型微生物的能源和碳源都来自于有机物,利用有机物的氧化分解产生能量进行生长.
化能自养型微生物以二氧化碳为碳源,利用无机化合物氧化过程中释放出的能量进行生长.
霉菌酵母菌计数常用的培养基是孟加拉红(虎红)培养基,其中加入了一定量的氯霉素可有有效地抑制绝大多数细菌菌落的生长.
以检测霉菌酵母菌的孟加拉红培养基为例:
1、琼脂(agar):一种多糖分子化合物,(C12H18O9)n,胶体,冷却至40℃开始逐渐凝固,在微生物培养基中被用作凝固剂,来改变培养基的物理性状(固体或半固体),其本身不被细菌分解利用,也无营养作用.
2、水分,微生物需水量随种类不同而不同,而它们的繁殖与培养基中的水分活性有关,水分活性越低,繁殖越差,一旦水分活性低于某种水平时,整个繁殖就停止.因此配置培养基时,水分与培养基配比要准确,倾注平板的量不宜过少.
3、为避免培养基PH变化对微生物生长造成影响,需要在培养基中加入缓冲剂。培养基的pH必须控制在合适的范围内,以满足不同类型微生物的需要.
例如,酵母菌和霉菌生长所需的适宜pH在3.8~6.0范围,但是,随着营养物质被逐渐分解,微生物不停的生长繁殖和代谢,培养基的pH会开始变化,因此,为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基中加入pH缓冲剂,如上述的磷酸二氢钾.磷酸二氢钾呈弱酸性,当培养基中碱性物质积累导致OH-浓度增加时,OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基pH就不会过度升高.
4、注意各种营养物质的浓度与配比(如碳氮比),营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用.以葡萄糖为例,低浓度时,随着剂量的增加甚至可以干扰某些抑菌剂的抑菌作用,但是高浓度时,反而会起到抑菌效果.
5、抑菌成分的抑菌作用并非百分之百,因为必须考虑到高浓度的抑菌剂的效果会“不分敌我”,所以在这种情况下采用抑制非目标菌的剂量往往不会最优.
孟加拉红培养基中的氯霉素,并不能完全抑制细菌的生长,少量种类的细菌会在孟加拉红培养基上生长良好,并且会通过孟加拉红的染色成为粉红色,外观上与酵母菌无异.所以当我们检测食品时发现了“酵母菌”,请不要忘记做镜检确认.