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三子养亲汤如何影响哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达? 1

平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞。它们的长度和宽度在不同部位有所不同,但都具有聚集成束的特点。平滑肌细胞的胞质称为肌浆,其中包含肌原纤维。每个平滑肌细胞外面都有一层肌膜,而且这些细胞具有很大的弹性和韧力。

平滑肌细胞在支气管中起着重要的功能。它们能够维持支气管的张力,保持支气管的形态。此外,平滑肌细胞还通过分泌细胞因子和趋化因子等促炎介质,发挥免疫调节功能。

相关研究表明,三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达有影响。实验结果显示,三子养亲汤中药高剂量组的CysLTR1mRNA表达下降显著,而低剂量组的下降不显著。这表明抑制CysLTR1炎性通路是三子养亲汤的作用机制之一。

主要参考资料

[1] 新编实用医学词典

[2] 三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达的影响

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平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞。它们的长度和宽度在不同部位有所不同,但都具有聚集成束的特点。平滑肌细胞的胞质称为肌浆,其中包含肌原纤维。每个平滑肌细胞外面都有一层肌膜,而且这些细胞具有很大的弹性和韧力。

平滑肌细胞在支气管中起着重要的功能。它们能够维持支气管的张力,保持支气管的形态。此外,平滑肌细胞还通过分泌细胞因子和趋化因子等促炎介质,发挥免疫调节功能。

相关研究表明,三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达有影响。实验结果显示,三子养亲汤中药高剂量组的CysLTR1mRNA表达下降显著,而低剂量组的下降不显著。这表明抑制CysLTR1炎性通路是三子养亲汤的作用机制之一。

主要参考资料

[1] 新编实用医学词典

[2] 三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达的影响

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成纤维细胞的形态结构如何随功能状态的改变而变化? 1

成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞之一,它们位于胶原纤维附近并与其相互作用。成纤维细胞的形态结构会随着功能状态的改变而发生变化。在功能活跃时,成纤维细胞呈扁平星形,胞体较大,胞核呈卵圆形,胞质中含有丰富的细胞器和结构,表明其具有合成和分泌蛋白质的能力。而在功能不活跃时,成纤维细胞会转化为纤维细胞,形态较小,胞质较少,细胞器不发达。然而,在某些条件下,纤维细胞也可以转化为活跃的成纤维细胞,参与组织修复和蛋白质合成。

小鼠支气管成纤维细胞是从支气管组织中分离得到的。支气管是连接气管和肺部的呼吸道,其结构复杂且分支众多。小鼠支气管成纤维细胞在培养基中呈圆形,随着时间的推移,细胞会贴壁并伸出伪足,最终形成梭形。这些细胞具有构造和维持组织形态的功能,同时也能合成和释放细胞外基质,以及参与组织损伤的修复。

参考资料:

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

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成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞之一,它们位于胶原纤维附近并与其相互作用。成纤维细胞的形态结构会随着功能状态的改变而发生变化。在功能活跃时,成纤维细胞呈扁平星形,胞体较大,胞核呈卵圆形,胞质中含有丰富的细胞器和结构,表明其具有合成和分泌蛋白质的能力。而在功能不活跃时,成纤维细胞会转化为纤维细胞,形态较小,胞质较少,细胞器不发达。然而,在某些条件下,纤维细胞也可以转化为活跃的成纤维细胞,参与组织修复和蛋白质合成。

小鼠支气管成纤维细胞是从支气管组织中分离得到的。支气管是连接气管和肺部的呼吸道,其结构复杂且分支众多。小鼠支气管成纤维细胞在培养基中呈圆形,随着时间的推移,细胞会贴壁并伸出伪足,最终形成梭形。这些细胞具有构造和维持组织形态的功能,同时也能合成和释放细胞外基质,以及参与组织损伤的修复。

参考资料:

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

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小鼠食管上皮细胞的特点及其研究? 1

上皮细胞是覆盖身体表面和腔面的细胞,具有明显的极性。它们分为游离面和基底面,分别朝向身体表面或深部结缔组织。上皮细胞具有角质形成和更新的能力,并且在保护、吸收、分泌和排泄等方面起着重要作用。食管是连接咽和胃的消化道,食管上皮细胞的研究对于了解食管的正常生理和癌变机制具有重要意义。

食管上皮细胞的发育和表达

为了研究细胞角蛋白4(CK4)和角蛋白14(CK14)在小鼠食管上皮发育中的表达情况,我们采用免疫组织化学方法观察了从胚胎发育到成年小鼠的表达情况。结果显示,CK4和CK14在小鼠食管上皮中均有表达。CK4的表达从胚胎第15天开始,而CK14的表达则从胚胎第11天开始。两者在小鼠胚胎第16天开始表达明显,并随着胚胎发育逐渐增强,生后第7天达到最高水平。CK4主要在食管上皮基底层以上表达,而CK14则在食管上皮的基底层表达。随着生长,它们的表达逐渐降低。

参考资料:

[1] 儿科学辞典

[2] CK4、CK14在小鼠食管上皮的表达

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上皮细胞是覆盖身体表面和腔面的细胞,具有明显的极性。它们分为游离面和基底面,分别朝向身体表面或深部结缔组织。上皮细胞具有角质形成和更新的能力,并且在保护、吸收、分泌和排泄等方面起着重要作用。食管是连接咽和胃的消化道,食管上皮细胞的研究对于了解食管的正常生理和癌变机制具有重要意义。

食管上皮细胞的发育和表达

为了研究细胞角蛋白4(CK4)和角蛋白14(CK14)在小鼠食管上皮发育中的表达情况,我们采用免疫组织化学方法观察了从胚胎发育到成年小鼠的表达情况。结果显示,CK4和CK14在小鼠食管上皮中均有表达。CK4的表达从胚胎第15天开始,而CK14的表达则从胚胎第11天开始。两者在小鼠胚胎第16天开始表达明显,并随着胚胎发育逐渐增强,生后第7天达到最高水平。CK4主要在食管上皮基底层以上表达,而CK14则在食管上皮的基底层表达。随着生长,它们的表达逐渐降低。

参考资料:

[1] 儿科学辞典

[2] CK4、CK14在小鼠食管上皮的表达

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滑膜细胞的特点及功能是什么? 1

滑膜细胞是一种扁平或多边形的细胞,其细胞核形状可以是梭形、圆形或卵圆形。滑膜细胞排列疏松,呈上皮样排列,没有基膜。有些滑膜细胞表面具有分支的突起,这些突起沿表面水平伸展,相邻细胞的突起彼此呈指状交叉,还有一些细胞表面具有少数丝状伪足。滑膜细胞之间的间隙内含有少量结缔组织基质,细胞间隙的基质与滑液接触,进行物质交换。

根据电镜研究,滑膜细胞可分为A型和B型,其中A型细胞较为常见。A型细胞表面具有丝状伪足,胞质内含有大型高尔基复合体、溶酶体、吞饮小泡和微丝等结构,但粗面内质网较少。B型细胞内含有丰富的粗面内质网和游离核糖体,而其他细胞器较少。A型细胞类似于巨噬细胞,B型细胞则类似于成纤维细胞,但这两种细胞可能是同一种细胞的不同功能状态。滑膜细胞的功能包括产生滑液的粘蛋白和具有吞噬作用,其中A型细胞的吞噬作用更为活跃。小鼠滑膜细胞是从滑膜组织中分离得到的,其主要功能包括:①产生润滑液成分,与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关;②增生,表现为不依赖于支持物生长,并分泌大量效应分子来促进炎症和关节损伤;③作为自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。小鼠滑膜细胞通过混合酶消化法制备,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1]中国医学百科全书·十三组织学与胚胎学

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滑膜细胞是一种扁平或多边形的细胞,其细胞核形状可以是梭形、圆形或卵圆形。滑膜细胞排列疏松,呈上皮样排列,没有基膜。有些滑膜细胞表面具有分支的突起,这些突起沿表面水平伸展,相邻细胞的突起彼此呈指状交叉,还有一些细胞表面具有少数丝状伪足。滑膜细胞之间的间隙内含有少量结缔组织基质,细胞间隙的基质与滑液接触,进行物质交换。

根据电镜研究,滑膜细胞可分为A型和B型,其中A型细胞较为常见。A型细胞表面具有丝状伪足,胞质内含有大型高尔基复合体、溶酶体、吞饮小泡和微丝等结构,但粗面内质网较少。B型细胞内含有丰富的粗面内质网和游离核糖体,而其他细胞器较少。A型细胞类似于巨噬细胞,B型细胞则类似于成纤维细胞,但这两种细胞可能是同一种细胞的不同功能状态。滑膜细胞的功能包括产生滑液的粘蛋白和具有吞噬作用,其中A型细胞的吞噬作用更为活跃。小鼠滑膜细胞是从滑膜组织中分离得到的,其主要功能包括:①产生润滑液成分,与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关;②增生,表现为不依赖于支持物生长,并分泌大量效应分子来促进炎症和关节损伤;③作为自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。小鼠滑膜细胞通过混合酶消化法制备,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1]中国医学百科全书·十三组织学与胚胎学

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成纤维细胞的形态结构及功能? 1

成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,其形态结构和功能状态密切相关。在功能活动旺盛时,成纤维细胞呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器和结构,表明其具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的能力。而在功能活动不活跃时,成纤维细胞转化为纤维细胞,形态和功能均发生改变。纤维细胞较小,呈梭形,胞质少,细胞器不发达。然而,在创伤修复和结缔组织再生等条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与组织修复和蛋白质合成。

小鼠肺动脉成纤维细胞是从肺动脉组织中分离得到的。肺动脉是起源于心脏的一条主干动脉,将含有二氧化碳较多的静脉血送到肺脏进行气体交换。小鼠肺动脉成纤维细胞的形态特征包括圆形、折光性良好,并能在培养基中悬浮。随着时间的推移,细胞逐渐贴壁并伸出伪足,最终形成梭形。这些细胞具有构造和维持肺动脉形态的功能,同时也合成和释放细胞外基质,以及参与组织损伤后的修复过程。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

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成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,其形态结构和功能状态密切相关。在功能活动旺盛时,成纤维细胞呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器和结构,表明其具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的能力。而在功能活动不活跃时,成纤维细胞转化为纤维细胞,形态和功能均发生改变。纤维细胞较小,呈梭形,胞质少,细胞器不发达。然而,在创伤修复和结缔组织再生等条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与组织修复和蛋白质合成。

小鼠肺动脉成纤维细胞是从肺动脉组织中分离得到的。肺动脉是起源于心脏的一条主干动脉,将含有二氧化碳较多的静脉血送到肺脏进行气体交换。小鼠肺动脉成纤维细胞的形态特征包括圆形、折光性良好,并能在培养基中悬浮。随着时间的推移,细胞逐渐贴壁并伸出伪足,最终形成梭形。这些细胞具有构造和维持肺动脉形态的功能,同时也合成和释放细胞外基质,以及参与组织损伤后的修复过程。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

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高通量基因编辑技术如何提高基因编辑效率和准确性? 1

高通量基因编辑技术是一种帮助人们实现“编辑生命”愿望的新方法。传统的基因编辑技术存在局限性,只能在一个反应中操作一个或数个基因,并且可能会在基因组中留下不需要的序列修改。这种常规的基因编辑方法无法满足大规模研究中对多种基因的编辑需求。而高通量基因编辑技术可以同时编辑数百种基因。

一种新的高通量基因编辑方法:guide+donor

哈佛大学George Church教授领导的研究团队开发了一种基于CRISPR-Cas9的新型高通量基因编辑方法:guide+donor。这种方法可以在单个酿酒酵母中同时精确改变数百个不同基因,编辑效率高达80%至100%。此外,该方法还可以选择特定行为细胞,在生物体内进行定向基因编辑和修复。guide+donor不仅可以帮助构建大型文库,还可以进行基因功能分析,发现未知的基因突变和功能。

新的高通量基因编辑方法不仅在酵母中进行高效的“功能基因组学”研究,还可以模拟和检测酵母细胞中与特定性状或功能紊乱相关的低频基因突变,并找出与疾病相关的基因。此外,该方法还可以挖掘新的基因和功能,并研究基因组中的非编码序列,提高对基因调控和染色体生物学的理解。

该高通量基因编辑方法的技术优势包括:在一个反应中快速构建大型DNA变异文库;在一个反应中同时提供guide和donor,防止无效修复和非生产性修复;含有guide+donor组合的质粒可以作为追踪基因编辑细胞的独特条形码,利用NGS技术可以进行高通量分子表型鉴定。

主要参考资料

[1] High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries using CRISPR–Cas9 in yeast

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高通量基因编辑技术是一种帮助人们实现“编辑生命”愿望的新方法。传统的基因编辑技术存在局限性,只能在一个反应中操作一个或数个基因,并且可能会在基因组中留下不需要的序列修改。这种常规的基因编辑方法无法满足大规模研究中对多种基因的编辑需求。而高通量基因编辑技术可以同时编辑数百种基因。

一种新的高通量基因编辑方法:guide+donor

哈佛大学George Church教授领导的研究团队开发了一种基于CRISPR-Cas9的新型高通量基因编辑方法:guide+donor。这种方法可以在单个酿酒酵母中同时精确改变数百个不同基因,编辑效率高达80%至100%。此外,该方法还可以选择特定行为细胞,在生物体内进行定向基因编辑和修复。guide+donor不仅可以帮助构建大型文库,还可以进行基因功能分析,发现未知的基因突变和功能。

新的高通量基因编辑方法不仅在酵母中进行高效的“功能基因组学”研究,还可以模拟和检测酵母细胞中与特定性状或功能紊乱相关的低频基因突变,并找出与疾病相关的基因。此外,该方法还可以挖掘新的基因和功能,并研究基因组中的非编码序列,提高对基因调控和染色体生物学的理解。

该高通量基因编辑方法的技术优势包括:在一个反应中快速构建大型DNA变异文库;在一个反应中同时提供guide和donor,防止无效修复和非生产性修复;含有guide+donor组合的质粒可以作为追踪基因编辑细胞的独特条形码,利用NGS技术可以进行高通量分子表型鉴定。

主要参考资料

[1] High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries using CRISPR–Cas9 in yeast

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如何培养和鉴定成纤维细胞的纯度? 1

成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,其形态结构和功能与其活动状态密切相关。在功能活动旺盛时,成纤维细胞呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的粗面内质网、核蛋白体、高尔基复合体以及微丝和微管等结构。这些结构的存在表明成纤维细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的能力,从而形成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维和基质。而在相对静止或功能活动不活跃时,成纤维细胞转化为纤维细胞,其形态较小且呈梭形,胞质较少,细胞器发育不完全。然而,在创伤修复和结缔组织再生等条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与蛋白质的合成和分泌,形成纤维和基质。

如何培养成纤维细胞

为了培养成纤维细胞,首先需要将皮肤组织剪成细小碎块,然后使用0.25%胰蛋白酶进行消化。消化后的组织碎块加入含有10%FBS和1万U/L青霉素、链霉素的RPMR1640完全培养基中,并放入含有5%二氧化碳、37℃的孵箱中培养。每隔12小时更换培养液,直到细胞长成梭形并融合至约70%时,使用胰蛋白酶进行细胞传代。

如何鉴定成纤维细胞的纯度

为了鉴定成纤维细胞的纯度,可以使用鼠抗人成纤维细胞抗体进行染色。首先,将固定的细胞与鼠抗人成纤维细胞抗体孵育,然后用PBS洗涤细胞,并加入抗鼠二抗进行孵育。最后,在荧光显微镜下观察细胞,并计算荧光阳性细胞数和明场总细胞数的比值,作为纯度指标。

参考资料:

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 蛋白酶活化受体在胎儿真皮成纤维细胞上的表达

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成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,其形态结构和功能与其活动状态密切相关。在功能活动旺盛时,成纤维细胞呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的粗面内质网、核蛋白体、高尔基复合体以及微丝和微管等结构。这些结构的存在表明成纤维细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的能力,从而形成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维和基质。而在相对静止或功能活动不活跃时,成纤维细胞转化为纤维细胞,其形态较小且呈梭形,胞质较少,细胞器发育不完全。然而,在创伤修复和结缔组织再生等条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与蛋白质的合成和分泌,形成纤维和基质。

如何培养成纤维细胞

为了培养成纤维细胞,首先需要将皮肤组织剪成细小碎块,然后使用0.25%胰蛋白酶进行消化。消化后的组织碎块加入含有10%FBS和1万U/L青霉素、链霉素的RPMR1640完全培养基中,并放入含有5%二氧化碳、37℃的孵箱中培养。每隔12小时更换培养液,直到细胞长成梭形并融合至约70%时,使用胰蛋白酶进行细胞传代。

如何鉴定成纤维细胞的纯度

为了鉴定成纤维细胞的纯度,可以使用鼠抗人成纤维细胞抗体进行染色。首先,将固定的细胞与鼠抗人成纤维细胞抗体孵育,然后用PBS洗涤细胞,并加入抗鼠二抗进行孵育。最后,在荧光显微镜下观察细胞,并计算荧光阳性细胞数和明场总细胞数的比值,作为纯度指标。

参考资料:

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 蛋白酶活化受体在胎儿真皮成纤维细胞上的表达

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为什么甲基化是遗传基因调控生命活动的重要化学反应? 1

甲基化是指人体内新陈代谢产生的一种化学反应,它将"甲基分子集团"贴到蛋白质、DNA和其他分子上。甲基化在胚胎发育、衰老、肿瘤发生等生理和病理过程中起着重要的调控作用,是保持身体正常运转和自然健康状态所必需的。

人靶向甲基化测序系统是一种全面的靶向序列捕获系统,也被称为Human Methyl-Seq。它可以帮助研究人员关注那些已知甲基化可影响基因调节的区域,如CpG islands、CpG island shores、CpG island shelves、undermethylated区域、启动子和差异性甲基化区域(DMR)。

为什么选择人靶向甲基化测序系统?

相比甲基化芯片,人靶向甲基化测序系统可以提供更多的信息。与全基因组重亚硫酸盐测序相比,它可以提高通量并降低成本,同时还可以发现限制性内切酶、免疫沉淀或SNP相关方法所不能检测的甲基化区域。该系统设计覆盖了370万个CpG,共84 Mb,不依赖于甲基化状态的探针,具有高灵敏度,分辨率可达到单个碱基。此外,与现有的甲基化方法相比,它可以降低偏差(bias)。

人靶向甲基化测序系统的测序类型包括CpG岛、GENCODE启动子、癌症、组织特异性DMR,以及其他调控序列。通过使用GeneSpring NGS软件进行DNA甲基化分析,可以快速实现甲基化水平、CpG区域覆盖、读长对齐和碱基质量的可视化。通过单碱基对分辨率鉴定甲基化状态,并与特定目标基因重叠,可以获得深入的生物学见解,发现DMR和DMC的基因和基因间效应,并将其与QPCR、ChIP测序和RNA测序结果相关联。

如何进行人靶向甲基化测序系统的工作流程?

参考文献

[1] 新编老年学词典

[2] Human靶向甲基化测序技术说明书

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甲基化是指人体内新陈代谢产生的一种化学反应,它将"甲基分子集团"贴到蛋白质、DNA和其他分子上。甲基化在胚胎发育、衰老、肿瘤发生等生理和病理过程中起着重要的调控作用,是保持身体正常运转和自然健康状态所必需的。

人靶向甲基化测序系统是一种全面的靶向序列捕获系统,也被称为Human Methyl-Seq。它可以帮助研究人员关注那些已知甲基化可影响基因调节的区域,如CpG islands、CpG island shores、CpG island shelves、undermethylated区域、启动子和差异性甲基化区域(DMR)。

为什么选择人靶向甲基化测序系统?

相比甲基化芯片,人靶向甲基化测序系统可以提供更多的信息。与全基因组重亚硫酸盐测序相比,它可以提高通量并降低成本,同时还可以发现限制性内切酶、免疫沉淀或SNP相关方法所不能检测的甲基化区域。该系统设计覆盖了370万个CpG,共84 Mb,不依赖于甲基化状态的探针,具有高灵敏度,分辨率可达到单个碱基。此外,与现有的甲基化方法相比,它可以降低偏差(bias)。

人靶向甲基化测序系统的测序类型包括CpG岛、GENCODE启动子、癌症、组织特异性DMR,以及其他调控序列。通过使用GeneSpring NGS软件进行DNA甲基化分析,可以快速实现甲基化水平、CpG区域覆盖、读长对齐和碱基质量的可视化。通过单碱基对分辨率鉴定甲基化状态,并与特定目标基因重叠,可以获得深入的生物学见解,发现DMR和DMC的基因和基因间效应,并将其与QPCR、ChIP测序和RNA测序结果相关联。

如何进行人靶向甲基化测序系统的工作流程?

参考文献

[1] 新编老年学词典

[2] Human靶向甲基化测序技术说明书

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人乳腺细胞HBL-100的特性及相关研究? 1

HBL-100/人乳腺细胞HBL-100是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物,该细胞通过筛选的方法或单细胞分离培养,是用于科研的稳定细胞系。HBL-100/人乳腺细胞HBL-100不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。有实验研究Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株与人乳腺细胞株中的表达及意义,应用Westernblotting、RT-PCR等方法测定Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株MCF-7、ZR-75-30、T47D、MDA-MB-435s、MDA-MB-453、MDA-MB-231与HBL-100/人乳腺细胞HBL-100中的表达情况。

研究结果显示乳腺癌细胞株与乳腺细胞株中的Y14和Upf1表达水平存在明显差异,乳腺癌细胞中的Y14和Upf1表达明显高于乳腺细胞株(P0.05)。此外,还有研究探讨叶酸缺乏对HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响,将HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和MCF-7细胞在叶酸缺乏的培养液(实验组)和正常培养液(对照组)中培养30d,用电镜和流式细胞仪测定叶酸缺乏对HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响。结果显示,HBL-100/人乳腺细胞HBL-100在两种培养液中生长30d后,观察结果显示叶酸缺乏可引起HBL-100细胞凋亡增高,而对MCF-7细胞凋亡率则无影响。因此叶酸缺乏可增加HBL-100/人乳腺细胞HBL-100的凋亡率。

此外,还有实验探讨金雀异黄素(gen)衍生物5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮体外选择性抑制人乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测DOdFMG对MCF-7和HBL-100/人乳腺细胞HBL-100生长的影响;流式细胞术和AO/EB荧光双染法测定DOdFMG诱导MCF-7细胞凋亡作用及对细胞周期的影响。结果显示DOdFMG抑制MCF-7细胞生长,呈时间剂量依赖,比gen具有更强选择性和抗肿瘤活性;DOdFMG能诱导MCF-7细胞凋亡,DOdFMG40.0μM组比gen100μM组诱导凋亡的活性更强,DOdFMGMCF-7将MCF-7细胞阻滞于S期和G2期,呈浓度依赖。因此DOdFMG能抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长和诱导凋亡,是一种高效、毒副作用小的新型治疗乳腺癌候选药物。

主要参考资料

[1]Y14和Upf1在人乳腺癌细胞与乳腺细胞中的表达及意义

[2] 叶酸缺乏对HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响

[3] 5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

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HBL-100/人乳腺细胞HBL-100是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物,该细胞通过筛选的方法或单细胞分离培养,是用于科研的稳定细胞系。HBL-100/人乳腺细胞HBL-100不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。有实验研究Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株与人乳腺细胞株中的表达及意义,应用Westernblotting、RT-PCR等方法测定Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株MCF-7、ZR-75-30、T47D、MDA-MB-435s、MDA-MB-453、MDA-MB-231与HBL-100/人乳腺细胞HBL-100中的表达情况。

研究结果显示乳腺癌细胞株与乳腺细胞株中的Y14和Upf1表达水平存在明显差异,乳腺癌细胞中的Y14和Upf1表达明显高于乳腺细胞株(P0.05)。此外,还有研究探讨叶酸缺乏对HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响,将HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和MCF-7细胞在叶酸缺乏的培养液(实验组)和正常培养液(对照组)中培养30d,用电镜和流式细胞仪测定叶酸缺乏对HBL-100/人乳腺细胞HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响。结果显示,HBL-100/人乳腺细胞HBL-100在两种培养液中生长30d后,观察结果显示叶酸缺乏可引起HBL-100细胞凋亡增高,而对MCF-7细胞凋亡率则无影响。因此叶酸缺乏可增加HBL-100/人乳腺细胞HBL-100的凋亡率。

此外,还有实验探讨金雀异黄素(gen)衍生物5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮体外选择性抑制人乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测DOdFMG对MCF-7和HBL-100/人乳腺细胞HBL-100生长的影响;流式细胞术和AO/EB荧光双染法测定DOdFMG诱导MCF-7细胞凋亡作用及对细胞周期的影响。结果显示DOdFMG抑制MCF-7细胞生长,呈时间剂量依赖,比gen具有更强选择性和抗肿瘤活性;DOdFMG能诱导MCF-7细胞凋亡,DOdFMG40.0μM组比gen100μM组诱导凋亡的活性更强,DOdFMGMCF-7将MCF-7细胞阻滞于S期和G2期,呈浓度依赖。因此DOdFMG能抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长和诱导凋亡,是一种高效、毒副作用小的新型治疗乳腺癌候选药物。

主要参考资料

[1]Y14和Upf1在人乳腺癌细胞与乳腺细胞中的表达及意义

[2] 叶酸缺乏对HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响

[3] 5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

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猫肾细胞系F81的特点及应用? 1

猫肾细胞系F81是通过传代克隆筛选转化而来的工程细胞系,具有贴壁生长的特点,并可进行连续传代培养。该细胞系对多种宠物病和特产经济动物病病毒非常敏感,如犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒、水貂病毒性肠炎病毒等,因此被广泛应用于这些疫病疫苗病毒的制备。

研究者还在F81/猫肾细胞中开发了一种犬细小病毒原位PCR的检测方法。通过在染毒12小时、24小时和48小时后,使用特异性引物进行原位PCR检测,结果显示在染毒48小时的细胞片上,原位PCR法检测到的阳性率较高,具有高敏感性和组织定位的优点。与常规免疫组化方法相比,差异极显著。

此外,研究者还利用空气干燥法制备了F81/猫肾细胞的染色体标本,并进行了核型分析。结果表明,F81为亚二倍体细胞系,染色体众数为30,各代次的染色体结构畸变率为0。F81/猫肾细胞的遗传学特性相对稳定,基础细胞库和最高代次细胞中存在相同的染色体标志和核型,可作为制苗用细胞。

主要参考资料

[1] CN201710624877.1一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F?81S及其应用

[2] 猫肾F_(81)传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法

[3] 猫肾细胞系F81传代细胞染色体遗传变异率分析

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猫肾细胞系F81是通过传代克隆筛选转化而来的工程细胞系,具有贴壁生长的特点,并可进行连续传代培养。该细胞系对多种宠物病和特产经济动物病病毒非常敏感,如犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒、水貂病毒性肠炎病毒等,因此被广泛应用于这些疫病疫苗病毒的制备。

研究者还在F81/猫肾细胞中开发了一种犬细小病毒原位PCR的检测方法。通过在染毒12小时、24小时和48小时后,使用特异性引物进行原位PCR检测,结果显示在染毒48小时的细胞片上,原位PCR法检测到的阳性率较高,具有高敏感性和组织定位的优点。与常规免疫组化方法相比,差异极显著。

此外,研究者还利用空气干燥法制备了F81/猫肾细胞的染色体标本,并进行了核型分析。结果表明,F81为亚二倍体细胞系,染色体众数为30,各代次的染色体结构畸变率为0。F81/猫肾细胞的遗传学特性相对稳定,基础细胞库和最高代次细胞中存在相同的染色体标志和核型,可作为制苗用细胞。

主要参考资料

[1] CN201710624877.1一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F?81S及其应用

[2] 猫肾F_(81)传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法

[3] 猫肾细胞系F81传代细胞染色体遗传变异率分析

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星形胶质细胞的作用及特点是什么? 1

星形胶质细胞,又称星形胶质,是神经系统中体积最大、数目最多的细胞,对神经元的代谢起着重要作用。它们可以分为纤维性星形胶质细胞和原浆性星形胶质细胞。纤维性星形胶质细胞主要分布在白质,而原浆性星形胶质细胞主要分布在灰质。星形胶质细胞具有支持、修复脑和脊髓损伤,吞噬和隔离突触的作用,同时也参与神经元的代谢过程。

人体中的星形胶质细胞分离自脑组织。大脑分为左右两个半球,大脑皮质是神经元胞体集中的地方,而白质则由神经纤维或髓鞘构成。人体中的星形胶质细胞是一类广泛分布的细胞,也是体积最大的胶质细胞。通过经典的金属浸镀技术,我们可以观察到这些细胞呈星形,从胞体发出许多长而分支的突起,起到支持和分隔神经细胞的作用。细胞突起的末端常常形成脚板,有些脚板贴附在毛细血管壁上,有些则附着在软膜内表面,形成胶质界膜。

人体中的星形胶质细胞不仅具有支持功能,还能够合成和分泌多种神经活性物质,对维持神经元内外环境、生存、迁移、免疫调节、信号转导、轴突生长和功能整合等方面起着重要作用。这些细胞可以通过酶消化法结合差速贴壁法制备,纯度可达90%以上,并且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

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星形胶质细胞,又称星形胶质,是神经系统中体积最大、数目最多的细胞,对神经元的代谢起着重要作用。它们可以分为纤维性星形胶质细胞和原浆性星形胶质细胞。纤维性星形胶质细胞主要分布在白质,而原浆性星形胶质细胞主要分布在灰质。星形胶质细胞具有支持、修复脑和脊髓损伤,吞噬和隔离突触的作用,同时也参与神经元的代谢过程。

人体中的星形胶质细胞分离自脑组织。大脑分为左右两个半球,大脑皮质是神经元胞体集中的地方,而白质则由神经纤维或髓鞘构成。人体中的星形胶质细胞是一类广泛分布的细胞,也是体积最大的胶质细胞。通过经典的金属浸镀技术,我们可以观察到这些细胞呈星形,从胞体发出许多长而分支的突起,起到支持和分隔神经细胞的作用。细胞突起的末端常常形成脚板,有些脚板贴附在毛细血管壁上,有些则附着在软膜内表面,形成胶质界膜。

人体中的星形胶质细胞不仅具有支持功能,还能够合成和分泌多种神经活性物质,对维持神经元内外环境、生存、迁移、免疫调节、信号转导、轴突生长和功能整合等方面起着重要作用。这些细胞可以通过酶消化法结合差速贴壁法制备,纯度可达90%以上,并且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

 

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人乳腺上皮细胞的特点和功能? 1

上皮细胞是覆盖身体表面和内腔器官的细胞,具有明显的极性,分为游离面和基底面。上皮细胞具有角质生成和更新的能力,同时也具有保护、吸收、分泌和排泄等功能。乳腺是女性乳房内分泌乳汁的腺体,由脂肪和结缔组织分隔成多个腺小叶,每个腺小叶以乳头为中心呈放射状排列。乳腺上皮细胞分离自乳腺组织,具有贴壁生长型细胞的特点,主要功能是生乳。

人乳腺上皮细胞的研究

研究发现,温肾中药对雌二醇和孕酮所致的乳腺上皮细胞增殖有影响。通过原代培养正常人乳腺上皮细胞,观察不同浓度温肾中药和他莫昔芬对细胞增殖的影响。结果显示,高浓度温肾中药可以促进细胞增殖,而低浓度温肾中药则具有抑制作用。他莫昔芬对细胞增殖无明显影响。

此外,DNA-PKcs在乳腺上皮细胞的DNA修复过程中起重要作用。通过抑制DNA-PKcs基因的表达,研究发现乳腺细胞对低剂量辐射的敏感性增加,并且与DNA修复相关蛋白的表达减少有关。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

[3] 温肾中药对原代培养正常人乳腺上皮细胞增殖的影响

[4] DNA-PKcs基因沉默抑制人乳腺上皮细胞对低剂量辐射损伤的修复

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上皮细胞是覆盖身体表面和内腔器官的细胞,具有明显的极性,分为游离面和基底面。上皮细胞具有角质生成和更新的能力,同时也具有保护、吸收、分泌和排泄等功能。乳腺是女性乳房内分泌乳汁的腺体,由脂肪和结缔组织分隔成多个腺小叶,每个腺小叶以乳头为中心呈放射状排列。乳腺上皮细胞分离自乳腺组织,具有贴壁生长型细胞的特点,主要功能是生乳。

人乳腺上皮细胞的研究

研究发现,温肾中药对雌二醇和孕酮所致的乳腺上皮细胞增殖有影响。通过原代培养正常人乳腺上皮细胞,观察不同浓度温肾中药和他莫昔芬对细胞增殖的影响。结果显示,高浓度温肾中药可以促进细胞增殖,而低浓度温肾中药则具有抑制作用。他莫昔芬对细胞增殖无明显影响。

此外,DNA-PKcs在乳腺上皮细胞的DNA修复过程中起重要作用。通过抑制DNA-PKcs基因的表达,研究发现乳腺细胞对低剂量辐射的敏感性增加,并且与DNA修复相关蛋白的表达减少有关。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

[3] 温肾中药对原代培养正常人乳腺上皮细胞增殖的影响

[4] DNA-PKcs基因沉默抑制人乳腺上皮细胞对低剂量辐射损伤的修复

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人神经小胶质细胞的起源和特性是什么? 1

人神经小胶质细胞是中枢神经系统中的一种免疫防线,起源和功能备受关注。大脑皮质覆盖着每个大脑半球的大部分,其中集中了神经元胞体。小胶质细胞是一种类似于巨噬细胞的神经胶质细胞,广泛分布在中枢神经系统中。关于小胶质细胞的起源,目前仍存在争议,有人认为它们起源于外胚层,也有人认为它们来源于骨髓造血干细胞。小胶质细胞是CNS固有的免疫成分细胞,具有吞饮功能和一定的迁移能力。在许多病理条件下,小胶质细胞会被活化,表现为增生、聚集以及形态、免疫表型和功能等方面的变化。

小胶质细胞的功能是什么?

小胶质细胞在大脑发育的过程中起到重要作用。它们可以作为大脑的巨噬细胞,在细胞死亡、中枢神经系统受损或病理损伤时发挥作用。此外,小胶质细胞还能表达抗原,进行巨噬作用,并与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

如何分离纯化人神经小胶质细胞?

为了分离纯化人神经小胶质细胞,可以从人工药物引产的胎儿脑组织中获取混合胶质细胞悬液,然后通过培养和纯化步骤得到高纯度的小胶质细胞。具体的方法包括细胞密度调整、摇动法分离贴壁不牢的细胞、胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行纯化等。分离得到的小胶质细胞可以通过激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术等方法进行鉴定和评价。

如何培养人神经小胶质细胞?

人神经小胶质细胞可以通过酶消化法结合差速贴壁法进行培养。在培养基营养缺失数天后,可以通过摇床震荡收集脱落细胞制备细胞悬液。经过免疫荧光鉴定,可以得到纯度达90%以上的小胶质细胞。同时,这些细胞不含有一些病原体,如HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1]小胶质细胞的发育和功能

[2]人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

 

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人神经小胶质细胞是中枢神经系统中的一种免疫防线,起源和功能备受关注。大脑皮质覆盖着每个大脑半球的大部分,其中集中了神经元胞体。小胶质细胞是一种类似于巨噬细胞的神经胶质细胞,广泛分布在中枢神经系统中。关于小胶质细胞的起源,目前仍存在争议,有人认为它们起源于外胚层,也有人认为它们来源于骨髓造血干细胞。小胶质细胞是CNS固有的免疫成分细胞,具有吞饮功能和一定的迁移能力。在许多病理条件下,小胶质细胞会被活化,表现为增生、聚集以及形态、免疫表型和功能等方面的变化。

小胶质细胞的功能是什么?

小胶质细胞在大脑发育的过程中起到重要作用。它们可以作为大脑的巨噬细胞,在细胞死亡、中枢神经系统受损或病理损伤时发挥作用。此外,小胶质细胞还能表达抗原,进行巨噬作用,并与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

如何分离纯化人神经小胶质细胞?

为了分离纯化人神经小胶质细胞,可以从人工药物引产的胎儿脑组织中获取混合胶质细胞悬液,然后通过培养和纯化步骤得到高纯度的小胶质细胞。具体的方法包括细胞密度调整、摇动法分离贴壁不牢的细胞、胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行纯化等。分离得到的小胶质细胞可以通过激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术等方法进行鉴定和评价。

如何培养人神经小胶质细胞?

人神经小胶质细胞可以通过酶消化法结合差速贴壁法进行培养。在培养基营养缺失数天后,可以通过摇床震荡收集脱落细胞制备细胞悬液。经过免疫荧光鉴定,可以得到纯度达90%以上的小胶质细胞。同时,这些细胞不含有一些病原体,如HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1]小胶质细胞的发育和功能

[2]人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

 

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平滑肌细胞的特点及来源是什么? 1

平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞,长度和宽度不一。它们通常聚集成束,细胞轮廓不清晰,需要用适当的溶液将其分离。平滑肌细胞内只有一个细胞核,呈椭圆形或长杆状。细胞外面包有一层肌膜,周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维。平滑肌细胞具有很大的弹性和韧力。

人脑静脉血管平滑肌细胞分离自脑静脉组织,脑静脉管壁较薄。脑静脉分为大脑静脉与小脑静脉,大脑静脉可分为外组和内组。脑静脉的血液回流受到吻合支的作用,阻塞只会造成暂时性或轻微的影响。人脑静脉平滑肌细胞在原代分离培养后,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中。经过传代后,细胞生长较快,形态学特征和生长特点保持不变。

主要参考资料

[1]新编实用医学词典

[2]运动解剖学、运动医学大辞典

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平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞,长度和宽度不一。它们通常聚集成束,细胞轮廓不清晰,需要用适当的溶液将其分离。平滑肌细胞内只有一个细胞核,呈椭圆形或长杆状。细胞外面包有一层肌膜,周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维。平滑肌细胞具有很大的弹性和韧力。

人脑静脉血管平滑肌细胞分离自脑静脉组织,脑静脉管壁较薄。脑静脉分为大脑静脉与小脑静脉,大脑静脉可分为外组和内组。脑静脉的血液回流受到吻合支的作用,阻塞只会造成暂时性或轻微的影响。人脑静脉平滑肌细胞在原代分离培养后,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中。经过传代后,细胞生长较快,形态学特征和生长特点保持不变。

主要参考资料

[1]新编实用医学词典

[2]运动解剖学、运动医学大辞典

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人脑膜成纤维细胞的形态结构和功能? 1

成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,它们位于胶原纤维附近并依附于其上。成纤维细胞的形态结构会随着其功能状态的改变而发生变化。在功能活跃时,成纤维细胞的形态较大,呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器,表明其具有合成和分泌蛋白质的能力。而在功能不活跃时,成纤维细胞会转化为纤维细胞,形态较小,胞质较少,细胞器发育不完全。然而,在某些条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与组织修复和再生过程。

人脑膜成纤维细胞是从正常人脑组织中分离得到的,脑膜是包围脑和脊髓的结缔组织膜。脑膜包括外层的硬膜、中层的蛛网膜和内层的软膜。硬膜具有保护和支持作用,蛛网膜下腔充满脑脊液,起到防御震荡和物质交换的作用,软膜贴附于脑和脊髓,参与营养代谢和脑脊液的产生。

人脑膜成纤维细胞的研究进展

有研究使用反相高效液相色谱法测定人脑膜成纤维细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的活性,并探讨其临床意义。该研究采用荧光检测器和紫外检测器分别检测色氨酸和犬尿氨酸,间接测定IDO活性。实验结果表明该方法灵敏、简便且可靠,IDO可以抑制弓形虫的生长。

另外,还有实验研究探讨了IFN-γ和IL-1诱导人脑膜成纤维细胞抗弓形虫感染的机制。研究结果显示IFN-γ和IL-1可以诱导人脑膜成纤维细胞产生IDO,降解细胞内的色氨酸,从而抑制弓形虫的生长。这种抑制作用可以通过外源性色氨酸的添加来逆转。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

[3] HPLC法测定人脑膜成纤维细胞IDO活性

[4] IFN-γ、IL-1诱导人脑膜成纤维细胞IDO抗弓形虫增殖

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成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,它们位于胶原纤维附近并依附于其上。成纤维细胞的形态结构会随着其功能状态的改变而发生变化。在功能活跃时,成纤维细胞的形态较大,呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器,表明其具有合成和分泌蛋白质的能力。而在功能不活跃时,成纤维细胞会转化为纤维细胞,形态较小,胞质较少,细胞器发育不完全。然而,在某些条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与组织修复和再生过程。

人脑膜成纤维细胞是从正常人脑组织中分离得到的,脑膜是包围脑和脊髓的结缔组织膜。脑膜包括外层的硬膜、中层的蛛网膜和内层的软膜。硬膜具有保护和支持作用,蛛网膜下腔充满脑脊液,起到防御震荡和物质交换的作用,软膜贴附于脑和脊髓,参与营养代谢和脑脊液的产生。

人脑膜成纤维细胞的研究进展

有研究使用反相高效液相色谱法测定人脑膜成纤维细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的活性,并探讨其临床意义。该研究采用荧光检测器和紫外检测器分别检测色氨酸和犬尿氨酸,间接测定IDO活性。实验结果表明该方法灵敏、简便且可靠,IDO可以抑制弓形虫的生长。

另外,还有实验研究探讨了IFN-γ和IL-1诱导人脑膜成纤维细胞抗弓形虫感染的机制。研究结果显示IFN-γ和IL-1可以诱导人脑膜成纤维细胞产生IDO,降解细胞内的色氨酸,从而抑制弓形虫的生长。这种抑制作用可以通过外源性色氨酸的添加来逆转。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 人类学辞典

[3] HPLC法测定人脑膜成纤维细胞IDO活性

[4] IFN-γ、IL-1诱导人脑膜成纤维细胞IDO抗弓形虫增殖

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脑静脉血管内皮细胞的功能及制备方法? 1

脑静脉血管内皮细胞是指覆盖血管和淋巴管内腔的细胞,多为单层扁平上皮。它们起源于增生的血管内皮,也有人认为是来自血液循环中的大单核吞噬细胞。脑静脉血管内皮细胞主要存在于脑静脉组织中,与脑动脉相比,脑静脉管壁较薄。脑静脉由小静脉逐渐汇合而成,最终注入静脉窦。大脑静脉分为外组和内组,分别收集大脑半球背外侧面的浅静脉和髓质、基底神经节、丘脑等部的静脉,最后注入直窦。脑表面和髓质内存在广泛的吻合支,当小静脉发生阻塞时,吻合支可以保证局部血液回流不受影响。

脑静脉血管内皮细胞的主要功能包括维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质参与免疫反应、以及维持凝血和纤溶的动态平衡。为了研究这些功能,可以通过胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法来制备脑静脉血管内皮细胞。制备的细胞总量约为5×10^5cells/瓶,经过CD31/vWF免疫荧光鉴定后,纯度可达90%以上。此外,制备的细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 现代药学名词手册

[2] 运动解剖学、运动医学大辞典

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脑静脉血管内皮细胞是指覆盖血管和淋巴管内腔的细胞,多为单层扁平上皮。它们起源于增生的血管内皮,也有人认为是来自血液循环中的大单核吞噬细胞。脑静脉血管内皮细胞主要存在于脑静脉组织中,与脑动脉相比,脑静脉管壁较薄。脑静脉由小静脉逐渐汇合而成,最终注入静脉窦。大脑静脉分为外组和内组,分别收集大脑半球背外侧面的浅静脉和髓质、基底神经节、丘脑等部的静脉,最后注入直窦。脑表面和髓质内存在广泛的吻合支,当小静脉发生阻塞时,吻合支可以保证局部血液回流不受影响。

脑静脉血管内皮细胞的主要功能包括维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质参与免疫反应、以及维持凝血和纤溶的动态平衡。为了研究这些功能,可以通过胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法来制备脑静脉血管内皮细胞。制备的细胞总量约为5×10^5cells/瓶,经过CD31/vWF免疫荧光鉴定后,纯度可达90%以上。此外,制备的细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 现代药学名词手册

[2] 运动解剖学、运动医学大辞典

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人脑动脉血管内皮细胞的功能和培养条件是什么? 1

内皮细胞系指血管、淋巴管的内膜上皮将内腔面覆盖的细胞。多数是单层扁平上皮属中胎叶性的上皮。血液循环和组织中大单核的游走的吞噬细胞有人认为是来自增生的血管内皮。人脑动脉血管内皮细胞分离自脑动脉组织;脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环;静脉系多不与同名动脉拌行,所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉;各级静脉都没有瓣膜,它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。

人脑动脉血管内皮细胞主要功能:①维持血管内外的动态平衡;②合成和分泌细胞因子和介质;③维持凝血和纤溶的动态平衡。人脑动脉血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。人脑动脉血管内皮细胞培养基为M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、AscorbicAcid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等,推荐使用Procell人脑动脉血管内皮细胞专用完全培养基作为体外培养人脑动脉血管内皮细胞的培养基。人脑动脉血管内皮细胞提取物是从人脑动脉血管内皮细胞提取的,人脑动脉血管内皮细胞从正常人脑动脉组织制备。正常人脑动脉组织采集根据IRB和HIPAA批准的方案进行。

主要参考资料

[1]现代药学名词手册

 

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内皮细胞系指血管、淋巴管的内膜上皮将内腔面覆盖的细胞。多数是单层扁平上皮属中胎叶性的上皮。血液循环和组织中大单核的游走的吞噬细胞有人认为是来自增生的血管内皮。人脑动脉血管内皮细胞分离自脑动脉组织;脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环;静脉系多不与同名动脉拌行,所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉;各级静脉都没有瓣膜,它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。

人脑动脉血管内皮细胞主要功能:①维持血管内外的动态平衡;②合成和分泌细胞因子和介质;③维持凝血和纤溶的动态平衡。人脑动脉血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。人脑动脉血管内皮细胞培养基为M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、AscorbicAcid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等,推荐使用Procell人脑动脉血管内皮细胞专用完全培养基作为体外培养人脑动脉血管内皮细胞的培养基。人脑动脉血管内皮细胞提取物是从人脑动脉血管内皮细胞提取的,人脑动脉血管内皮细胞从正常人脑动脉组织制备。正常人脑动脉组织采集根据IRB和HIPAA批准的方案进行。

主要参考资料

[1]现代药学名词手册

 

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如何制备Turbo感受态细胞并进行质粒转化? 1

背景及概述[1]

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。Turbo菌株是生长最快的大肠杆菌菌株。平板上6.5小时可见克隆,营养液中摇菌4-6小时可提取质粒,缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;Turbo菌株可严格控制laclq的表达,可以克隆毒性基因;fhuA2突变赋予Turbo菌株对噬菌体T1的抗性;lacZΔM15的存在使Turbo可用于蓝、白斑筛选。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作方法[1]

1. Turbo感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)

并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养6.5小时以上。

注意事项[1]

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

质粒转化[1]

将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

42℃热击60秒钟,不要晃动。

冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃过夜培养。

平板划线分离法

复苏培养结束后,4000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。

质粒快速转化步骤

对于氨苄青霉素抗性的质粒,将步骤2的时间缩短到5分钟,完成步骤4后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。

菌株抗性[1]

对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感

主要参考资料

[1] Turbo 感受态细胞说明书

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背景及概述[1]

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。Turbo菌株是生长最快的大肠杆菌菌株。平板上6.5小时可见克隆,营养液中摇菌4-6小时可提取质粒,缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;Turbo菌株可严格控制laclq的表达,可以克隆毒性基因;fhuA2突变赋予Turbo菌株对噬菌体T1的抗性;lacZΔM15的存在使Turbo可用于蓝、白斑筛选。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作方法[1]

1. Turbo感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)

并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养6.5小时以上。

注意事项[1]

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

质粒转化[1]

将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

42℃热击60秒钟,不要晃动。

冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃过夜培养。

平板划线分离法

复苏培养结束后,4000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。

质粒快速转化步骤

对于氨苄青霉素抗性的质粒,将步骤2的时间缩短到5分钟,完成步骤4后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。

菌株抗性[1]

对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感

主要参考资料

[1] Turbo 感受态细胞说明书

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如何使用T7pLysY感受态细胞进行蛋白表达? 1

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。T7pLysY菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株,用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株具有抗T1噬菌体感染等特点,区别于其他菌株。T7pLysY表达感受态细胞经特殊工艺制作,转化效率高于108cfu/μg DNA。

菌株抗性

该菌株对氨苄青霉素,壮观霉素,卡那霉素,链霉素和四环素敏感,对氯霉素有抗性。

储存条件

为了保持菌株的活性,建议将其保存在-70℃,避免反复冻融。

操作说明

1. 取100μl冰上融化的AngYuBio Rosetta(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

应用

T7pLysY感受态细胞可用于毒性或非毒性蛋白的表达。序列,LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性,有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解,菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。

主要参考资料

[1] T7pLysY感受态细胞说明书

显示全部

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。T7pLysY菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株,用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株具有抗T1噬菌体感染等特点,区别于其他菌株。T7pLysY表达感受态细胞经特殊工艺制作,转化效率高于108cfu/μg DNA。

菌株抗性

该菌株对氨苄青霉素,壮观霉素,卡那霉素,链霉素和四环素敏感,对氯霉素有抗性。

储存条件

为了保持菌株的活性,建议将其保存在-70℃,避免反复冻融。

操作说明

1. 取100μl冰上融化的AngYuBio Rosetta(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

应用

T7pLysY感受态细胞可用于毒性或非毒性蛋白的表达。序列,LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性,有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解,菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。

主要参考资料

[1] T7pLysY感受态细胞说明书

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角膜成纤维细胞的功能和特点? 1

角膜成纤维细胞是一种位于胶原纤维附近的细胞,具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的功能。这些细胞形态结构的变化与其功能状态密切相关。在功能活动旺盛时,角膜成纤维细胞的形态较大,呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器。而在功能活动不活跃时,角膜纤维细胞较小,形状呈梭形,胞质较少,细胞器发育不完全。

角膜成纤维细胞在角膜的构造和维持中起着重要作用。它们合成和释放细胞外基质,参与角膜组织的修复和再生。此外,角膜成纤维细胞还具有良好的折光性能,对光线的透过起着重要作用。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 新编实用医学词典

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角膜成纤维细胞是一种位于胶原纤维附近的细胞,具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的功能。这些细胞形态结构的变化与其功能状态密切相关。在功能活动旺盛时,角膜成纤维细胞的形态较大,呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的细胞器。而在功能活动不活跃时,角膜纤维细胞较小,形状呈梭形,胞质较少,细胞器发育不完全。

角膜成纤维细胞在角膜的构造和维持中起着重要作用。它们合成和释放细胞外基质,参与角膜组织的修复和再生。此外,角膜成纤维细胞还具有良好的折光性能,对光线的透过起着重要作用。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 新编实用医学词典

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大肠杆菌的感受态细胞如何进行质粒转化和蛋白表达? 1

背景及概述[1]

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。Shuffle T7-K12菌株是一种适用于T7启动子启动的蛋白表达的大肠杆菌菌株。该菌株中的DsbC酶不仅有利于正确形成蛋白的二硫键,还具有分子伴侣的功能,可以帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。此外,Shuffle T7-K12菌株还具有降低基因背景表达的lac阻遏蛋白,以及抗T1噬菌体感染的特性。经过特殊工艺制作的Shuffle T7-K12感受态细胞的转化效率大于10^6 cfu/μg DNA。

基因型[1]

F'lac, pro, lacIQ / (ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1?(phoA) PvuII phoRahpC*galE(orU) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) trxB rpsL150(StrR) gor (malF)3

菌株抗性[1]

Shuffle T7-K12菌株对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和四环素敏感,对链霉素和壮观霉素具有抗性。

质粒转化步骤[1]

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀;

2. 冰水浴中放置30分钟,不要晃动;

3. 42℃热击60秒钟,不要晃动;

4. 冰水浴中放置2分钟,不要晃动;

5. 加入500μl的室温的SOC或LB培养基;

6. 置于30℃摇床中,150-200rpm,复苏培养60分钟;

7. 取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板30℃培养12-24小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。)

(质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含抗生素的平板上。其它抗性的质粒仍需40-60分钟的复苏培养。)

蛋白表达步骤[1]

1. 挑取单菌落,接种到含有抗生素的LB培养基中;

2. 在30℃,200rpm的条件下震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8);

3. 加入IPTG到终浓度为0.4mM,30℃诱导4小时或16℃诱导过夜;

4. 诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法、Western-Blot法或酶活性分析法)分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达);

5. 当需要大量表达重组蛋白时,可将10ml过夜培养物转接到1L培养基中,当培养到OD600=0.4-0.8时,加入终浓度为0.4mM的IPTG,30℃诱导4小时或16℃诱导过夜(不同蛋白表达的最佳条件有所不同,需在实验中优化)。

主要参考资料

[1] Shuffle T7-K12 感受态细胞说明书

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背景及概述[1]

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。Shuffle T7-K12菌株是一种适用于T7启动子启动的蛋白表达的大肠杆菌菌株。该菌株中的DsbC酶不仅有利于正确形成蛋白的二硫键,还具有分子伴侣的功能,可以帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。此外,Shuffle T7-K12菌株还具有降低基因背景表达的lac阻遏蛋白,以及抗T1噬菌体感染的特性。经过特殊工艺制作的Shuffle T7-K12感受态细胞的转化效率大于10^6 cfu/μg DNA。

基因型[1]

F'lac, pro, lacIQ / (ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1?(phoA) PvuII phoRahpC*galE(orU) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) trxB rpsL150(StrR) gor (malF)3

菌株抗性[1]

Shuffle T7-K12菌株对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和四环素敏感,对链霉素和壮观霉素具有抗性。

质粒转化步骤[1]

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀;

2. 冰水浴中放置30分钟,不要晃动;

3. 42℃热击60秒钟,不要晃动;

4. 冰水浴中放置2分钟,不要晃动;

5. 加入500μl的室温的SOC或LB培养基;

6. 置于30℃摇床中,150-200rpm,复苏培养60分钟;

7. 取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板30℃培养12-24小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。)

(质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含抗生素的平板上。其它抗性的质粒仍需40-60分钟的复苏培养。)

蛋白表达步骤[1]

1. 挑取单菌落,接种到含有抗生素的LB培养基中;

2. 在30℃,200rpm的条件下震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8);

3. 加入IPTG到终浓度为0.4mM,30℃诱导4小时或16℃诱导过夜;

4. 诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法、Western-Blot法或酶活性分析法)分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达);

5. 当需要大量表达重组蛋白时,可将10ml过夜培养物转接到1L培养基中,当培养到OD600=0.4-0.8时,加入终浓度为0.4mM的IPTG,30℃诱导4小时或16℃诱导过夜(不同蛋白表达的最佳条件有所不同,需在实验中优化)。

主要参考资料

[1] Shuffle T7-K12 感受态细胞说明书

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大肠杆菌感受态细胞的特性和操作方法? 1

背景及概述[1]

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。Shuffle T7-B菌株是一种特殊的大肠杆菌菌株,适用于T7启动子启动的蛋白表达。

特性[1]

Shuffle T7-B菌株对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和四环素敏感,对链霉素和壮观霉素有抗性。菌株中的二硫键异构酶DsbC有助于正确形成蛋白的二硫键,并具有分子伴侣的功能,可以帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。此外,Shuffle T7-B菌株的基因组中没有T1噬菌体序列,具有抗T1噬菌体感染的特点。经过特殊工艺制作的Shuffle T7-B感受态细胞的转化效率大于10的6次方cfu/μg DNA。

产品储存[1]

Shuffle T7-B感受态细胞应在-70℃保存,避免反复冻融。

基因型[1]

fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTahpCgalλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecRlacIq)ΔtrxBsulA11R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor ?(mcrC-mrr)114::IS10

操作说明[1]

1. 取100μl冰上融化的Shuffle T7-B感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 将混合物置于42℃水浴中热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,避免晃动以提高转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后在37℃、200rpm条件下复苏60分钟。

4. 以5000rpm离心1分钟,收集菌块后留取约100μl上清液,轻轻吹打重悬菌块并涂布到含有相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱中过夜培养。

主要参考资料

[1] Shuffle T7-B感受态细胞说明书

显示全部

背景及概述[1]

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。Shuffle T7-B菌株是一种特殊的大肠杆菌菌株,适用于T7启动子启动的蛋白表达。

特性[1]

Shuffle T7-B菌株对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和四环素敏感,对链霉素和壮观霉素有抗性。菌株中的二硫键异构酶DsbC有助于正确形成蛋白的二硫键,并具有分子伴侣的功能,可以帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。此外,Shuffle T7-B菌株的基因组中没有T1噬菌体序列,具有抗T1噬菌体感染的特点。经过特殊工艺制作的Shuffle T7-B感受态细胞的转化效率大于10的6次方cfu/μg DNA。

产品储存[1]

Shuffle T7-B感受态细胞应在-70℃保存,避免反复冻融。

基因型[1]

fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTahpCgalλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecRlacIq)ΔtrxBsulA11R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor ?(mcrC-mrr)114::IS10

操作说明[1]

1. 取100μl冰上融化的Shuffle T7-B感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 将混合物置于42℃水浴中热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,避免晃动以提高转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后在37℃、200rpm条件下复苏60分钟。

4. 以5000rpm离心1分钟,收集菌块后留取约100μl上清液,轻轻吹打重悬菌块并涂布到含有相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱中过夜培养。

主要参考资料

[1] Shuffle T7-B感受态细胞说明书

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如何制备OrigamiB(DE3)感受态细胞? 1

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。OrigamiB(DE3)菌株含有突变的还原酶基因,能够增强蛋白的可溶性和正确折叠。该菌株还能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于多种质粒的蛋白表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞的转化效率达到了很高的水平。

操作方法

1. 将OrigamiB(DE3)感受态细胞从-80℃取出,迅速放入冰中,等待菌块融化后加入目的DNA并轻轻混匀,然后在冰上静置25分钟。

2. 将混合物置于42℃水浴中加热45秒,然后迅速放回冰上静置2分钟。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基,混匀后在37℃、200rpm下复苏60分钟。

4. 以5000rpm离心1分钟,留取约100μl上清液,轻轻吹打重悬菌块并涂布到含有相应抗生素的培养基上。

5. 将平板倒置放在37℃培养箱中过夜培养。

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

注意事项

1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞,加入目标DNA的时间不宜超过8分钟,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒时,可以减少最终涂板的菌量。

4. IPTG的浓度可以根据需要选择(0.1-2mM均可)。

5. 为了获得所需的蛋白,最佳的诱导时间、温度和IPTG浓度需要进行优化。

主要参考资料

[1] OrigamiB(DE3)感受态细胞说明书

显示全部

大肠杆菌经过特殊处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。OrigamiB(DE3)菌株含有突变的还原酶基因,能够增强蛋白的可溶性和正确折叠。该菌株还能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于多种质粒的蛋白表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞的转化效率达到了很高的水平。

操作方法

1. 将OrigamiB(DE3)感受态细胞从-80℃取出,迅速放入冰中,等待菌块融化后加入目的DNA并轻轻混匀,然后在冰上静置25分钟。

2. 将混合物置于42℃水浴中加热45秒,然后迅速放回冰上静置2分钟。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基,混匀后在37℃、200rpm下复苏60分钟。

4. 以5000rpm离心1分钟,留取约100μl上清液,轻轻吹打重悬菌块并涂布到含有相应抗生素的培养基上。

5. 将平板倒置放在37℃培养箱中过夜培养。

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

注意事项

1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞,加入目标DNA的时间不宜超过8分钟,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒时,可以减少最终涂板的菌量。

4. IPTG的浓度可以根据需要选择(0.1-2mM均可)。

5. 为了获得所需的蛋白,最佳的诱导时间、温度和IPTG浓度需要进行优化。

主要参考资料

[1] OrigamiB(DE3)感受态细胞说明书

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如何制备感受态细胞并应用于基因工程研究? 1

大肠杆菌在经过特定处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。M15[pREP4]菌株携带有阻抑质粒pREP4,该质粒能够高水平表达lac抑制子,在IPTG诱导前抑制蛋白表达。通过卡那霉素抗性筛选可以保持pREP4质粒在菌株中的稳定性。

制备感受态细胞的操作方法

1. 将保存在-80℃的农杆菌感受态在冰上或室温融化。

2. 每100μl感受态细胞中加入1ug质粒DNA,混匀后依次在冰上静置10分钟、液氮中5分钟、37℃中5分钟、冰浴中5分钟。

3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4. 以5000rpm离心一分钟收菌,留取约100μl上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上,倒置放于28℃培养箱中培养2-3天。

感受态细胞在基因工程研究中的应用

一项研究公开了一种利用大肠杆菌M15感受态细胞表达香蕉多酚氧化酶基因的方法。该方法通过提取香蕉果肉的总RNA并进行反转录,得到香蕉PPO的编码区序列,构建含有PPO的重组质粒pQE?80L-PPO,将该质粒加入到M15感受态细胞中,最终得到香蕉PPO表达菌。该方法具有技术简单、成本低、操作快速、蛋白表达量高等特点,并且制备的重组蛋白易于纯化和具有生物学活性。

另外一项研究涉及一种制备鸡干扰素γ的复性方法。该方法包括对鸡干扰素γ基因进行PCR扩增,将扩增产物亚克隆到带有6His标记的pET32a表达载体上,将该载体转化到M15细胞内,诱导与表达产物后进行裂解获得表达产物,最后纯化并进行复性处理得到成品。该方法使用pET32a和M15细胞使得鸡干扰素γ基因高效表达的产物纯化后的纯度高于传统方法,并且复性后蛋白得率也更高,制成的总蛋白中有效成分增加,提高了治疗效果,降低了成本。

主要参考资料

[1] M15感受态细胞说明书

[2] CN201410620945.3一种香蕉多酚氧化酶基因、重组蛋白及其制备方法

[3] CN201110208387.6一种鸡干扰素γ的制备复性方法

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大肠杆菌在经过特定处理后可以摄取外源DNA,这种状态下的细胞被称为感受态细胞。M15[pREP4]菌株携带有阻抑质粒pREP4,该质粒能够高水平表达lac抑制子,在IPTG诱导前抑制蛋白表达。通过卡那霉素抗性筛选可以保持pREP4质粒在菌株中的稳定性。

制备感受态细胞的操作方法

1. 将保存在-80℃的农杆菌感受态在冰上或室温融化。

2. 每100μl感受态细胞中加入1ug质粒DNA,混匀后依次在冰上静置10分钟、液氮中5分钟、37℃中5分钟、冰浴中5分钟。

3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4. 以5000rpm离心一分钟收菌,留取约100μl上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上,倒置放于28℃培养箱中培养2-3天。

感受态细胞在基因工程研究中的应用

一项研究公开了一种利用大肠杆菌M15感受态细胞表达香蕉多酚氧化酶基因的方法。该方法通过提取香蕉果肉的总RNA并进行反转录,得到香蕉PPO的编码区序列,构建含有PPO的重组质粒pQE?80L-PPO,将该质粒加入到M15感受态细胞中,最终得到香蕉PPO表达菌。该方法具有技术简单、成本低、操作快速、蛋白表达量高等特点,并且制备的重组蛋白易于纯化和具有生物学活性。

另外一项研究涉及一种制备鸡干扰素γ的复性方法。该方法包括对鸡干扰素γ基因进行PCR扩增,将扩增产物亚克隆到带有6His标记的pET32a表达载体上,将该载体转化到M15细胞内,诱导与表达产物后进行裂解获得表达产物,最后纯化并进行复性处理得到成品。该方法使用pET32a和M15细胞使得鸡干扰素γ基因高效表达的产物纯化后的纯度高于传统方法,并且复性后蛋白得率也更高,制成的总蛋白中有效成分增加,提高了治疗效果,降低了成本。

主要参考资料

[1] M15感受态细胞说明书

[2] CN201410620945.3一种香蕉多酚氧化酶基因、重组蛋白及其制备方法

[3] CN201110208387.6一种鸡干扰素γ的制备复性方法

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大肠杆菌JM110感受态细胞的特点及操作方法? 1

概述[1]

大肠杆菌JM110菌株是一种具有硫酸链霉素抗性的感受态细胞,经Ca离子处理后可摄取外源DNA。该菌株缺失了甲基化基因dam和dcm,使得提取得到的质粒DNA对dam和dcm甲基化敏感。此外,JM110菌株还具有lacIqlacZΔM15基因,可以进行蓝白斑筛选。然而,由于转化效率不高,一般不适用于质粒构建,而只适用于质粒转化。经特殊工艺制作的JM110感受态细胞的pUC19质粒转化效率约为107cfu/μg DNA。

如何使用JM110感受态细胞[1]

1. 从-80℃取出JM110感受态细胞,迅速放入冰中。等待菌块融化后,加入目的DNA(质粒或连接产物),轻轻混匀。注意避免使用枪吸打。

2. 将细胞置于42℃水浴中热激45秒,然后迅速放回冰中静置2分钟。晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(如2YT或LB),混匀后在37℃、200 rpm的条件下复苏60分钟。

4. 以5000 rpm离心一分钟,收集菌块后留取约100 μl上清,轻轻吹打重悬菌块,并涂布到含有相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱中过夜培养。

需要注意的事项[1]

1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞,并在8分钟内加入目标DNA。不要在冰中放置时间过长,否则会降低转化效率。

2. 在混入质粒时应轻柔操作,避免过度搅拌。

3. 转化高浓度的质粒时,可以相应减少最终用于涂板的菌量。

基因型

rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15]

主要参考资料

[1] JM110感受态细胞说明书 显示全部

概述[1]

大肠杆菌JM110菌株是一种具有硫酸链霉素抗性的感受态细胞,经Ca离子处理后可摄取外源DNA。该菌株缺失了甲基化基因dam和dcm,使得提取得到的质粒DNA对dam和dcm甲基化敏感。此外,JM110菌株还具有lacIqlacZΔM15基因,可以进行蓝白斑筛选。然而,由于转化效率不高,一般不适用于质粒构建,而只适用于质粒转化。经特殊工艺制作的JM110感受态细胞的pUC19质粒转化效率约为107cfu/μg DNA。

如何使用JM110感受态细胞[1]

1. 从-80℃取出JM110感受态细胞,迅速放入冰中。等待菌块融化后,加入目的DNA(质粒或连接产物),轻轻混匀。注意避免使用枪吸打。

2. 将细胞置于42℃水浴中热激45秒,然后迅速放回冰中静置2分钟。晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(如2YT或LB),混匀后在37℃、200 rpm的条件下复苏60分钟。

4. 以5000 rpm离心一分钟,收集菌块后留取约100 μl上清,轻轻吹打重悬菌块,并涂布到含有相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱中过夜培养。

需要注意的事项[1]

1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞,并在8分钟内加入目标DNA。不要在冰中放置时间过长,否则会降低转化效率。

2. 在混入质粒时应轻柔操作,避免过度搅拌。

3. 转化高浓度的质粒时,可以相应减少最终用于涂板的菌量。

基因型

rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15]

主要参考资料

[1] JM110感受态细胞说明书

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3T3-L1细胞的培养条件及相关研究? 1

背景及概述[1]

3T3-L1/小鼠胚胎成纤维细胞是通过克隆分离得到的3T3(swiss小白鼠)的连续亚株。当3T3-L1细胞从快速分裂到长满且接触抑制时,3T3-L1细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。培养液中,高血清含量可以促进3T3-L1细胞内脂肪的积累。

如何培养3T3-L1细胞[1]

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃

纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的影响[2]

陈文操等人以毒性研究标准细胞小鼠胚胎成纤维细胞为模型,以纳米钴为研究材料,从细胞和分子水平探讨不同浓度、不同粒径纳米钴的细胞毒性。实验结果显示,与对照组比较,10~100 μg/ml 的30 nm 纳米钴染毒组和 50、 100 μg/ml 的 50、 100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞的存活率均较低;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞的存活率均呈下降趋势。表明纳米钴具有细胞毒性。

实验结果还显示,与对照组比较,10~100 μg/ml的 30、 50、 100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞培养液中的 LDH 活力均较高;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞培养液中的LDH 活力均呈上升趋势。说明纳米钴使细胞膜渗透性增加,导致细胞培养液中 LDH 活力升高;而纳米钴的浓度越高,对细胞膜的损伤作用越大,从而导致细胞增殖活性降低,与本实验中细胞活性的检测结果相符。正常情况下,细胞产生的少量 ROS 具有调节细胞生长、基因表达和杀菌等作用,ROS 的生成率和清除率处于平衡状态。当外界环境打破这种平衡,导致机体产生过量的 ROS,过量的 ROS 不断攻击膜磷脂中的不饱和脂肪酸、 蛋白质、 及细胞核内的 DNA,造成细胞不可逆的氧化损伤。实验结果显示,与对照组比较 ,10~100μg/ml 的30、50、100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞内 ROS 的含量均较高;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞内ROS 的含量均呈上升趋势。这可能是导致细胞膜渗透性增高、存活率降低的主要原因。

主要参考资料

[1] 3T3-L1细胞说明书

[2]陈文操,祝嘉敏,翟玉珊,朱金玲,张玉萍,刘东海,李娜.纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的毒性[J].环境与健康杂志,2018,35(01):31-33. 显示全部

背景及概述[1]

3T3-L1/小鼠胚胎成纤维细胞是通过克隆分离得到的3T3(swiss小白鼠)的连续亚株。当3T3-L1细胞从快速分裂到长满且接触抑制时,3T3-L1细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。培养液中,高血清含量可以促进3T3-L1细胞内脂肪的积累。

如何培养3T3-L1细胞[1]

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃

纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的影响[2]

陈文操等人以毒性研究标准细胞小鼠胚胎成纤维细胞为模型,以纳米钴为研究材料,从细胞和分子水平探讨不同浓度、不同粒径纳米钴的细胞毒性。实验结果显示,与对照组比较,10~100 μg/ml 的30 nm 纳米钴染毒组和 50、 100 μg/ml 的 50、 100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞的存活率均较低;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞的存活率均呈下降趋势。表明纳米钴具有细胞毒性。

实验结果还显示,与对照组比较,10~100 μg/ml的 30、 50、 100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞培养液中的 LDH 活力均较高;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞培养液中的LDH 活力均呈上升趋势。说明纳米钴使细胞膜渗透性增加,导致细胞培养液中 LDH 活力升高;而纳米钴的浓度越高,对细胞膜的损伤作用越大,从而导致细胞增殖活性降低,与本实验中细胞活性的检测结果相符。正常情况下,细胞产生的少量 ROS 具有调节细胞生长、基因表达和杀菌等作用,ROS 的生成率和清除率处于平衡状态。当外界环境打破这种平衡,导致机体产生过量的 ROS,过量的 ROS 不断攻击膜磷脂中的不饱和脂肪酸、 蛋白质、 及细胞核内的 DNA,造成细胞不可逆的氧化损伤。实验结果显示,与对照组比较 ,10~100μg/ml 的30、50、100 nm 纳米钴染毒组小鼠胚胎成纤维细胞内 ROS 的含量均较高;且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒小鼠胚胎成纤维细胞内ROS 的含量均呈上升趋势。这可能是导致细胞膜渗透性增高、存活率降低的主要原因。

主要参考资料

[1] 3T3-L1细胞说明书

[2]陈文操,祝嘉敏,翟玉珊,朱金玲,张玉萍,刘东海,李娜.纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的毒性[J].环境与健康杂志,2018,35(01):31-33.

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上皮细胞的特点及作用? 1

上皮细胞是覆盖身体表面和体内空腔器官腔面的细胞,具有明显的极性。它们一面朝向身体表面或腔面,称为游离面,另一面朝向深部的结缔组织,称为基底面。上皮细胞具有强大的角质生成和更新能力,对于保护、吸收、分泌和排泄等功能起着重要作用。当上皮细胞受损时,会影响机体的防御功能。

小鼠子宫颈上皮细胞是从子宫颈组织中分离出来的。子宫颈是子宫的最下部最细部,伸入阴道。它分为上部和下部,下部突入阴道称为子宫颈阴道部,上部称为子宫颈阴道上部。子宫颈的内腔呈梭形,称为子宫颈管,上口与子宫体腔相通,称为子宫颈管内口;下口开口于阴道,称为子宫颈管外口。

宫颈管内含有大量分泌腺,这些腺体在月经周期的不同阶段分泌不同的粘液。在排卵前夕和排卵期,宫颈分泌物较稀薄,有利于精子通过和成活。在其他时期,分泌物常常较粘稠,形成粘液栓以封闭宫颈管外口,起到自洁作用。

体外培养的小鼠子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具有重要意义。这些细胞通过先胶原酶消化、后组织贴块法制备而来,采用上皮细胞专用培养基进行培养筛选,细胞总量约为5×10^5cells/瓶。经过Cytokeratin-19/PCK免疫荧光鉴定,细胞纯度可达90%以上,并且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

 

显示全部

上皮细胞是覆盖身体表面和体内空腔器官腔面的细胞,具有明显的极性。它们一面朝向身体表面或腔面,称为游离面,另一面朝向深部的结缔组织,称为基底面。上皮细胞具有强大的角质生成和更新能力,对于保护、吸收、分泌和排泄等功能起着重要作用。当上皮细胞受损时,会影响机体的防御功能。

小鼠子宫颈上皮细胞是从子宫颈组织中分离出来的。子宫颈是子宫的最下部最细部,伸入阴道。它分为上部和下部,下部突入阴道称为子宫颈阴道部,上部称为子宫颈阴道上部。子宫颈的内腔呈梭形,称为子宫颈管,上口与子宫体腔相通,称为子宫颈管内口;下口开口于阴道,称为子宫颈管外口。

宫颈管内含有大量分泌腺,这些腺体在月经周期的不同阶段分泌不同的粘液。在排卵前夕和排卵期,宫颈分泌物较稀薄,有利于精子通过和成活。在其他时期,分泌物常常较粘稠,形成粘液栓以封闭宫颈管外口,起到自洁作用。

体外培养的小鼠子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具有重要意义。这些细胞通过先胶原酶消化、后组织贴块法制备而来,采用上皮细胞专用培养基进行培养筛选,细胞总量约为5×10^5cells/瓶。经过Cytokeratin-19/PCK免疫荧光鉴定,细胞纯度可达90%以上,并且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

 

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人睾丸支持细胞的分离培养及应用前景? 1

睾丸支持细胞是一种重要的细胞类型,它在生精细胞的发育过程中起着关键的支持和调节作用。除了为精子提供营养和免疫保护外,它还能为其他细胞提供营养支持和免疫保护。因此,睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。

细胞分离方法

为了获得高活率的睾丸支持细胞,我们采用了一种两步酶消化的方法。首先,将睾丸组织置于Hanks液中剥除白膜,然后使用胶原酶Ⅳ进行消化。接下来,使用胰蛋白酶/EDTA进行进一步的消化。最后,通过过滤和离心的方法获得纯净的细胞。

细胞培养和传代

我们使用DMEM培养基来培养睾丸支持细胞,并添加了多种生长因子和营养物质。每天通过显微镜观察细胞的生长情况,并进行记录。当细胞接近80-90%的融和时,进行细胞传代。原代培养细胞在贴壁生长,形态不规则,贴壁牢固。在贴壁细胞上层有贴附不牢固的生精细胞。48小时后,通过吹打的方法去除贴壁不牢的生精细胞,可以观察到支持细胞的胞体增大,呈荷叶状铺在培养皿底部。

参考资料

[1] 人睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

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睾丸支持细胞是一种重要的细胞类型,它在生精细胞的发育过程中起着关键的支持和调节作用。除了为精子提供营养和免疫保护外,它还能为其他细胞提供营养支持和免疫保护。因此,睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。

细胞分离方法

为了获得高活率的睾丸支持细胞,我们采用了一种两步酶消化的方法。首先,将睾丸组织置于Hanks液中剥除白膜,然后使用胶原酶Ⅳ进行消化。接下来,使用胰蛋白酶/EDTA进行进一步的消化。最后,通过过滤和离心的方法获得纯净的细胞。

细胞培养和传代

我们使用DMEM培养基来培养睾丸支持细胞,并添加了多种生长因子和营养物质。每天通过显微镜观察细胞的生长情况,并进行记录。当细胞接近80-90%的融和时,进行细胞传代。原代培养细胞在贴壁生长,形态不规则,贴壁牢固。在贴壁细胞上层有贴附不牢固的生精细胞。48小时后,通过吹打的方法去除贴壁不牢的生精细胞,可以观察到支持细胞的胞体增大,呈荷叶状铺在培养皿底部。

参考资料

[1] 人睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

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人卵巢上皮细胞的特点和功能是什么? 1

人卵巢上皮细胞分离自卵巢组织,卵巢位于子宫两侧,左右各一,完全包于子宫阔韧带内,并在卵巢门外,借系膜固定于子宫阔韧带。卵巢门处有出入卵巢的血管、神经和淋巴管。卵巢是一对扁椭圆形的器官,约重4-8克,幼年时卵巢表面光滑,性成熟后,由于卵泡的生长和排卵后结成瘢痕,表面凹凸不平。卵巢表面覆盖着一层上皮,称为生殖上皮。幼年时期上皮细胞呈立方状或柱状,以后随年龄的增长而变扁平。生殖上皮深面有一薄层致密结缔组织构成的白膜,包围卵巢的实质。卵巢的实质可分为外周的皮质与中央的髓质。皮质较宽,由许多处于不同发育阶段的卵泡和黄体及其间的结缔组织构成。髓质只占一小部分,位于中部,由富含血管的疏松结缔组织构成。婴儿出生时,两个卵巢内约有40万个原始卵泡。

人卵巢上皮细胞的生理功能是什么?

儿童时期,原始卵泡可以发育,但却不能成熟,因而卵巢内大量卵泡退化,成为闭锁卵泡。从青春期到绝经期,女性有生育力的30-40年内,每28天左右卵巢内有一批卵泡发育,但一般只有一个达到成熟并排卵,其余的则在不同的发育阶段退化。绝经期的卵巢内只有少量卵泡存留,且都逐渐退化。人卵巢上皮细胞主要功能:①上皮细胞能分泌激素,刺激卵细胞分化成熟;②细胞能分泌炎症介质,参与炎症反应。人卵巢上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经Cytokeratin-19/PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

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人卵巢上皮细胞分离自卵巢组织,卵巢位于子宫两侧,左右各一,完全包于子宫阔韧带内,并在卵巢门外,借系膜固定于子宫阔韧带。卵巢门处有出入卵巢的血管、神经和淋巴管。卵巢是一对扁椭圆形的器官,约重4-8克,幼年时卵巢表面光滑,性成熟后,由于卵泡的生长和排卵后结成瘢痕,表面凹凸不平。卵巢表面覆盖着一层上皮,称为生殖上皮。幼年时期上皮细胞呈立方状或柱状,以后随年龄的增长而变扁平。生殖上皮深面有一薄层致密结缔组织构成的白膜,包围卵巢的实质。卵巢的实质可分为外周的皮质与中央的髓质。皮质较宽,由许多处于不同发育阶段的卵泡和黄体及其间的结缔组织构成。髓质只占一小部分,位于中部,由富含血管的疏松结缔组织构成。婴儿出生时,两个卵巢内约有40万个原始卵泡。

人卵巢上皮细胞的生理功能是什么?

儿童时期,原始卵泡可以发育,但却不能成熟,因而卵巢内大量卵泡退化,成为闭锁卵泡。从青春期到绝经期,女性有生育力的30-40年内,每28天左右卵巢内有一批卵泡发育,但一般只有一个达到成熟并排卵,其余的则在不同的发育阶段退化。绝经期的卵巢内只有少量卵泡存留,且都逐渐退化。人卵巢上皮细胞主要功能:①上皮细胞能分泌激素,刺激卵细胞分化成熟;②细胞能分泌炎症介质,参与炎症反应。人卵巢上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经Cytokeratin-19/PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 中国女性百科全书·婚姻家庭卷

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平滑肌细胞的生理功能如何? 1

平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞,具有很大的弹性和韧力。它们的胞质通常呈均质性,在染色切片上不显出任何结构。平滑肌细胞外面包裹着一层肌膜,并被少量纤细的胶质纤维、弹力纤维和网状纤维所包围。平滑肌细胞可以根据环境的改变而伸长或缩短。

平滑肌细胞的生理功能是什么?

平滑肌细胞在心血管疾病的发生和发展中起着重要作用。研究人主动脉平滑肌细胞可以探讨心血管疾病相关发病机制,对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具有重要意义。

研究表明,氧化修饰型脂蛋白对培养人主动脉平滑肌细胞的形态和表型有影响。在氧化修饰脂蛋白的作用下,平滑肌细胞的形态发生变化,胞体变大,形状由梭形变为不规则多边形,突起变得细而长。此外,氧化修饰脂蛋白还会影响平滑肌细胞的生长方式和细胞内的结构。

主要参考资料

[1] 新编实用医学词典

[2] 汪浩川, 刘秉文, 傅明德. 天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞形态的影响[D]. , 1995.

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平滑肌细胞是构成平滑肌的纤维状长细胞,具有很大的弹性和韧力。它们的胞质通常呈均质性,在染色切片上不显出任何结构。平滑肌细胞外面包裹着一层肌膜,并被少量纤细的胶质纤维、弹力纤维和网状纤维所包围。平滑肌细胞可以根据环境的改变而伸长或缩短。

平滑肌细胞的生理功能是什么?

平滑肌细胞在心血管疾病的发生和发展中起着重要作用。研究人主动脉平滑肌细胞可以探讨心血管疾病相关发病机制,对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具有重要意义。

研究表明,氧化修饰型脂蛋白对培养人主动脉平滑肌细胞的形态和表型有影响。在氧化修饰脂蛋白的作用下,平滑肌细胞的形态发生变化,胞体变大,形状由梭形变为不规则多边形,突起变得细而长。此外,氧化修饰脂蛋白还会影响平滑肌细胞的生长方式和细胞内的结构。

主要参考资料

[1] 新编实用医学词典

[2] 汪浩川, 刘秉文, 傅明德. 天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞形态的影响[D]. , 1995.

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细胞及分子 + 关注 4k条问题 . 709人已关注
细胞:细胞是生物体基本的结构和功能单位。分子:分子是由组成的原子按照一定的键合顺序和空间排列而结合在一起的整体,这种键合顺序和空间排列关系称为分子结构。展开
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