目前培养基的主要灭菌方式有湿热高压灭菌、过滤除菌、加热灭菌等。高压灭菌为最常用的灭菌方式,但也有部分培养基无需高压灭菌,只需煮沸灭菌即可,如VRBA、VRBGA、VRBDA、XLD琼脂、SS琼脂、BS琼脂、DHL琼脂、HE琼脂、XLT4、紫红胆盐琼脂、四号琼脂、庆大霉素琼脂、沙门氏菌显色、O157显色等培养基等。针对此类培养基,特作出如下说明。
本公司的培养基标签用法中有时会写“称取本品Xg,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中……无需高压灭菌”字样,并未写需要多少度灭菌多少分钟,此时就需要注意不要用高压灭菌锅将培养基进行灭菌,否则就不得不重新配制了。
正确的灭菌方式应为:
1、水浴加热溶解
使用玻璃容器即可。称取适量干粉培养基加入蒸馏水中,置于沸水浴中,在水浴加热的过程中时常搅拌或摇动培养基使之受热均匀,约25min~30min后可以看到培养基的内部是澄清透亮的,无琼脂粒的存在,此时就可以冷却至所需温度倾注平皿。
2、电磁炉加热溶解
使用耐电磁炉加热的容器(如搪瓷缸)。称取适量干粉培养基加入蒸馏水中,将搪瓷缸放在电磁炉的中央,打开电磁炉开关,开始加热,用玻璃棒持续搅拌培养基以防底部焦糊,约1-2分钟之后,培养基开始沸腾,产生了大量泡沫状物质并上涌,此时迅速将搪瓷缸拿开(以防飞溅出来),待泡沫消掉之后(约十几秒钟),再将搪瓷缸放上,沸腾起泡沫后再次拿开,如此反复使培养基沸腾4遍即可(如还有明显琼脂粒未溶解,可加沸一次),冷却至所需温度倾注平皿。
3、电炉加热溶解
使用耐加热的玻璃制品。此方法与方法2的过程一致,使培养基沸腾4遍即可。
注意事项:
1、此方法仅限实验室配制培养基使用。
2、配制量不宜过多,建议配制量在500ml以下,配制的培养基体积建议在容器体积的60%以下。
3、操作时需做好防护,如戴上棉手套,以防不小心烫伤。
4、使用电炉加热时需注意防止玻璃容器受热后碎裂。
5、工业化生产工艺需自行进行摸索。