3. PCR 实验没有扩增出条带（No Band），该如何排查？

PCR 失败是常态，排查时建议由易到难：引物问题： 检查引物设计（Tm 值是否匹配、是否存在二聚体）、稀释浓度是否正确。模板问题： 模板浓度过高（产生抑制）或过低、纯度不够（残留酚/氯仿或盐离子）。退火温度（Ta）： 退火温度过高导致引物无法结合，可尝试做梯度 PCR（Gradient PCR）。延伸时间： 根据目的片段大小和酶的扩增效率（如 Taq 酶通常 1 kb/min，高保真酶更长），确认延伸时间是否足够。