最近在进行实验研究时,需要使用pH值约为9.0的生物缓冲液。经过网上资料的搜索,我发现TRIS、CAPS和CHES都在这个范围内。TRIS和CAPS已经被广泛使用,那么今天我们来重点介绍一下CHES缓冲液。
CHES在25°C时的pKa值约为9.3,它通常是白色粉末状的。因此,如何将其配置成所需的缓冲溶液成为我们今天讨论的重要问题。通过查阅各种文献,我成功地配置出了所需的CHES缓冲液方案。让我们一起学习吧!例如,我们需要制备50 mL、pH值为9.0、0.1M CHES缓冲储备溶液。在配置之前,我们首先要弄清楚两个问题:CHES在水中的溶解度是多少?或者说CHES在水中的饱和浓度是多少?
根据我得到的资料,15克CHES粉可以溶解于85毫升水中。所以0.1M的浓度是可行的。我还查看了一下CHES的结构,它在水中呈酸性,因此在溶解后需要用NaOH来调节pH值。因此,配置过程如下:
1. 称取1.036 g CHES (MW=207.3 g/mol),加入40 mL 纯水;
2. 在27°C下,40 mL CHES水溶液的pH值应保持在4.50;
3. 加入1 mL 1M NaOH溶液后,调节pH值至8.83;
4. 加纯水定容至50 mL,转移至50 mL 样品瓶中,室温保存。
这样就成功制备出了pH约为9.0的生物缓冲液母液。根据经验,在实验过程中,最终的pH值在8.83左右可能会有少许偏差,但仍然能满足实验要求。需要注意的是,在实验过程中,实验的细节非常重要,同时也需要认真对待所需的基础知识。