内源性干扰因素对ELISA的影响及消除方法

内源性干扰因素对ELISA的影响

内源性干扰物质（如类风湿因子、补体、嗜异性抗体等）会与ELISA系统中的抗体或抗原非特异性结合，导致假阳性或假阴性结果。例如：

1、类风湿因子（RF）：可同时结合固相抗体和酶标二抗的Fc段，形成假阳性。

2、补体：C1q桥连固相抗体与酶标二抗，引发假阳性。

3、嗜异性抗体：天然抗体可能桥接一抗和二抗，干扰检测。

消除内源性干扰的方法

1、阻断剂处理

使用免疫阻断剂（如GU Blocker）封闭干扰物质。

在样本稀释液中加入过量动物Ig（s）阻断嗜异性抗体。

2、样本预处理

热变性处理：63℃加热10分钟灭活RF或补体。

EDTA稀释：抑制补体活性。

F(ab)片段抗体：替代完整IgG，避免Fc段结合。

3、其他方法

使用亲和色谱法去除干扰物。

更换抗体种属或改造检测抗体。

操作建议

1、识别干扰：通过梯度稀释试验或不同检测系统比对结果。

2、规范操作：避免加样误差、洗板不充分等引入干扰。

通过上述方法可有效减少内源性干扰，提高ELISA检测的准确性。