本文将讲述有关蟾酥的高效液相指纹图谱研究，旨在为控制蟾酥药材及饮片的质量提供参考思路。

简述：蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo  gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus  Schneider的干燥分泌物，具有抗肿瘤、强心、抗心肌缺血、抗菌、镇痛和麻醉等药理作用。蟾酥分布范围广泛，在辽宁、山东、浙江等地均有分布，其中山东所产的蟾酥量大质优，誉为“东酥”。

1. 用途：

现代药理学研究表明，蟾酥具有抗肿瘤、强心、局部麻醉、镇痛、抗炎等多种作用。最新研究显示，蟾酥可增强去甲肾上腺素所引起的大鼠输精管的收缩，并呈剂量依赖性收缩反应。此外，蟾酥还具有镇咳、利尿、兴奋肠道平滑肌以及促进糖元抑制乳酸生成的胰岛素样作用。蟾酥含有大量蟾蜍毒素类物质，尚含有酯蟾毒配基-3-单辛二酸脂、蟾毒灵-3-单辛二酸酯、华蟾毒精-3-单辛二酸酯、胆固醇、吲哚系碱类等成分，其中蟾蜍毒素类成分是蟾酥的主要有效成分。蟾酥是临床常用的名贵动物药之一，应用广泛，疗效确切。众多成方制剂如六神丸、麝香保心丸、蟾酥注射液等均含有该药材。

2. 蟾酥的高效液相指纹图谱研究

2.1 背景

混伪品导致蟾酥质量差异较大，不能保证用药的有效性和安全性。因此建立有效可靠的蟾酥药材鉴定方法，用于严格控制蟾酥药材及饮片的质量显得尤为重要。

蟾酥常用的传统真伪鉴别方法包括外观形状鉴别和理化鉴别。但由于蟾酥经过初加工后，缺乏基原动物的外观形态，传统鉴别法存在一定的局限性。近年来，随着DNA分子鉴定技术的发展，基于COI 基因条形码技术的药材分子鉴定为动物药材的鉴别提供了全新而有效的辅助手段。但由于蟾蜍是两栖类动物，且该两栖类物种基因组受环境影响较大，基因组存在较大的变异性，单纯依靠COI测序难以对蟾蜍进行鉴定。此外，在蟾酥加工过程中，DNA 受到较大破坏，因此难以从蟾酥中提取线粒体DNA， 更增加了通过条形码鉴定混伪品的难度。中药色谱指纹图谱是一种综合的、整体的鉴定手段，可较全面地反映药材/饮片的化学成分以及特征峰面积的相对比例。

2.2 方法

姬诚等人建立了评价蟾酥饮片质量优劣的指纹图谱分析方法。

（1）色谱条件

色谱柱:Grace Allitma C18 (4.6 mm ×250 mm，5μm);流动相:乙腈(A)－0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～15min，A为30%～62%;15 ～30min，A为62%);检测波长:296 nm;柱温:30℃; 流速:0.7 ml/min;进样量:20μL。

（2）蟾酥药材指纹图谱的建立

取蟾酥药材样品12 批，制备供试品溶液，按（1）的色谱条件，分别进样20 ul，记录色谱图（如下图）。结果 12批药材有8个特征指纹峰，其中7号峰为华蟾酥毒 基，1号峰为日蟾毒它灵，2号峰为沙蟾蜍精，3号峰为 远华蟾毒精，4号峰为蟾毒它灵，6号峰为蟾毒灵，8号 峰为脂蟾毒配基，以华蟾酥毒基的保留时间为参照，计 算各产地药材共有指纹峰的相对保留时间的差异，结果RSD均小于5%。

（3）用指纹图谱相似 度评价软件计算相似度。

指纹图谱相似度评价采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)进行计算。首先将色谱工作站数据导入中药指纹图谱相似度计算软件，以中位数法产生对照指纹图谱，分别计算不同批次的样品与对照图谱之间的相似度。12批蟾酥药材的相似度结果见表1。

（4）结论

该方法精密度、重现性、稳定性和各共有峰相对保留时间RSD均小于5%，各产地样品的相似度大于95%。用蟾酥高效液相指纹图谱分析法，可较全面地反映蟾酥饮片的内在质量，可用于蟾酥饮片的质量控制。

参考文献：

[1]张东红,金辉辉,刘星雨等. 蟾酥原浆HPLC指纹图谱建立及8种成分含量测定 [J]. 中草药, 2020, 51 (02): 490-495.

[2]成小兰,庞中化,王志刚等. 不同产地蟾酥药材HPLC指纹图谱及模式识别研究 [J]. 中国现代中药, 2019, 21 (09): 1262-1266. DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.20190331001.

[3]姬诚,郭万周. 蟾酥的高效液相指纹图谱研究 [J]. 光明中医, 2016, 31 (12): 1727-1729.