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橘子是只喵~

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心肌细胞作为原代细胞是不太好转染么? 原代细胞不好转，可以试试专门转原代细胞的转染试剂，英格恩有专门转原代细胞的试剂。https://www.engreen.com.cn/product/rna%e8%bd%ac%e6%9f%93%e8%af%95%e5%89%82/ 查看更多

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THP1细胞转染效率？转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DNA质量，正确保存，确保质粒DNA不被降解。 4.转染试剂选择不当。建议选用效率高，毒性低的转染试剂，比如engreen的Entranster试剂。 5.细胞密度不是最优，优化细胞密度。 6.混和加入细胞中不含血清。在转染过程中使用含有血清的培养基，细胞状态良好有利于转染效率的提高。 7 .转染体系中含有抑制物转染体系中不应包含EDTA、柠檬酸、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖 8.检验转染效率及表达的方法有问题使用报告基因来检测转染效率，报告基因使你确定目标基因的表达 9.启动子及增强子不被包装细胞识别。确认你构建质粒上的启动子增强子与靶细胞相容。 10.转染试剂保存不正确，转染试剂保存在4℃。查看更多

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A549 转染？ 可以试试英格恩的转染试剂，用法和lipo2000一样，转染效率更高，最重要的是价格很便宜。https://www.engreen.com.cn/查看更多

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请教：目前那种试剂最适于siRNA转染人胃癌细胞? 试试英格恩的转染试剂，英格恩做转染试剂15年了，还是很专业的。他们家有一款试剂和lipo2000的使用方法是一样的，转染效率要更高一些，毒性也更低。最重要的是价格便宜。查看更多

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细胞污染很严重，但不知是什么污染？ 细胞生长异常的话，大概率是支原体污染了，支原体会通过空气传播，所以记得检查一下培养液和培养箱是不是被污染查看更多

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WB的条带总是很淡，如何解决? 条带弱的原因可能有以下几个方面： ①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，如英格恩的Enlight-plus。 ②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。 ③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更换效价更高的抗体，或提高抗体稀释度，延长抗体孵育时间；若怀疑抗体失活，可用斑点杂交实验确定抗体活性。 ④. 曝光时间太短。可适当延长曝光时间。查看更多

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细胞污染求分析？之前看到过一篇文章，分享给你，文章转自：英格恩生物技术博客预防污染细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前最好洗手，仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。实验必备白大褂，而且一定要是长袖，袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。最好是戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那再喷酒精。细胞实验前，超净台/实验间紫外照射30min，细胞培养室有24h的空气消毒装置更好了。操作前70％酒精擦超净台消毒，酒精擦手，擦培养瓶，擦培养基瓶以及各种瓶子的口，总之，所有进超净台的物品最好都用酒精擦拭一遍。拿培养瓶和培养液时候尽量托下面拿，切忌不要拿瓶颈部位。有一点要注意的是，超净台里面的东西一定要尽量少放，东西太多活影响超净台内空气流通及空气除菌。实验过程中尽量避免打闹说笑。每天观察细胞状态，一旦发现细胞不对劲（比如生长缓慢）立即进行处理。一些刚接触细胞的朋友可能有时拿不准情况，也迫切的希望得到帮助。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？细胞污染鉴别方法如果是细菌污染，培养基应该很快就浑浊了。如果是真菌感染，特别是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，特别是成团的小黑点，要特别注意。如果无法确定，就换高倍镜，如果是死细胞，高倍镜下就可以分辨，而真菌高倍镜下仍然是小黑点。有些（比如支原体）污染，镜检是看不到的，但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常，那么请扔掉，同时由于支原体空气传播，请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类，尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着。霉菌污染多来自空气，所以做实验时说话聊天，或瓶口敞开时间太长，还有培养箱开关频繁是主要原因，应多找自身原因。培养箱水盘最好一个星期用酒精或0.2％的新吉灭擦一次，如果有紫外线照射就更好了一旦细胞污染了，怎么解决呢？一旦细胞污染了，怎么解决呢？当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。如果不幸没有，不得不把细胞救活了。对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌），可以用普通双抗（链霉素和青霉素）处理；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，处理的代价更大更麻烦，建议直接扔掉算了。以免造成实验室其他污染就得不偿失了。对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！ 1）将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。 2）继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。 3）继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。 4）重复步骤3再洗。 5）重复步骤3再洗。 6）加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 7）加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 8）再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。 9）加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。 10） 24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗. 11） 24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。很多人有个误区，认为进口血清都是贵，其实不然。GIBCO的 NCS，马血清，都比国产的便宜的多，质量好的多。只有FBS才很贵，很多时候国产血清往往是污染源，所以用国产血清要严格监控状态。以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。查看更多

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关于细胞污染的疑问?？之前看到过一篇文章，希望可以帮到你文章转自：英格恩生物技术博客细胞污染的心得体会细胞污染鉴别方法如果是细菌污染，应该很快培基就浑浊了。如果是真菌感染，特别是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，特别是成团的小黑点，要特别注意。如果无法确定，就换高倍镜，如果是死细胞，高倍镜下就可以分辨，而真菌高倍镜下仍然是小黑点。有些（比如支原体）污染，镜检是看不到的，但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常，那么请扔掉，同时由于支原体空气传播，请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类，尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着。霉菌污染多来自空气，所以做实验时说话聊天，或瓶口敞开时间太长，还有培养箱开关频繁是主要原因，应多找自身原因。培养箱水盘最好一个星期用酒精或0.2％的新吉灭擦一次，如果有紫外线照射就更好了一旦细胞污染了，怎么解决呢？一旦细胞污染了，怎么解决呢？当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。如果不幸没有，不得不把细胞救活了。对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌），可以用普通双抗（链霉素和青霉素）处理；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，处理的代价更大更麻烦，建议直接扔掉算了。以免造成实验室其他污染就得不偿失了。对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！ 1）将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。 2）继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。 3）继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。 4）重复步骤3再洗。 5）重复步骤3再洗。 6）加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 7）加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 8）再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。 9）加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。 10） 24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗. 11） 24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。很多人有个误区，认为进口血清都是贵，其实不然。GIBCO的 NCS，马血清，都比国产的便宜的多，质量好的多。只有FBS才很贵，很多时候国产血清往往是污染源，所以用国产血清要严格监控状态。以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候查看更多

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细胞污染找原因？培养基浑浊的话，大概率是细菌污染，推荐一篇文章给你文章转自：英格恩生物技术博客细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前最好洗手，仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。实验必备白大褂，而且一定要是长袖，袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。最好是戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那再喷酒精。细胞实验前，超净台/实验间紫外照射30min，细胞培养室有24h的空气消毒装置更好了。操作前70％酒精擦超净台消毒，酒精擦手，擦培养瓶，擦培养基瓶以及各种瓶子的口，总之，所有进超净台的物品最好都用酒精擦拭一遍。拿培养瓶和培养液时候尽量托下面拿，切忌不要拿瓶颈部位。有一点要注意的是，超净台里面的东西一定要尽量少放，东西太多活影响超净台内空气流通及空气除菌。实验过程中尽量避免打闹说笑。每天观察细胞状态，一旦发现细胞不对劲（比如生长缓慢）立即进行处理。一些刚接触细胞的朋友可能有时拿不准情况，也迫切的希望得到帮助。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？细胞污染鉴别方法如果是细菌污染，应该很快培基就浑浊了。如果是真菌感染，特别是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，特别是成团的小黑点，要特别注意。如果无法确定，就换高倍镜，如果是死细胞，高倍镜下就可以分辨，而真菌高倍镜下仍然是小黑点。有些（比如支原体）污染，镜检是看不到的，但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常，那么请扔掉，同时由于支原体空气传播，请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类，尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着。霉菌污染多来自空气，所以做实验时说话聊天，或瓶口敞开时间太长，还有培养箱开关频繁是主要原因，应多找自身原因。培养箱水盘最好一个星期用酒精或0.2％的新吉灭擦一次，如果有紫外线照射就更好了一旦细胞污染了，怎么解决呢？一旦细胞污染了，怎么解决呢？当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。如果不幸没有，不得不把细胞救活了。对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌），可以用普通双抗（链霉素和青霉素）处理；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，处理的代价更大更麻烦，建议直接扔掉算了。以免造成实验室其他污染就得不偿失了。对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！ 1）将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。 2）继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。 3）继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。 4）重复步骤3再洗。 5）重复步骤3再洗。 6）加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 7）加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 8）再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。 9）加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。 10） 24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗. 11） 24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。很多人有个误区，认为进口血清都是贵，其实不然。GIBCO的 NCS，马血清，都比国产的便宜的多，质量好的多。只有FBS才很贵，很多时候国产血清往往是污染源，所以用国产血清要严格监控状态。以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。查看更多

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黑胶虫？黑焦虫的特点： 1、与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则多。 2、对抗生素无效。 3、可能通过培养箱空气进行污染。 4、单用培养液及血清培养没发现问题。 5、换掖冲洗后也无效。 “黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题关于是什么的问题的讨论： 1、玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西(曾经有文献报道过)。 2、据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好像也没个统一的说法。 3、据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。 4、有人说是纳米级的细菌。其他的特点： 1、形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米。 2、在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动 (不规则的原地小距离抖动)。 3、细胞内好像也有存在。 4、但并不引起培养液混浊。 5、时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡。大家的处理： 1、换好一点的血清。 2、如果是贴壁细胞的话，可用无菌的 PBS 洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。 3、换用进口的一次性塑料培养瓶。 4、建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏。 5、在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。 6、有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。黑胶虫很难根除，最好的办法就是舍弃并进行全面的熏蒸杀菌查看更多

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细胞中出现黑色条状做波浪运动的东西是什么？还伴随着黑胶虫？换好一点的血清；如果是贴壁细胞，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解，悬浮细胞的话，就不太好处理.......可以加一点滋养细胞，加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效。再就是注意平时的操作，以及保持实验环境的干净整洁；可以停下来复苏和养细胞的工作，对实验室、实验用品做彻底的消毒；如果有多余的细胞，污染的细胞建议扔掉。推荐一个网站，https://www.engreen.cn/，上面有很多实验干货，可以看看查看更多

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跑蛋白，跑胶，江湖救急，抱拳？ https://www.engreen.cn/，英格恩生物技术博客，这个网站上有很多实验干货，可以看看查看更多

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求助生物实验所需试剂、耗材的品牌？ 购买转染试剂的话，可以看看英格恩的试剂，价格便宜，转染效率高，英格恩专注转染15年，很专业查看更多

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动植物

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哺乳动物细胞转染，蛋白不表达？ 转染试剂有没有问题？推荐一个之前实验室用过的动物体内转染试剂，英格恩的，转染效率还挺高的查看更多

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有关Tris-EDTA？ 10×是10倍浓度，用的时候需要稀释，1×就是正常浓度查看更多

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western blot条带异常，怎么办? 凝胶存在气泡或是杂质、电流不稳定、凝胶冷切不均匀。制胶器具和电泳槽保持干净，换新的电解液，保证材料无污染，制胶过程中清除气泡。如电泳槽老化建议换新。尽量选择中间孔加入样品，避免两端上样。查看更多

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【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳？ 看不到图片，不好回答~不过可以推荐你一个网站，https://www.engreen.cn/，上面有很多实验干货，可以去看看查看更多

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siRNA转染试剂哪里的好? 用过lipo2000和英格恩的，最直观的感受就是，两个使用方法差不多，英格恩转染效率要高一些。最重要的是便宜啊！查看更多

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