试剂盒的主要成分包括酶标板、试剂和标准品等。
试剂盒的性状为盒装液体。
试剂盒需要在2-8℃保存。
可以使用血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等作为标本。
ELISA常用的方法包括双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
预期可以使用ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其他相关生物液体中的含量。
ELISA是一种敏感性很高的试验技术，它以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合。
1. 使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生大量泡沫。
2. 根据待测样品数量和标准品的数量确定所需的板条数，建议每个标准品和空白孔做复孔。
3. 加入稀释好的标准品和待测样品到反应孔中，然后立即加入生物素标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，然后甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果使用洗板机洗涤，则洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，然后甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果使用洗板机洗涤，则洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟，避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入终止液，加入终止液后立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
[1] 陈家琪 瞿爱东 祝婧烨 黄海武。阻断型抗人IgE单克隆抗体的制备及其表位分析。《中华微生物学和免疫学杂志》
胞苷酸二钠盐在食品和医药等领域应用广泛，但目前生产高纯度的胞苷酸二钠盐仍然具有一定的困难和高成本。
下面是制备胞苷酸二钠盐的步骤：
a、在反应容器内加入胞苷、磷酸三乙酯和吡啶，混合均匀后调节反应温度为-15-5℃，在此温度条件下缓慢加入一定量的三氯氧磷，加完后继续搅拌反应10-30小时。
b、取样分析HPLC，当转化率达到99%以上时，加入10-15%的冰盐水进行水解，水解温度控制在0-5℃，水解时间为10-20小时。
c、水解结束后，静置分层，去除有机相，得到水层。
d、将水层用30%氢氧化钠调节pH值为7.0-8.0，然后滴加溶液体积两倍量的95%酒精，析出结晶，过滤得到粗品。
e、将粗品溶解，加入活性炭脱色，继续滴加溶液体积两倍量的95%酒精析出结晶，过滤、漂洗、烘干得到成品。
胞苷酸二钠盐有以下应用：
1）一种脱敏营养奶粉，成分包括鲜牛奶、二十二碳六烯酸、胆碱、牛磺酸、复合维生素、5’-胞苷酸二钠、矿物质、5’-肌苷酸二钠、生物素等。该奶粉具有多种营养成分，水溶性好，吸收率高，对肠胃无刺激性，能满足婴儿对氨基酸和维生素的需求，同时具有调节免疫和抗蛋白过敏的功效。
2）制备一种小龙虾抗拥挤胁迫饲料添加剂，成分包括甘氨酸、γ-氨基丁酸、复合核苷酸、沸石粉等。该添加剂能有效克服拥挤胁迫造成的生长缓慢和免疫力低下等问题，降低小龙虾的残肢率和死亡率。
[1] CN201410333718.2胞苷酸二钠盐的生产方法
[2] CN201410335486.4一种脱敏营养奶粉
[3] CN201810566381.8一种小龙虾抗拥挤胁迫饲料添加剂及制备方法
庚二酸是一种七碳二元羧酸，被广泛应用于化工、医药及配位化学等领域。它是制备生物素、增塑剂、润滑油及聚酰胺的重要原料。目前，工业上主要使用水杨酸裂解法来制备庚二酸，但该方法存在反应条件严格、工艺流程复杂等缺点。此外，化学法合成庚二酸的收率较低，导致国内市场供不应求且价格较高。因此，寻找一种反应条件温和且成本较低的庚二酸合成方法具有重要意义。
克莱森缩合反应是脂肪酸及聚酮类化合物合成的关键步骤，已被广泛应用于戊二酸及己二酸等二元羧酸的生物合成中。该反应通过酶催化将两个碳链较短的硫酯单元缩合形成长链硫酯，用于延长碳链。催化这类反应的酶包括硫解酶、聚酮合成酶和羧化酶等。通过使用不同的催化缩合反应的酶，可以合成不同链长的功能化合物。因此，利用克莱森缩合反应在微生物中构建庚二酸的合成途径成为可能。
为了实现庚二酸的生物合成，江南大学邓禹教授团队以己二酸生物合成途径为基础，利用乙酰辅酶A和戊二酰辅酶A作为底物，在大肠杆菌中成功实现了庚二酸的生物合成。此外，他们还发现了另一条庚二酸的生物合成途径，即BIOZ途径。该途径利用丙二酰ACP和戊二酰辅酶A作为底物，通过克莱森缩合反应及后续的逆β-氧化途径合成庚二酸。
图1：克莱森缩合反应介导的庚二酸的生物合成
进一步研究发现，通过组合两条途径中的同工酶，邓禹教授团队发现在大肠杆菌中过表达bioZ、fabG、Tfu_0067、Tfu_1647和Tfu_2576-2577时，庚二酸的产量最高，达到36.7 mg·L-1，较对照菌株提高了382.9%。
图2：同工酶组合以合成庚二酸。(A) 庚二酸生物合成途径；(B)不同同工酶组合的庚二酸产量。
在这项研究中，邓禹教授团队以戊二酰辅酶A为前体，在大肠杆菌中成功实现了庚二酸的生物合成，并进一步优化了合成途径，最终菌株产生了36.7 mg·L-1的庚二酸。这是基于克莱森缩合反应合成的庚二酸的最高产量。该研究为庚二酸的生物合成提供了新的思路，也为其工业化生产奠定了基础。
苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA KIT是一种双抗体夹心ELISA法，用于检测样本中的苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)。该方法通过将苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)抗体包被于酶标板上，样品或标准品中的抗原与包被抗体结合，形成免疫复合物。然后加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物。最后加入显色底物(TMB)进行测定，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
苏云金芽孢杆菌是一种产晶体蛋白的好气性蜡状芽孢杆菌，简称Bt。它是一种常用的微生物杀虫剂，可用于防治多种害虫。苏云金芽孢杆菌制剂在昆虫消化道中起作用，使昆虫中肠停止蠕动、瘫痪，并导致害虫死亡。目前已知苏云金芽孢杆菌有多个变种，其中某些变种还能产生其他杀虫物质。苏云金芽孢杆菌及其制剂在农业生态系统中的应用已被广泛研究。
Bt抗虫水稻的外源基因及其表达产物可能对农业生态系统产生潜在的环境影响。因此，研究这类生物大分子在农业生态系统中的环境行为具有重要意义。目前的研究主要集中在表达Cry1Ab蛋白的Bt抗虫水稻上，而对于没有标记基因的Bt水稻的相关研究较少。本研究以Bt抗虫水稻和其亲本以及其他水稻品种为试材，通过实验室和田间试验，采用ELISA检测和同位素标记等方法，研究了Bt蛋白在植株和土壤中的时空表达及其持留规律，转基因水稻秸秆还土后外源蛋白的持留规律，Bt抗虫水稻秸秆还土对土壤微生物的影响，以及Bt基因在土壤中的降解动态和向土壤微生物水平转移的可能性。
[1] Hai-Yan Hu, Xiao-Xia Liu, Zhang-Wu Zhao, Jian-Guang Sun, Qing-Wen Zhang, Xing-Zhong Liu, Yong Yu. Effects of repeated cultivation of transgenic Bt cotton on functional bacterial populations in rhizosphere soil. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 2009(3).
[2] F. Widmer, R. J. Seidler, L. S. Watrud. Sensitive detection of transgenic plant marker gene persistence in soil microcosms. Molecular Ecology. 2008(5).
[3] Jikun Huang, Ruifa Hu, Scott Rozelle, Carl Pray. Genetically Modified Rice, Yields, and Pesticides: Assessing Farm-Level Productivity Effects in China. Economic Development and Cultural Change. 2008(2).
[4] Yong I. Kuk, Nilda R. Burgos, Vinod K. Shivrain. Natural Tolerance to Imazethapyr in Red Rice (Oryza sativa). Weed Science. 2008(1).
[5] 张燕飞. Bt水稻外源基因及其表达蛋白的环境持留研究[D]. 浙江大学, 2011.
大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测样本中大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)的含量。
实验原理：用抗小鼠PINP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PINP与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠PINP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PINP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PINP浓度。
大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒
1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3.每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应PINP含量即可。
构建SD大鼠骨质疏松模型,通过对雌性去势SD大鼠骨代谢标志物I型前胶原N端肽（Procollagen type I N propeptide,PINP）和I型前胶原C端肽的β异构化形式（β-isomerized forms of type I collagen breakdown products,β-CTx）的动态变化及骨密度（Bone mineral density,BMD）的测量,研究二项骨代谢标记物与骨密度之间的相关性,来讨论骨代谢标志物在骨质疏松过程中的变化以及橄榄油干预后的反应,为评价橄榄油有效性提供实验依据,从而讨论橄榄油在预防绝经后骨质疏松是否具有应用前景。
方法:90只雌性SD大鼠随机分为三组:假手术组（Sham组）,去卵巢组（OVX组）、去卵巢+橄榄油组（OVX+Olive组）。OVX组和OVX+Olive组内所有大鼠切除双侧卵巢,构建去势SD大鼠模型;Sham组只切除一小块与卵巢大小相近的周围脂肪组织。
术后适应性饲养1周后开始给药:Sham组和OVX组大鼠按1 ml/100g体重予生理盐水灌胃;OVX+Olive组大鼠按1 ml/100 g体重予优质初榨橄榄油灌胃。所有大鼠每天灌胃1次,连续灌服24周后结束实验。
分别于灌服8周、16周和24周后,每组各随机选取10只大鼠,左心室取血,离心后取血清样本利用ELISA试剂盒检测骨代谢标志物PINP、β-CTx的血清浓度;并通过双能X线骨密度测量仪测量各组大鼠腰椎及右侧股骨的骨密度。
[1]Factors related with osteoporosis treatment in postmenopausal women[J].Lia Mara Montagner Rossi,Rafaela Martinez Copes,Leo Canterle Dal Osto,Clovis Flores,Fábio Vasconcellos Comim,Melissa Orlandin Premaor.Medicine.2018(28)
[2]The effect of teriparatide treatment on circulating periostin and its relationship to regulators of bone formation and BMD in postmenopausal women with osteoporosis[J].Fatma Gossiel,Jessica R Scott,Margaret A Paggiosi,Kim E Naylor,Eugene V McCloskey,Nicola F A Peel,Jennifer S Walsh,Richard Eastell.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolis.2018
[3]Use of bone turnover markers in postmenopausal osteoporosis[J].Richard Eastell,Pawel Szulc.The Lancet Diabetes&Endocrinology.2017(11)
[4]The Utility of Biomarkers in Osteoporosis Management[J].Patrick Garnero.Molecular Diagnosis&Therapy.2017(4)
[5]吴碧芳.橄榄油对雌性去势SD大鼠骨代谢标志物PINP和β-CTx的影响[D].福建医科大学,2018.
人胸腺素Β4(TΒ4)ELISA试剂盒采用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体。通过依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
胸腺β4是胸腺肽β家族中的一员，由43个氨基酸组成，具有亲水性。Tβ4是人体内主要的肌动蛋白调节分子之一，具有多重生物学功能，在组织再生、重塑、创伤愈合、维持肌动蛋白平衡、肿瘤发病与转移、细胞凋亡、炎症、血管生成、毛囊发育等生理、病理过程中扮演着重要角色。
肌动蛋白调节因子肌动蛋白在非肌肉细胞中约占总蛋白的10%，是细胞结构、细胞运动和创伤愈合所需的重要组分。细胞中的Tβ4足以封闭所有的肌动蛋白，可参与调节肌动蛋白的聚合与解聚。最新的研究表明醋酸胸腺β4基因的表达水平与癌细胞转移呈正相关，与肿瘤凋亡关系密切。这为寻找治疗癌症的新方法提供了新的思路，因此具有广阔的新药开发前景。
胸腺素β4是真核细胞中一种重要的肌动蛋白螯合分子，广泛分布于人体内大部分组织和细胞中，具有多方面生物学活性，并参与细胞迁移、血管形成、炎症反应等多种病理生理过程。利用基因重组技术在原核表达系统中克隆表达人胸腺素β4蛋白，检测纯化蛋白产物的生物学活性和在小鼠皮肤创伤愈合模型中的作用，为建立一种简便易行的在体外制备具有生物学活性的胸腺素β4蛋白的工艺方法，及研究其在皮肤创伤愈合中的作用机制奠定基础。
方法：采用基因重组方法将胸腺素β4基因克隆至原核表达载体pTXB1，诱导其融合蛋白Tβ4-intein-CBD在大肠杆菌中的表达；Chitin亲和纯化表达产物，采用HPLC、N端测序及Western blot等分析手段对纯化蛋白进行鉴定；在3T3小鼠胚胎成纤维细胞中应用MTT法检测蛋白产物的生物学活性，并通过建立小鼠皮肤创伤模型，制作切片进行组织形态学观察，来研究重组人胸腺素β4在皮肤组织损伤修复中的作用。
结果：通过基因重组方法成功构建了原核表达载体pTXB1-Tβ4，能够在IPTG诱导下在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达融合蛋白Tβ4-intein-CBD；表达的融合蛋白经Chitin亲和纯化和分子筛精制后能够得到纯度较高的重组人胸腺素β4蛋白产物，且经鉴定理化性质不变。
[1] Serum levels of immunoreactive thymosin alpha 1 and thymosin beta 4 in large cohorts of healthy adults. Weller F E, Shah U, Cummings G D, Chretien P B, Mutchnick M G. Thymus Cancer. 1992
[2] Distribution of thymosin beta 4 in vertebrate classes. Erickson-Viitanen S, Ruggieri S, Natalini P, Horecker B L. Archives of Biochemistry. 1983
[3] Thymosin alpha 1: isolation and sequence analysis of an immunologically active thymic polypeptide. Goldstein A L, Low T L, McAdoo M, et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1977
[4] Purification and biological activity of thymosin, a hormone of the thymus gland. Goldstein A L, Guha A, Zatz M M, Hardy M A, White A. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1972
[5] 赵双. 重组人胸腺素β4的表达纯化及生物学活性检测[D]. 兰州大学, 2012.
小鼠乳酸ELISA试剂盒是一种用于测定标本中小鼠乳酸（Lactate）水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的小鼠乳酸抗体包被微孔板，形成固相抗体。然后，将乳酸样品加入微孔中，与HRP标记的乳酸抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。通过酶标仪测定吸光度，可以计算样品中小鼠乳酸的浓度。
操作步骤如下：
1）使用前，充分混匀试剂，避免产生大量泡沫。
2）根据样品数量和标准品数量确定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔。将稀释后的标准品和待测样品加入反应孔中。
3）加入生物素标记的抗体，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，加入洗涤液进行洗涤，重复此操作3次。
5）加入亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，加入洗涤液进行洗涤，重复此操作3次。
7）加入底物A、B进行反应，避免光照。
8）加入终止液后立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
该试剂盒可用于研究脂多糖对小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的诱导作用。通过生物信息学分析，可以探讨相关机制。
[1]Activation ofα7 nicotinic acetylcholine receptor alleviates Aβ1-42-induced neurotoxicity via downregulation of p38 and JNK MAPK signaling pathways[J].Ke-Wei Chang,Hang-Fan Zong,Kai-Ge Ma,Wan-Ying Zhai,Wei-Na Yang,Xiao-Dan Hu,Jie-Hua Xu,Xin-Lin Chen,Sheng-Feng Ji,Yi-Hua Qian.Neurochemistry International.2018
[2]Targeting ERK,an Achilles’Heel of the MAPK pathway,in cancer therapy[J].Feifei Liu,Xiaotong Yang,Meiyu Geng,Min Huang.Acta Pharmaceutica Sinica B.2018
[3]JNK pathway in osteoarthritis:pathological and therapeutic aspects[J].Hong-xing Ge,Fu-man Zou,Yan Li,An-min Liu,Min Tu.Journal of Receptors and Signal Transduction.2017(5)
[4]PDK1 promotes tumor cell proliferation and migration by enhancing theWarburg effect in non-small cell lung cancer[J].Tao Liu,Honglei Yin.Oncology Reports.2017(1)
[5]邢顺鹏.脂多糖诱导小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的机制研究[D].苏州大学,2018.
关注盖德视界
添加小助手
