双抗夹心ELISA试剂盒的步骤是什么?
(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。
ELISA试剂盒本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。
(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体,经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。
ELISA试剂盒 经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b,
而这次加入的抗体b于*次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的,
但不是用同种动物免疫制备的,否则可出现非特异性反应。
经孵育洗涤后,再加酶标记抗b抗体,再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。
这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。
因此,放大的倍数高,故比双抗体夹心法加灵敏。
ELISA试剂盒 同时避免标记特异性抗体,而另一优点是只要标记一种抗抗体,即可达到多种应用。
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