从手中的书和文献中并没有看到,IP实验为什么要用IgG做阴性对照。
IP的方法是,如果测B是否和A有相互BINDING,那么固定细胞、裂解细胞、离心并提取蛋白后,加入抗A的一抗,然后加入抗一抗的珠子,然后离心,然后测蛋白浓度,然后western,然后在膜上加抗B的一抗,然后加抗这个一抗的二抗,然后显影。
问题一,我上述方法是否表述正确?问题二,如果上述所有一抗均为来源于兔的,那么对照用的IgG是否必须是正常兔的?是否是直接从公司买的?问题三,IgG在哪一步加入,替代了什么?谢谢!
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