4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）是一种常用的荧光染料，广泛应用于细胞凋亡检测和细胞核染色。它具有高荧光效率和对活细胞无毒副作用的特点。

制备方法

步骤(1)：制备6-氰基吲哚

在室温下，将6-氯吲哚、乙二醇二乙醚、氯化镍、三氯化铝、4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶、锌粉和甲酰胺依次加入反应瓶中，搅拌均匀。然后在100℃下反应10小时，过滤除去不溶物，蒸馏回收溶剂，得到6-氰基吲哚。

步骤(2)：制备6-氰基-2-(4’-氰基苯基)吲哚

将6-氰基吲哚和N,N-二甲基乙酰胺加入反应瓶中，搅拌均匀。然后加入4-氯苯甲腈、醋酸钾和氯[1,3-双(2,6-二异丙苯基)咪唑-2-亚基]铜(I)，加热反应6小时。冷却后，蒸馏回收溶剂，用乙酸乙酯洗涤，得到6-氰基-2-(4’-氰基苯基)吲哚。

步骤(3)：制备4’,6-二(甲亚胺酸苄酯)-2-苯基吲哚二盐酸盐

将苄醇和乙酰氯在0℃下反应，然后加入6-氰基-2-(4’-氰基苯基)吲哚，保温搅拌12小时。该反应液直接进行下一步反应。

步骤(4)：制备4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐

将上一步反应液中滴加氯化铵和乙醇的混合液，加热反应6小时。冷却后，过滤得到黄色固体，洗涤并冻干，得到4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐。

以上是制备4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐的详细步骤。

参考文献

[1] [中国发明] CN202110294976.4 4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐的制备方法