由于氨基酸是组成蛋白质的基本单位,因此蛋白质在性质上与氨基酸有一些共性,如能产生两性电离等。但是氨基酸是小分子化合物,而蛋白质是由许多氨基酸组成的高分子化合物,量变必定引起质变,所以蛋白质又具有一些不同于氨基酸的个性。
在蛋白质多肽链中,仍含有游离的羧基和氨基,所以蛋白质和氨基酸一样,也具有两性电离和等电点。如果调节溶液到某一酸碱度,可使蛋白质分子几乎全以两性离子状态存在,此时溶液的pH值就是该蛋白质的等电点。
在酸性或碱性条件下,由于蛋白质颗粒间带有正电荷或负电荷,同性电荷互相排斥,不易聚集起来产生沉淀。而在等电点时,正负电荷数几乎相等,整个蛋白质颗粒处于电中性状态,相互间斥力最小,因而就容易产生沉淀。蛋白质的两性性质和等电点在科学实验和生产实践中有着极其重要的意义,它是提取和分离蛋白质的重要依据之一。
以质地均匀的滤纸条等作为支持物,用pH>7的缓冲溶液湿润后,放在高压直流电源正负两极之间,在滤纸中央偏阴极的地方,用待电泳的血清涂一条垂直线,此时血清中的蛋白质在碱性级冲液中就成为带负电荷的阴离子,通电后,蛋白质阴离子受异极吸引向正极移动,由于不同结构的蛋白质,其颗粒大小和所带的电量不同,因而,在一定强度的电场下,运动速度也就不同,经一定时间电泳后,就可把不同的蛋白质分开。然后将滤纸浸在显色液中,分开的蛋白质就显出五条不同深浅和宽度的色带。
蛋白质组成 | 等电点(pH) | 分子量 | 占总血清蛋白的%含量 |
清蛋白(A) | 4.88 | 69000 | 55~62 |
α-球蛋白 | 5.06 |
α1:200000 α2:300000 |
α1:4~5 α2:6~9 |
β-球蛋白 | 5.12 | 90000~150000 | 9~12 |
γ-球蛋白 | 6.85~7.5 | 156000~300000 | 15~20 |
棕榈酰四肽-7是一种细胞信使肽,通过模拟免疫球蛋白IgG的部分片段,对皮肤起到延缓和抑制过量炎症因子白细胞介素IL-6的释放的作用。这种肽能够维持皮肤中细胞因子的平衡,从而实现对皮肤的保护,淡化皱纹,紧致肌肤。
免疫球蛋白lgG是人体一种重要的抗体,具有免疫调节功能,可以调节各种细胞介素的释放。
白细胞介素IL-6是引起皮肤衰老的重要原因,它会引起皮肤角化细胞合成纤维细胞炎症。炎症会导致皮肤变暗黄、肤色不匀、松弛和产生皱纹。
棕榈酰四肽-7可以与其他多肽修复使用,具有协同增效作用。它能够降低外界伤害和紫外引起的角质细胞、纤维母细胞中白细胞介素IL-6的生成,从而降低炎症反应,保护肌肤弹性稳定,延缓衰老。因此,它可以用于抗皱修复的膏霜、乳液和精华产品。
一些含有棕榈酰四肽-7成分的化妆品包括The Ordinary Buffet 多重胜肽高浓度抗老化修复精华、青春密码活颜精华肌底液、法儿曼升效更新焕肤面膜(幸福面膜)、法儿曼紧致修护面霜II号、奥洛菲早晚多效凝粹精华眼霜等。
山羊抗猪IGG FC(HRP)是一种特异性结合猪IGG FC的免疫抗体,广泛应用于生物实验中的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等检测方法。它能够与猪IGG FC结合,发挥重要的功能。
免疫球蛋白G(IgG)是血清中免疫球蛋白的主要成分,具有重要的生物学功能。它在血清中的含量约占免疫球蛋白总含量的75%,并且分布在血清和组织中。IgG分子的Fc段是其与效应分子或细胞相互作用的关键部位。
IgG分子是一种糖蛋白,几乎所有的IgG都含有至少两个保守的N-糖基化位点。在记忆B细胞合成抗体的过程中,抗体的可变区的氨基酸序列可能会发生变化,从而导致Fab上N-糖基化位点的变化。
研究人员通过构建表面展示不同亚型IgG Fc的杆状病毒,探究它们是否具有类似IgG1 Fc的功能,并筛选出更具佐剂潜力的IgG Fc亚型。这项研究为构建高效的拮抗补体重组杆状病毒疫苗载体提供了理论支持和技术手段。
研究结果显示,成功构建了8种展示不同亚型IgG Fc的VSV-G假型化的重组杆状病毒。通过Western blot和间接免疫荧光分析,确认目的基因在重组杆状病毒表面正确表达并定位。
[1] Fc fusion as a platform technology: potential for modulating immunogenicity[J]. Ditza Levin, Basil Golding, Scott E. Strome, Zuben E. Sauna. Trends in Biotechnology. 2015(1)
[2] Cell Susceptibility to Baculovirus Transduction and Echovirus Infection Is Modified by Protein Kinase C Phosphorylation and Vimentin Organization[J]. Paula Turkki, Kaisa-Emilia Makkonen, Moona Huttunen, Johanna P. Laakkonen, Seppo Yl?-Herttuala, Kari J. Airenne, Varpu Marjom?ki. Journal of Virology. 2013(17)
[3] Fc‐fusion proteins: new developments and future perspectives[J]. Daniel M. Czajkowsky, Jun Hu, Zhifeng Shao, Richard J. Pleass. EMBO Mol Med. 2012(10)
[4] The Fcγ receptor expression profile on porcine dendritic cells depends on the nature of the stimulus[J]. Bert Devriendt, Bruno M. Goddeeris, Eric Cox. Veterinary Immunology and Immunopathology. 2012
[5] 刘泽辉. 表面展示猪不同亚型IgG Fc的重组杆状病毒疫苗载体研究[D]. 西北农林科技大学, 2017.
随着医学技术的不断进步,药物的种类越来越多,同时人们对疾病的治愈率也有了显著提高。此外,同一种疾病的治疗药物也变得多样化,细分的药物能够更加精准地治疗疾病,同时有效地避免药物的副作用。醋酸地塞米松作为一种常见药物,在临床上有多种形态,包括片剂和乳膏。
醋酸地塞米松片剂具有以下适应症:
醋酸地塞米松乳膏是一种肾上腺皮质激素类药物,具有抗炎和抗过敏作用,能够抑制结缔组织的增生,降低毛细血管壁和细胞膜的通透性,减少炎性渗出量,并抑制组胺及其他物质的形成和释放。
可以看出,醋酸地塞米松的内服和外用效果有所不同,因此在治疗时需要注意区分。
偶氮荧光桃红染色液,又称为酸性红1(Acidred1,AR1),是一种化学合成的红色偶氮染料。它属于偶氮染料家族,具有良好的光-热稳定性、溶解性和易配制特征。此外,它还具有显著的三阶非线性和良好的光限幅性能。在普通光学和荧光显微镜中,它被广泛应用作为一种有用的酸性复染剂。偶氮荧光桃红染色液呈红色至极深红色,可用于VonKossa钙染色和非线性光学研究,也可用于光催化测试中。
偶氮荧光桃红染色液对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同。它不耐热,60~70℃即会被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上,常用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。
1)实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。
2)稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,应在4℃保存。回收后重复使用的抗体,使用方法与新鲜稀释的抗体相同。
3)如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以进行10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。
4)如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则应考虑废弃该抗体。
偶氮荧光桃红染色液操作说明
人Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA KIT是一种固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒。该试剂盒通过固相夹心法酶联免疫吸附实验来检测已知浓度的α1-AGP标准品和未知浓度的样品。
该试剂盒的操作步骤如下:首先,将α1-AGP和生物素标记的抗体一起温育。然后,洗涤后加入亲和素标记的HRP。经过温育和洗涤后,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B和酶结合物,产生颜色。颜色的深浅与样品中α1-AGP的浓度成比例关系。ELISA试剂盒有多种类型,但它们都具有一个共同特点,即进行抗原捕获。一般的捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或使用微孔板上的抗体进行捕获。此外,还有一些特殊类型的ELISA实验,如In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT。In-cell ELISA需要将培养在微孔板中的细胞固定和通透化,然后使用抗体原位检测。ELISPOT类似于蛋白印迹Western blot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。根据实验需要,可以选择96孔板或48孔板进行ELISA实验。
α1-酸性糖蛋白是一种生物学名词,早期被称为乳清类粘蛋白。它的分子量约为40000,由肝脏合成,癌细胞也可以合成。α1AG的肽链结构与Ig轻链可变区及部分重链区、结合珠蛋白α链的结构类似,这说明α1AG可能是从Ig家系演变而来。
人Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA KIT可用于结核性胸腔积液与恶性胸腔积液的比较蛋白质组学研究。
由于胸腔积液邻近受损组织,在肺部相关疾病中其局部病理改变较其它体液应具有更高的敏感性及特异性,并且胸腔积液中富含血浆蛋白、炎性细胞、上皮细胞和肿瘤细胞等分泌的蛋白,这些蛋白可能具有潜在的诊断价值。蛋白质组学技术的兴起为寻找特异蛋白标志物提供了新的机会。本研究采用Label free定量蛋白质组策略对5例结核性胸腔积液与5例恶性胸腔积液进行蛋白质组分析检测。通过GO注释对定量比较蛋白组学鉴定的差异蛋白进行GO功能分类,并利用KEGG软件寻找与鉴定差异蛋白关系最密切的病理通路。为进一步确认Label free定量结果的可靠性,应用蛋白质印迹法(Western blot)方法对部分差异蛋白的表达情况进行验证。应用酶联免疫吸附测定法(Elisa)对候选蛋白在50例结核性胸腔积液与30例恶性胸腔积液中进行初步临床验证,利用支持向量机进一步筛选候选差异蛋白以建立诊断模型,并判断该模型的诊断价值。利用Elisa方法,我们进一步对免疫球蛋白κ链C蛋白、补体C9、α2-HS-糖蛋白、维生素D结合蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白、激肽原1、粘蛋白2和α1酸性糖蛋白这9个候选蛋白在50例结核性胸腔积液与30例恶性胸腔积液样本中进行了临床验证。与恶性胸腔积液比较,免疫球蛋白κ链C蛋白、补体C9、α2-HS-糖蛋白、维生素D结合蛋白、铜蓝蛋白和α2巨球蛋白在结核性胸腔积液中显著高表达(P<0.05)。
[1]Laying the groundwork for proteomics:Mass spectrometry from 1958 to 1988[J].Klaus Biemann.Journal of Proteomics.2014
[2]Enhanced detection and desalting free protocol for phosphopeptides eluted from immobilized Fe(III)affinity chromatography in direct MALDI TOF analysis[J].Li Zhu,Jing Zhang,Yinlong Guo.Journal of Proteomics.2014
[3]Electrocardiogram Pattern Recognition and Analysis Based on Artificial Neural Networks and Support Vector Machines:A Review[J].Mario Sansone,Roberta Fusco,Alessandro Pepino,Carlo Sansone.Journal of Healthcare Engineering.2013(4)
[4]Proteomics of human prostate cancer biospecimens:the global,systems-wide perspective for Protein markers with potential clinical utility[J].Garbis,Spiros D,Townsend,Paul A.Expert Review of Proteomics.2013(4)
[5]张霞.结核性胸腔积液与恶性胸腔积液的比较蛋白质组学研究[D].北京市结核病胸部肿瘤研究所,2014.
辣根过氧化物酶标记羊抗人IGG是一种多克隆抗体,以人IGG H&L为抗原,具有特异性结合人IGG H&L的能力。它主要用于ICC/IF、Dotblot、ELISA、IHC-P、IHC-Fr、Immunomicroscopy、WB等人IGG H&L检测实验。
抗原与抗体的特异性结合是基于它们之间的结构互补性和亲和性。这种特性取决于抗原和抗体分子的空间构型。除了分子构型的互补性外,抗原表位和抗体超变区必须密切接触才能产生足够的结合力。
抗原抗体反应可以分为两个阶段:第一阶段是抗原与抗体特异性结合的阶段,这个阶段的反应很快,只需要几秒钟到几分钟,但没有可见的反应。
第二阶段是可见反应阶段,在适当的温度、pH值、电解质和补体的影响下,抗原抗体复合物会出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应。这个阶段的反应较慢,通常需要几分钟到几小时。在血清学反应中,这两个阶段往往无法严格分开,因为它们受到反应条件(如温度、pH值、电解质、抗原抗体比例等)的影响。
免疫球蛋白G(IgG)是血清中免疫球蛋白的主要成分,约占血清中免疫球蛋白总含量的75%。它的正常值为9.5~12.5mg/ml。其中40%~50%分布在血清中,其余分布在组织中。它的分子量约为150000道尔顿。人类血清中的IgG主要是单体,包括四个亚型,其中IgG1占60%~70%,IgG2占15%~20%,IgG3占5%~10%,IgG4占1%~7%。这些亚型在经典途径的补体激活中具有不同的结合能力。
特发性膜性肾病(IMN)的发病机制是由于免疫球蛋白G(IgG)与肾小球足细胞基底膜侧的固有抗原结合形成抗原抗体复合物,激活补体形成膜攻击复合物(Membrane attack complex MAC,C5b-9),导致足细胞形态改变,进而产生蛋白尿和低蛋白血症等一系列症状。足细胞沉积的IgG亚类主要是IgG4,新近发现的几种致病抗原在肾小球内与IgG4的沉积位置一致。补体系统是IMN肾小球损伤的最重要调节者,IMN的补体激活主要经过替代途径,补体激活受到促进因素(免疫复合物)和抑制因素(补体调节蛋白)的影响。
补体调节因子Ⅰ(Complement FactorⅠ,CFI)又称补体Ⅰ因子,表达于肝细胞、单核细胞、成纤维细胞和角质细胞等,是替代途径中重要的补体调节蛋白。Ⅰ因子能够裂解C3b,在补体活化过程中起到重要的抑制作用,从而减少MAC的形成,减少足细胞的损伤。
通过对组织和体液标本的生化指标检测、免疫组织化学染色法以及ELISA法分析IgG亚类、补体Ⅰ因子和C3b在IMN和微小病变型肾病(minimal change disease,MCD)肾组织中的表达,可以比较分析它们的表达水平,并进一步研究IgG4、补体Ⅰ因子和C3b之间的关系,以及补体Ⅰ因子在IMN中补体激活调节机制中的意义。
[1] Arezou Khosroshahi, Rivka Ayalon, Laurence H. Beck, David J. Salant, Donald B. Bloch, John H. Stone, Hisanori Umehara. IgG4-Related Disease Is Not Associated with Antibody to the Phospholipase A2 Receptor. International Journal of Rheumatology. 2012.
[2] Claudio Ponticelli, Patrizia Passerini. Management of idiopathic membranous nephropathy. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 2010.
[3] Pierre Ronco, Hanna Debiec. Membranous glomerulopathy: the evolving story. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 2010.
[4] Yoshie Segawa, Satoshi Hisano, Misao Matsushita, Teizo Fujita, Shinichi Hirose, Morishige Takeshita, Hiroshi Iwasaki. IgG subclasses and complement pathway in segmental and global membranous nephropathy. Pediatric Nephrology. 2010.
[5] 刘小静. IgG4、补体Ⅰ因子在特发性膜性肾病中的意义. 河北医科大学, 2014.