二苯胺是一种带有花香的固体结晶有机化合物,常见颜色为灰白色、棕褐色或棕色/琥珀色。它主要用于合成橡胶抗氧化剂、染料、医药中间体、润滑油抗氧化剂和火药稳定剂。本文将介绍其在DNA鉴定中的应用。
1、称取1.5g二苯胺,溶于100mL冰乙酸中。
2、在溶液中加入1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
3、临用前,在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。
4、二苯胺试剂要现配现用,以保证实验效果。
DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛,后者再和二苯胺试剂作用呈现蓝色。加热有利于增强二苯胺试剂对DNA检测的敏感性。加入二苯胺试剂后,需进行沸水浴处理5分钟以上,待冷却后观察结果。
溶液蓝色的深浅与DNA含量有关,可加入适量乙醛提高反应灵敏度。DNA与二苯胺试剂反应后的溶液对595nm波长的光有最大吸收峰,吸光度与DNA含量成正比,可用于测定DNA含量。