HK-2人肾小管上皮细胞的永生化方法及应用？

HK-2人肾小管上皮细胞是通过导入HPV-16E6/E7基因使其获得永生化的。具体方法是将含有HPV-16E6/E7基因的重组逆转录病毒载体转染到外源包装细胞Psi-2中，然后用Psi-2产生的病毒感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。为了确保HK-2细胞来源于单克隆，未使用G418筛选转导克隆，而是通过Southern和FISH分析进行验证。PCR检测结果证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

HK-2人肾小管上皮细胞是一种重要的研究模型。

如何培养HK-2人肾小管上皮细胞

1. 当细胞融汇至80%左右时，应在2.37度培养箱预温1-2小时后进行处理。如果细胞未达到传代密度，应预留一部分培养基继续培养。

2. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一个无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

3. 用PBS轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞，直到细胞脱落，加入终止液终止消化。

4. 离心1000rpm，5分钟，重悬细胞。将细胞转移到新的细胞培养瓶中，在37℃、5%CO2的条件下继续培养。

HK-2人肾小管上皮细胞的应用

铅致HK-2细胞凋亡、转分化研究及铅结合蛋白分离鉴定研究

以HK-2人肾小管上皮细胞为研究对象，观察醋酸铅对HK-2细胞凋亡和转分化的影响，研究其剂量反应关系以及对相关信号通路分子的影响和碘化钾的干预作用。

在此基础上，运用功能蛋白质组学方法，分离鉴定与铅有高亲和性的结合蛋白，探讨铅致HK-2细胞凋亡和转分化的内在原因。以往的研究表明，铅可以与蛋白质形成高亲和性的铅结合蛋白（PbBPs），而PbBPs的形成与铅在肾脏引起的一种特征性病理改变-肾小管上皮细胞质和细胞核内形成包涵体有关。

研究提示，铅在细胞内以铅结合蛋白的形式穿过细胞膜，沉积、迁移并发挥其毒作用。铅结合蛋白是指与铅有高亲和结合能力、与细胞对铅的适应性和反应性相关的细胞内铅受体和靶点蛋白。

通过分离鉴定PbBPs，可以进一步了解铅致细胞凋亡和转分化的真正原因，明确细胞内的分子靶点。此外，还有可能发现新的高亲和性的PbBPs，为开发铅蛋白质络合剂药物提供证据。

研究方法包括使用铅亲和柱进行金属螯合亲和层析、一维SDS-PAGE电泳分离、ESI-MS/MS液-质联用串联质谱鉴定混合蛋白质样品，并通过免疫印迹法验证。通过生物信息学方法分析铅结合蛋白在铅致HK-2细胞毒效应中的可能作用。

参考文献

[1] PINK1 Protects against Oxidative Stress by Phosphorylating Mitochondrial Chaperone TRAP1[J]. Julia W Pridgeon, James A Olzmann, Lih-Shen Chin, Lian Li. PLOS Biology. 2007(7)

[2] Characterization of the sterol-binding domain of oxysterol-binding protein（OSBP）-related protein 4 reveals a novel role in vimentin organization[J]. Jessica P. Wyles, Ryan J. Perry, Neale D. Ridgway. Experimental Cell Research. 2007(7)

[3] Changes in expression of fibrotic markers and histopathological alterations in kidneys of mice chronically exposed to low and high Cd doses[J]. Sandy Thijssen, Ivo Lambrichts, John Maringwa, Emmy Van Kerkhove. Toxicology. 2007(2)

[4] Changes in Systolic Blood Pressure Associated With Lead in Blood and Bone[J]. Barbara S. Glenn, Karen Bandeen-Roche, Byung-Kook Lee, Virginia M. Weaver, Andrew C. Todd, Brian S. Schwartz. Epidemiology. 2006(5)

[5] 周桂凤. 铅致人肾小管上皮细胞HK-2凋亡、转分化研究以及铅结合蛋白分离鉴定[D]. 中南大学, 2008.