三氯乙酸，又称三氯醋酸，是一种易潮解的化合物，可以溶于水、乙醇和乙醚。它主要用于有机合成以及制药、化学试剂和杀虫剂的生产。在实验中，我们经常需要使用三氯乙酸来沉淀蛋白质。那么，使用三氯乙酸沉淀蛋白的原理是什么？如何进行操作呢？

三氯乙酸沉淀蛋白的原理

三氯乙酸沉淀蛋白的原理有以下几点：

① 在酸性条件下，三氯乙酸与蛋白质形成不溶性盐；

② 作为蛋白质变性剂，三氯乙酸可以改变蛋白质的构象，使其暴露出更多的疏水性基团，从而促使蛋白质聚集并沉淀；

③ 随着蛋白质分子量的增大，其结构的复杂性和致密性也增加，三氯乙酸可能渗入蛋白质分子内部，使其难以完全除去。在加热处理样品时，三氯乙酸还可能导致蛋白质结构的酸水解，形成碎片。随着时间的延长，这种作用会变得更加明显；

④ 电泳图谱显示，牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）的单体谱带有明显的展宽现象。这可能是由于三氯乙酸的结合导致十二烷基硫酸钠（SDS）与蛋白质结合量产生偏差，进而导致蛋白质所带电荷的不均一性，影响迁移率的一致性。

使用三氯乙酸沉淀蛋白的方法

以下是使用三氯乙酸沉淀蛋白的步骤：

1) 将三氯乙酸和去氧胆酸（DOC）加入蛋白质样品中，使三氯乙酸的终浓度达到20%（w/v）。然后进行震荡混合。

2) 将混合物放在冰上孵育20~30分钟。

3) 使用微型离心机，在室温下离心15分钟。此时，会观察到黄褐色胶状物质的粘稠沉淀。使用细巴氏吸管尽量除去上清液。如果取100微升的样品进行沉淀，沉淀物将是可见的。

4) 加入原样品体积3倍的丙酮（室温）。让样品在室温下静置约10分钟，使三氯乙酸和去氧胆酸溶解于丙酮中。

5) 在室温下离心15分钟。此时，沉淀物的大小和物理特性类似于灰尘。可以看到约10微克或更多的蛋白质。有时，还会得到白色盐类（如氯化钾等）的沉淀物。使用极细巴氏吸管移除上清液。将沉淀物放在冰上干燥10分钟（打开1.5毫升离心管的盖子）。干燥的沉淀物可以在-20℃下保存长达一个月。

6) 使用含有2-巯基乙醇的样品缓冲液（1倍浓度）溶解沉淀物。如果还有少量三氯乙酸残留物，溴酚蓝指示剂会变黄。这并不重要，因为在电泳过程中，缓冲液有足够的能力中和痕量的三氯乙酸。如果沉淀物中有残留的氯化钾，当将样品缓冲液加入沉淀的蛋白质时，会形成絮状的白色沉淀物（十二烷基硫酸钾）。如果十二烷基硫酸钾沉淀形成，将很难将样品加入SDS凝胶中，但一旦样品加入凝胶中，电泳过程将会很好进行。

7) 如果需要分子量标准参照物，可以使用不含2-巯基乙醇的1倍浓度SDS样品缓冲液配制每毫升含0.5毫克总蛋白的标准溶液。将其分成小样本（50微升）存储在-20℃下。对于银染，可以取2微升的分子量标准+4微升含2-巯基乙醇的样品缓冲液，使总体积为6微升。

来源：元素商城

一、三氯乙酸的特性

三氯乙酸是一种化学式为C2H3Cl3O2，分子量为147.39的无色或微黄色液体。它可以溶于水、乙醇、乙醚、苯等有机溶剂。另外，三氯乙酸也被称为TCA，其CAS号为76-03-9。

二、三氯乙酸的化学性质

1.三氯乙酸的物理性质

三氯乙酸的分子式为C2H3Cl3O2，相对分子质量为147.4。它具有强烈的腐蚀性和刺激性，是一种有刺激气味的无色或微黄色透明液体。

2.三氯乙酸的化学性质

三氯乙酸是一种有机酸，可以发生酸碱反应。它可以水解生成氯化氢和乙酸，也可以与醇、醚等有机溶剂发生酯化反应。此外，它还可以与邻苯二酚反应生成三氯乙酰邻苯二酚。

三、三氯乙酸的应用

1.三氯乙酸在医药领域的应用

三氯乙酸可以用于医学领域中的皮肤表层剥脱和化学性皮肤再生，对去除疣、痣、赘皮、雀斑、黄褐斑、痘痘等皮肤病变具有较好的效果。

2.三氯乙酸在化工领域的应用

三氯乙酸可以用于制备各种涂料、塑料、树脂和橡胶等材料，也可以用于生产杀虫剂、除草剂、杀菌剂等农药。

3.三氯乙酸在食品领域的应用

三氯乙酸可以用于食品加工中的脱毛和漂白，提高禽类和兔肉等产品的质量和美观度。但是，在使用过程中需要控制使用量和时间，以避免对人体造成危害。

四、三氯乙酸的安全性

三氯乙酸具有较强的腐蚀性和毒性，对眼睛、呼吸系统和皮肤有刺激作用。在使用过程中需要注意操作环境和使用方法，穿戴个人防护装备以保障个人安全。此外，三氯乙酸的使用也需要注意环保性，避免对环境造成危害。

三氯乙酸是一种无色固体，由乙酸的甲基被三氯甲基替代后形成的化合物，化学式为CCl3COOH。由于受氯的吸电子效应的影响，三氯乙酸的酸性比乙酸更强。

如何制备三氯乙酸？

可以通过乙酸与氯在碘催化下反应制得：

CH3COOH + 3Cl2 → CCl3COOH + 3HCl

也可以通过氧化水合三氯乙醛来制备三氯乙酸。

三氯乙酸有哪些用途？

三氯乙酸主要用于有机合成、医药、杀虫剂和化学试剂的制取中间体，同时也用作高分子化合物（如蛋白质、DNA、RNA）的沉淀剂。该物质可通过吸入蒸汽和食入而被吸收到体内。

短期接触三氯乙酸会有什么影响？

三氯乙酸对眼睛、皮肤和呼吸道具有腐蚀性，食入也会产生腐蚀性。吸入蒸汽可能导致肺水肿，影响可能会有延迟，因此需要进行医疗观察。

三氯乙酸有哪些副作用？

TCA（三氯醋酸）是一种浅层和深层换肤制剂，也称为三氯乙酸。它是一种无色结晶，具有刺激性气味，易潮解，可溶于水、乙醚和乙醇。

不同浓度的TCA可用于不同部位：

10%~25%的TCA可用于浅层换肤；

35%~50%的TCA可用于中层换肤；

＞50%的TCA较容易产生瘢痕，临床上需谨慎使用；

35%的TCA可与其他化学剥脱制剂联合使用，以达到中层换肤效果，并降低副作用；

TCA换肤适用于毛孔粗大、痤疮瘢痕、凹坑，可以缓解堵塞毛孔，改善细纹和皱纹，改善各种光老化，如日光性角化。

三氯乙酸是一种无色结晶体，具有特殊气味，易潮解，不易燃。它的沸点为196～197℃，熔点为57～58℃。相对密度为1.629。它可以溶于乙醇、乙醚、丙酮、苯、四氯化碳、己烷、邻二甲苯和水。三氯乙酸的水溶液呈强酸性。主要用作生物化学药品提取剂，如三磷酸腺苷、细胞色素丙和胎盘脂多糖等高效药品的提取。此外，它还可用作农药的原料、蛋白质的沉淀剂和显微镜样品的固定剂。三氯乙酸可以通过醋酸氯化后分离或者通过三氯乙醛法制得。

溴乙酸是一种无色晶体，具有沸点208℃和熔点50℃。它的相对密度为d419。溴乙酸易溶于水、乙醇和乙醚，可溶于丙酮和苯，易潮解。溴乙酸主要用于农药和医药中间体的生产，也可以用来制造其酯类。溴乙酸可以通过以醋酸为原料，在吡啶存在下滴加溴素进行反应制得，或者通过氯乙酸与氢溴酸反应制得，还可以由羟乙酸与氢溴酸反应制得。溴乙酸的毒性比氯乙酸强，具有刺激皮肤和黏膜的作用，生产过程中需要注意防护措施。