丙烯酰胺-13C3，也称为13C3-丙烯酰胺，是一种用于测定丙烯酰胺的化合物。

丙烯酰胺的应用

丙烯酰胺是一种常见的有机合成原料，化学分子式为CH2CHCONH2。它是一种易溶于水的无色透明片状结晶，在工业上有广泛的应用。世界卫生组织（WHO）认为丙烯酰胺的致癌风险性超过10-5，指导值为0.5ug/L。自2002年瑞典科学家发现淀粉类食品在高温加工过程中会产生大量丙烯酰胺后，引起了全球的广泛关注。

一项名为CN201610319641的中国发明提供了一种测定绿茶中丙烯酰胺的方法：

(1)样品前处理：

首先，将粉碎后的绿茶样品加入甲酸和同位素标记的丙烯酰胺标准溶液，混匀后在30-90℃的水浴中振荡10-60分钟。然后加入乙腈、硫酸镁和氯化钠，密封振荡后离心，取上清液，用氮气吹干并过滤，得到预处理样品。

同位素标记的丙烯酰胺标准溶液是将13C3-丙烯酰胺溶解于0.1％甲酸中制备的，其浓度为30-70ng/mL。

绿茶粉末、甲酸和同位素标记丙烯酰胺标准溶液的质量体积比为1g∶7-11mL∶0.8-1.2mL。

绿茶粉末、乙腈、硫酸镁和氯化钠的质量体积比为1g∶9-11mL∶3-5g∶0.5-1.5g。

为了优化样品处理，可以通过离心和微孔滤膜过滤的方法，对预处理样品进行净化。

(2)净化：使用固相萃取柱对预处理样品进行净化处理，得到待测样品。

净化方法是对固相萃取柱进行预处理后，将步骤(1)得到的预处理样品进行上样，收集透过液，过膜，得到待测样品。

(3)使用高效液相色谱串联质谱法对待测样品进行检测，并通过内标法计算丙烯酰胺的含量。将试样和系列标准品注入HPLC-MS/MS系统，记录丙烯酰胺和13C3-丙烯酰胺的峰面积，以丙烯酰胺和13C3-丙烯酰胺的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标作图，绘制丙烯酰胺标准曲线。通过这个曲线可以计算样品中丙烯酰胺的含量。为了提高准确性，每个处理进行三次重复，并取平均值进行分析。

色谱测试条件为：流动相包括体积浓度为99.9％的水、乙腈的混合液与体积浓度为0.1％的甲酸；流速为200μL/min；进样体积为10μL；柱温为34-36℃，其中水和乙腈的体积比为99∶1。

质谱条件：离子化方式为ESI离子源；扫描方式为正电离；检测方式为多离子反应监测，碰撞能量为8eV，碰撞诱导解离电压为50V。

离子源条件：干燥气温度为325℃；干燥气流速为5L/min；雾化气压力为45psi；鞘气温度为350℃；鞘气流速为11L/min；毛细管电压为3000V。

这项发明针对绿茶基质特性，优化了样品前处理方法，使用13C3-丙烯酰胺作为内标，采用多选择反应监测（MRM）模式，构建了基于HPLC-MS/MS的绿茶丙烯酰胺定量分析方法。同时，该方法已经应用于茶区茶样的分析，并对我国主要产茶区的10个绿茶样品进行了丙烯酰胺测定。与现有技术相比，该方法具有准确性、重现性和稳定性较好，适用于绿茶中丙烯酰胺的实际检测。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201610319641.2 一种绿茶丙烯酰胺测定方法与应用