辣根过氧化物酶是一种合成的糖蛋白，具有广泛的应用领域。在临床医学、生物化学和实验中，辣根过氧化物酶被广泛使用。它由酪蛋白和铁普林结合形成，含有丰富的碳水化合物和其他成分。作为一种常见的标记酶，辣根过氧化物酶在定位检测、体检和定量测定方面具有出色的效果。

正确使用辣根过氧化物酶不仅可以放大弱信号，还可以增加探测的目标分子。因此，在存放和购买时，务必选择正规的生产厂家或供应商，并在单独存放或运输时保持在零下20摄氏度的环境下。高温可能导致产品变质，甚至影响使用效果。

背景信息^[1-3]

兔抗辣根过氧化物酶抗血清是一种高纯度的免疫血清，通过多次免疫健康雄性白兔制备而成。辣根过氧化物酶是一种常用的酶，通常来源于辣根。它不仅广泛应用于生化检测项目，还被广泛运用于免疫类试剂盒。作为试剂盒显色体系的关键成分，过氧化物酶对试剂盒的质量起着重要影响。

辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）具有比活性高、稳定性好、分子量小、制备简单等特点，因此被广泛使用。HRP广泛分布于植物界，尤其是辣根中含量较高。它是一种由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量约为18%。HRP由多个同工酶组成，分子量约为40,000，等电点为PH3～9。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右（最高可达3.4）。RZ值越小，非酶蛋白的含量就越高。

辣根过氧化物酶的应用^[4][5]

用于环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究

本研究通过改造半抗原、修饰抗原以及免疫动物产生抗体等方法，建立了一种灵敏、简便、快速的环境荷尔蒙检测手段。研究重点针对雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A等环境荷尔蒙进行了分析方法研究。

主要研究内容如下：

1. 对雌二醇进行了修饰，引入了连接臂，并与牛血清蛋白结合，合成了完全抗原。测定结果显示，抗原中雌二醇与蛋白质的结合比为25：1。利用制备的完全抗原免疫大耳白家兔，制备了抗雌二醇多克隆抗体。ELISA测定结果显示，抗血清的中点效价为1：25000，与雌酮的交叉反应率为5％，与雌三醇的交叉反应率为2％，与孕酮的交叉反应率为＜0.1％。抗体具有较高的特异性。

2. 引入生物素-亲合素放大系统，以辣根过氧化物酶标记的亲合素作为探针，邻苯二胺作为辣根过氧化物酶的底物，建立了一种新的电化学酶免疫分析方法，用于测定雌二醇。该方法的线性范围为50.0-500.0 pg/mL，检出限为21.0 pg/mL。与传统的光度检测的ELISA相比，该方法具有更高的灵敏度和更低的检出限。

参考文献

[1] Determination of endocrine-disrupting phenols, acidic pharmaceuticals, and personal-care products in sewage by solid-phase extraction and gas chromatography–mass spectrometry[J]. Hing-Biu Lee, Thomas E. Peart, M. Lewina Svoboda. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[2] Determination of bisphenols in sewage based on supramolecular solid-phase extraction/liquid chromatography/fluorimetry[J]. Antonia Moral, María Dolores Sicilia, Soledad Rubio, Dolores Pérez-Bendito. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[3] Liquid chromatography–tandem mass spectrometry analysis of estrogenic compounds in coastal surface water of the Baltic Sea[J]. Iris-Constanze Beck, Regina Bruhn, Juergen Gandrass, Wolfgang Ruck. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[4] Analyses of phenolic endocrine disrupting chemicals in marine samples by both gas and liquid chromatography–mass spectrometry[J]. James D. Stuart, Christopher P. Capulong, Katherine D. Launer, Xuejun Pan. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[5] 王术皓. 环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究[D]. 东华大学, 2006.

辣根过氧化物酶(HRP)是一种糖蛋白，其名称的由来是因为在辣根中该酶的含量很高。它是目前使用最广泛的一种标记酶，可用于标记抗体或其他蛋白质，既能用于定位检测，也能用于定量测定。辣根过氧化物酶在工、农、医、环保等领域有广泛的应用，可用于制备生化诊断试剂盒及酶免ELISA测定中的酶标抗体。经过WB、ELISA等实验验证，经HRP标记的抗SUMOSUMOstar抗体表现出更强的特异性，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，从而减少实验步骤，避免非特异性条带的产生。

研究人员通过构建质粒特异性的表达类泛素化修饰物(Smallubiquitin-relatedmodifiers，SUMO)，并初步研究SUMO蛋白在多种典型性自身免疫性疾病患者血清中的表达水平，探究抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）是否可作为PBC的特异性血清标志物。结果显示：1）与其他非PBC自身免疫性疾病和健康对照相比，抗SUMO1抗体，抗SUM02抗体，抗SUM03抗体在PBC中的阳性检出率高(P0.01)。2）抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）标记物在PBC中的特异性高达99%，其敏感性保持在86%左右。3）抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）在其他自身免疫性疾病人群中的阳性率无明显差异(P0.05)。4）在抗Sp100抗体阳性与阴性的PBC样本中，抗Sp100抗体阳性组中抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）的阳性率显著高于抗Sp100抗体阴性组(P0.05)，其总胆红素均值和直接胆红素均值较抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）阴性组明显增高(P0.05)。5）抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）阳性组的非PBC自身免疫性疾病中的胆红素均值较抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）阴性组高。因此，高特异性抗SUMO抗体（抗SUMOSUMOstar抗体）有望成为PBC诊断的一种新型抗体，对于提高PBC的临床诊断效率意义重大。SUMO蛋白与Sp100联系紧密，其对患者的肝功能具有潜在性的影响。

主要参考资料

[1]抗SUMO抗体在多种自身免疫性疾病中的初步研究

[2]CN201610205731.9利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法

辣根过氧化物酶标记兔抗猴IGG是一种特异性结合猴IGG的辣根过氧化物酶标记免疫蛋白。它主要用于多种生物实验，如Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等，以检测猴IGG的存在。

IgG抗体在免疫应答中起着重要作用，可以激活补体，中和多种毒素。它的持续时间长，是唯一能够穿过胎盘保护胎儿的抗体。此外，IgG还通过乳腺分泌进入初乳，使新生儿在出生后立即获得抗体保护。IgG是血清和细胞外液中最主要的抗体成分，占血清Ig总量的75%。根据其在血清中浓度的高低，人的IgG可以分为四个亚类，分别是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。

不同的IgG亚类在免疫中发挥不同的作用。例如，IgG1、IgG3、IgG4在新生儿抗感染免疫中起重要作用；IgG1、IgG2、IgG4可以与葡萄球菌蛋白A（SPA）结合，用于抗体纯化和免疫诊断；IgG1、IgG3可以激活补体，并与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合，发挥调理作用和ADCC作用。此外，某些自身抗体和引起超敏反应的抗体也属于IgG。

过氧化物酶是一种常用的酶，通常从辣根中提取（因此称为辣根过氧化物酶）。它不仅广泛应用于多个生化检测项目，还被广泛用于免疫类（ELISA）试剂盒。作为试剂盒显色体系的关键成分，过氧化物酶对试剂盒的质量有重要影响。

辣根过氧化物酶标记兔抗猴IGG的研究应用

用于新型埃博拉疫苗诱导灵长类治疗性抗体研究

利用病毒载体疫苗平台，研究团队构建了多种埃博拉病毒和马尔堡病毒的腺病毒载体疫苗。其中，经过密码子优化的本迪布焦埃博拉病毒GP蛋白编码序列成功重组至病毒载体，并在细胞水平高效表达全长GP蛋白。

通过酶联免疫法（ELISA）和假病毒微量中和实验，研究人员比较了腺病毒载体疫苗、GP蛋白和埃博拉病毒样颗粒（eVLP）三种候选疫苗诱导抗体反应的能力。结果显示，腺病毒载体疫苗无论是单次免疫还是两次免疫，都能迅速诱导高水平的结合抗体和中和抗体。通过优化配伍多种亚型腺病毒载体疫苗，并联合GP蛋白疫苗和eVLP疫苗反复免疫，研究人员获得了可有效中和多种亚型丝状病毒假病毒感染的高免血清。

此外，研究人员还利用AKTA蛋白纯化系统优化纯化体系，以获得高纯度的灵长类免疫球蛋白IgG，并保留了较高的中和活性。由于中国猕猴抗体基因与人类高度相似，因此使用中国猕猴作为免疫动物制备烈性传染病免疫球蛋白可以降低异源蛋白的毒副作用。通过多种疫苗反复免疫灵长类动物，研究人员获得了广谱抗丝状病毒免疫球蛋白IgG，这对于应对不同亚型感染提供了有效的策略，为防控埃博拉疫情提供了解决方案。

参考文献

[1]Han Wang, Yi Shi, Jian Song, Jianxun Qi, Guangwen Lu, Jinghua Yan, George F.Gao. Ebola Viral Glycoprotein Bound to Its Endosomal Receptor Niemann-Pick C1. Cell. 2016(1-2).

[2]Joanna Luczkowiak, José R. Arribas, Sara Gómez, Víctor V. Jiménez-Yuste, Fernando de la Calle, Aurora Viejo, Rafael Delgado. Specific neutralizing response in plasma from convalescent patients of Ebola Virus Disease against the West Africa Makona variant of Ebola virus. Virus Research. 2015.

[3]Madara, Jonathan J, Han, Ziying, Ruthel, Gordon, Freedman, Bruce D, Harty, Ronald N. The multifunctional Ebola virus VP40 matrix protein is a promising therapeutic target. Future Virology. 2015(5).

[4]Jerebtsova, Marina, Nekhai, Sergei. Therapeutics for postexposure treatment of Ebola virus infection. Future Virology. 2015(3).

[5]胡培宇.新型埃博拉疫苗诱导灵长类治疗性抗体研究[D].广州医科大学,2017.

一、简介

辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase，简称HRP）是一组具有酶活性的同工酶，其中HRP C是含量最高的同工酶。

二、结构

辣根过氧化物酶主要由糖蛋白和铁(III)原卟啉IX组成，糖蛋白含有18~22%的糖。HRP的纯度可以通过比值RZ（德文Reinheit Zahl）来表示，纯度越高，RZ值越大。

HRP C是一组单亚基糖蛋白，包含308个氨基酸残基和8个糖链，相对分子质量约为44,000。

三、酶的作用机制和酶学特性

HRP可以催化底物过氧化氢和供氢体生成自由基和水。供氢体可以是芳香族化合物、酚类、吲哚、胺类和磺酸盐类等。HRP的反应最适pH一般在5.0左右，反应温度一般为常温。

四、应用

由于HRP性质稳定、天然来源丰富且容易制备，因此应用较为广泛。

1. HRP在ELISA中被广泛应用作为标记用酶，因为制备容易、价格相对较低、性质稳定。

2. HRP常用于污水处理，可以将污染物氧化成自由基，从而降低对环境的污染。

3. 近年来，HRP被研究用作食品添加剂，用于食品的保鲜、解毒和检测等领域。

4. HRP可以与葡萄糖氧化酶联用，用于检测葡萄糖含量。

背景^[1-3]

辣根过氧化物酶标记兔抗牛IGG是一种特异性结合牛IGG的辣根过氧化物酶标记免疫蛋白，用于检测牛IGG的生物实验，如Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等。

IgG抗体在免疫应答中起着激活补体、中和毒素等作用。它们在妊娠期可以穿过胎盘保护胎儿，并通过乳腺分泌进入初乳，保护新生儿。IgG是血清和细胞外液中最主要的抗体成分，可分为四个亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。

IgG1、IgG3、IgG4在新生儿抗感染免疫中起重要作用，可以穿过胎盘屏障。IgG1、IgG2、IgG4可以与葡萄球菌蛋白A（SPA）结合，用于纯化抗体和免疫诊断。IgG1、IgG3可以激活补体、与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合，发挥调理作用、ADCC作用等。某些自身抗体和引起超敏反应的抗体也属于IgG。

IGG功能

1.激活补体经典途径，介导溶菌和细胞毒作用；

2.介导ADCC效应；

3.调理吞噬作用；

4.结合SPA；

5.中和毒素和病毒。

IgG类自身抗体参与Ⅱ、Ⅲ型超敏反应，在抗感染免疫尤其是再次免疫应答中发挥重要作用。

应用^[4][5]

用于双抗体夹心ELISA检测奶牛隐性乳房炎的研究

奶牛乳房炎是奶牛业经济损失最严重的疾病之一，其中隐性乳房炎没有明显的临床症状，但造成了大量经济损失。建立一种简单、快速、准确、有效的检测方法对于避免经济损失至关重要。

研究人员建立了双抗体夹心ELISA方法用于诊断奶牛隐性乳房炎，并对434头奶牛的1050份常乳进行了检测。该方法的检出率为48.9％，阳性符合率为86％，阴性符合率为76.9％。研究结果表明，双抗体夹心ELISA诊断方法具有良好的敏感性、特异性和稳定性，可作为快速诊断奶牛隐性乳房炎的依据之一。

参考文献

[1]Field trials of a vaccine gainst bovine mastitis 1:evaluation in heifers..Jose A,A ldo CA,Horaco R,et al.Journal of Dairy Science.1997

[2]Diseases of Cattle.Gibbons,W.J.et al..1963

[3]Leukocyte key to udder defense.Current concept of bovine mastitis.1996

[4]Immune mechanism of the bovine udder.An overview.Nickerson S C..1985

[5]高会玲.双抗体夹心ELISA检测奶牛隐性乳房炎的研究[D].吉林农业大学,2007.

辣根过氧化物酶标记羊抗人IGG是一种多克隆抗体，以人IGG H&L为抗原，具有特异性结合人IGG H&L的能力。它主要用于ICC/IF、Dotblot、ELISA、IHC-P、IHC-Fr、Immunomicroscopy、WB等人IGG H&L检测实验。

抗原与抗体的特异性结合是基于它们之间的结构互补性和亲和性。这种特性取决于抗原和抗体分子的空间构型。除了分子构型的互补性外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触才能产生足够的结合力。

抗原抗体反应可以分为两个阶段：第一阶段是抗原与抗体特异性结合的阶段，这个阶段的反应很快，只需要几秒钟到几分钟，但没有可见的反应。

第二阶段是可见反应阶段，在适当的温度、pH值、电解质和补体的影响下，抗原抗体复合物会出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应。这个阶段的反应较慢，通常需要几分钟到几小时。在血清学反应中，这两个阶段往往无法严格分开，因为它们受到反应条件（如温度、pH值、电解质、抗原抗体比例等）的影响。

免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白的主要成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%。它的正常值为9.5~12.5mg/ml。其中40%~50%分布在血清中，其余分布在组织中。它的分子量约为150000道尔顿。人类血清中的IgG主要是单体，包括四个亚型，其中IgG1占60%~70%，IgG2占15%~20%，IgG3占5%~10%，IgG4占1%~7%。这些亚型在经典途径的补体激活中具有不同的结合能力。

辣根过氧化物酶标记羊抗人IGG在特发性膜性肾病中的研究意义

特发性膜性肾病（IMN）的发病机制是由于免疫球蛋白G（IgG）与肾小球足细胞基底膜侧的固有抗原结合形成抗原抗体复合物，激活补体形成膜攻击复合物（Membrane attack complex MAC，C5b-9），导致足细胞形态改变，进而产生蛋白尿和低蛋白血症等一系列症状。足细胞沉积的IgG亚类主要是IgG4，新近发现的几种致病抗原在肾小球内与IgG4的沉积位置一致。补体系统是IMN肾小球损伤的最重要调节者，IMN的补体激活主要经过替代途径，补体激活受到促进因素（免疫复合物）和抑制因素（补体调节蛋白）的影响。

补体调节因子Ⅰ（Complement FactorⅠ，CFI）又称补体Ⅰ因子，表达于肝细胞、单核细胞、成纤维细胞和角质细胞等，是替代途径中重要的补体调节蛋白。Ⅰ因子能够裂解C3b，在补体活化过程中起到重要的抑制作用，从而减少MAC的形成，减少足细胞的损伤。

通过对组织和体液标本的生化指标检测、免疫组织化学染色法以及ELISA法分析IgG亚类、补体Ⅰ因子和C3b在IMN和微小病变型肾病（minimal change disease，MCD）肾组织中的表达，可以比较分析它们的表达水平，并进一步研究IgG4、补体Ⅰ因子和C3b之间的关系，以及补体Ⅰ因子在IMN中补体激活调节机制中的意义。

参考文献

[1] Arezou Khosroshahi, Rivka Ayalon, Laurence H. Beck, David J. Salant, Donald B. Bloch, John H. Stone, Hisanori Umehara. IgG4-Related Disease Is Not Associated with Antibody to the Phospholipase A2 Receptor. International Journal of Rheumatology. 2012.

[2] Claudio Ponticelli, Patrizia Passerini. Management of idiopathic membranous nephropathy. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 2010.

[3] Pierre Ronco, Hanna Debiec. Membranous glomerulopathy: the evolving story. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 2010.

[4] Yoshie Segawa, Satoshi Hisano, Misao Matsushita, Teizo Fujita, Shinichi Hirose, Morishige Takeshita, Hiroshi Iwasaki. IgG subclasses and complement pathway in segmental and global membranous nephropathy. Pediatric Nephrology. 2010.

[5] 刘小静. IgG4、补体Ⅰ因子在特发性膜性肾病中的意义. 河北医科大学, 2014.