如何制备蛋白A-琼脂糖凝胶黄曲霉毒素B1免疫亲和柱?

琼脂糖蛋白A是一种用于科学研究的凝胶。

制备过程

通过将琼脂糖蛋白A凝胶与单抗配基进行定向偶联，成功制备了AFB1免疫亲和柱。单抗偶联率达到了98.1%。在48μL纯化抗体偶联的情况下，平均相对柱容量为105ng/0.125mL凝胶。柱空白测试结果表明，琼脂糖蛋白A空白凝胶对AFB1没有非特异性吸附。不同样品的添加回收实验表明，较小的柱体积可以满足样品中AFB1的净化需求。偶联时，对单抗纯度的要求不高。从偶联后的反应液电泳结果可以看出，条带为杂蛋白，且有效单抗全部偶联在蛋白A上。这表明，该方法对单抗纯度没有过高的要求。由于琼脂糖蛋白A对IgG1有特异性结合，因此辛酸-饱和硫酸铵初步纯化抗体即可满足偶联要求。

定向偶联过程中，单抗的有效利用率为52.7%。将纯化好的单抗与溴化氰活化的4FF葡聚糖偶联，制备抗ZEN单克隆抗体免疫亲和柱。固载350μg ZEN单克隆抗体的容量为0.40μg，因此抗体的有效利用率为26.93%。通过比较不同偶联方法制备真菌毒素亲和柱的单抗有效利用率，发现琼脂糖蛋白A凝胶的定向偶联效果是溴化氰活化随机偶联的1.96倍。这与报道的MG31-rproteinA-SepharoseFF的抗原结合容量是MG31-CNBr-Sepharose4B抗原结合容量的1.8倍的结论相一致，说明定向偶联有助于提高免疫亲和吸附剂的抗原结合容量。下一步的研究方向是优化定向偶联过程中的交联条件，并比较两种偶联方法制备AFB1免疫亲和柱的效果。

主要参考资料

[1] 基于蛋白A-琼脂糖凝胶黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备