通用基因组DNA提取试剂盒的应用范围是什么?

背景^[1-3]

通用基因组DNA提取试剂盒采用特意性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，用于提取血液、唾液、口腔拭子、动物组织、粪便中的基因组DNA。它能够去除杂质蛋白及细胞中的其他化合物，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用该试剂盒提取的基因组DNA适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。

基因组DNA琼脂糖电泳图

适合处理以下几类来源的非液体类样品：

A.人和动物组织：1-25 mg动物组织或穿刺组织、福尔马林浸泡的组织、石蜡包埋切片、鼠尾、毛囊、指甲等

B.干燥的人和动物体液：滤纸、纸巾或样品采集卡上的干血点和唾液、香烟过滤嘴等

C.可离心收集的1×103~1×107动物细胞

D.可离心收集的1×107~2×109细菌

E.可离心收集的1×105~5×107酵母或真菌细胞

F.10-100 mg真菌菌块或菌丝

该方法具备以下特点：

处理人和动物组织无需研磨；

处理人和动物组织分散细胞和释放DNA为同一个步骤，无需使用两个温度分两个步骤操作；

处理离心收集的细菌和细胞在悬浮样品后直接进行裂解，无需再添加裂解试剂；

处理石蜡包埋切片无需脱蜡；

应用^[4][5]

用于鹿血的PCR-RFLP鉴定方法研究

1.建立鹿血PCR-RFLP（聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性）种间及不同基原鉴定方法。

2.寻找鹿血与非鹿血鉴别的限制性内切酶,并确定鹿血中掺入其他常见动物血的检出限度。

3.寻找鉴别梅花鹿与马鹿血的限制性内切酶,并确定梅花鹿血中加入马鹿血的检出限度。

方法：

1.用三种不同的试剂盒提取样品血液基因组DNA,测定浓度及纯度,选择适合提取本研究中动物血液基因组DNA的试剂盒。

2.用动物DNA条形码通用引物COI和cytb（细胞色素b）,扩增样品血液基因组DNA,以扩增效率高、扩增结果稳定为指标选取引物,并优化扩增条件。

3.试剂盒法纯化PCR产物,T-A克隆（蓝白斑筛选及琼脂糖凝胶电泳确定阳性克隆）,菌液进行基因序列测定。

4.采用软件NEB Cutter2.0（http://nc2.neb.com/NEBcutter2/）对各样品血液的测序结果进行比对分析,确定试验中所购样品均为正品。根据各样品血液的cytb基因序列的差异,设计、选取可以区分鹿与非鹿、梅花鹿与马鹿的DNA限制性内切酶,并经实验验证。

5.将提取的各样品血液基因组DNA稀释至相似浓度,且A260在0.11.0范围内。在梅花鹿血基因组DNA中分别加入不同体积分数的非鹿类动物血基因组DNA,在梅花鹿血基因组DNA中加入不同体积分数的马鹿血基因组DNA,经PCR扩增后,产物用限制性内切酶进行切割,确定检出限度。

参考文献

[1]Molecular tracing of confiscated pangolin scales for conservation and illegal trade monitoring in Southeast Asia[J].Huarong Zhang,Mark P.Miller,Feng Yang,Hon Ki Chan,Philippe Gaubert,Gary Ades,Gunter A.Fischer.Global Ecology and Conservation.2015

[2]DNA Barcode-Based PCR-RFLP and Diagnostic PCR for Authentication of Jinqian Baihua She（Bungarus Parvus）[J].Xiaolei Li,Weiping Zeng,Jing Liao,Zhenbiao Liang,Shuhua Huang,Zhi Chao,Robert Henry.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine.2015

[3]Identification of Lonicera japonica and its Related Species Using the DNA Barcoding Method[J].Zhiying Sun,Ting Gao,Hui Yao,Linchun Shi,Yingjie Zhu,Shilin Chen.Planta Med.2011(03)

[4]DNA Barcoding of Panax Species[J].Yunjuan Zuo,Zhongjian Chen,Katsuhiko Kondo,Tsuneo Funamoto,Jun Wen,Shiliang Zhou.Planta Med.2011(02)

[5]王凤霞.鹿血的PCR-RFLP鉴定方法研究[D].承德医学院,2018.