AEC显色试剂盒是一种用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色的试剂盒，适用于EliVision、MaxVision和SP法等方法。

AEC是一种过氧化物酶的生色底物，它在过氧化氢的存在下会发生颜色变化和积累，形成红色不溶性产物。这种红色不溶性产物在有机溶剂中可以溶解，常用于HRP结合物的底物，在Western Blot和免疫组织化学中广泛应用。

试剂盒的组份包括20倍醋酸盐浓缩缓冲液（含H2O2，pH5.6）和20倍AEC浓缩液。

如何使用AEC显色试剂盒？

1）在过氧化物酶孵育完成后，用TBS或PBS充分洗涤标本，一般每次洗涤5分钟，共洗涤4次。

2）向1ml蒸馏水中滴加1滴20倍AEC浓缩液和1滴20倍醋酸盐浓缩缓冲液，混匀后加到标本上。一般避光显色10-30分钟，如果没有背景出现，可以继续显色，直至满意为止。

3）用蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时可以使用甲基蓝或不含酒精的苏木素进行复染。

4）使用水溶性封片剂封片，并在显微镜下观察。

注意事项：

1.由于AEC生成的颜色产物为脂溶性，因此在IHC显色后不适合使用梯度酒精脱水、二甲苯透明和中性树胶封片，必须使用水性封片剂封片。

2.根据实验情况，可以自行优化实验条件，调整显色时间，以获得最佳的显色效果。

3.AEC具有一定的毒性，在操作时请采取必要的防护措施。

AEC显色试剂盒的应用

用于维甲酸对丙烯醛作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响研究

该研究旨在建立原代大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）的分离、纯化和原代培养方法，探索丙烯醛对AECⅡ细胞周期的影响，并观察维生素A酸（RA）是否能够拮抗丙烯醛对AECⅡ的损伤作用。

研究方法包括使用4.2u/ml的弹性蛋白酶溶液通过气管插管注入肺泡内，消化分离AECⅡ。然后将细胞悬液接种到包被有大鼠IgG的塑料平皿中，以纯化细胞。使用倒置显微镜观察细胞的生长状况，并使用电镜、碱性磷酸酶显色法、改良巴氏染色法、单宁酸染色法和免疫组化染色法来鉴定AECⅡ并计算细胞纯度。

使用MTT法检测丙烯醛对AECⅡ活力的影响，使用流式细胞仪检测在丙烯醛和RA作用下AECⅡ细胞周期的变化。

通过反转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）技术检测P21和P53在mRNA水平的变化。研究结果显示，分离所得的AECⅡ纯度达到90%以上，倒置显微镜下观察到细胞呈岛屿状生长，胞浆内可见大量黑色颗粒。

电镜下观察到细胞内有大量板层小体，其中一些呈空泡状结构，细胞膜上有绒毛装结构。BCIP/NBT染色显示胞浆内有蓝色颗粒。改良巴氏染色法和单宁酸染色法显示胞浆内有黑色颗粒。

抗大鼠肺泡表面活性物质A（SP-A）的免疫组化染色呈阳性反应。在丙烯醛作用下，AECⅡ细胞的生长明显受到抑制，流式细胞仪检测结果显示，细胞周期被阻滞在G1期，RA对丙烯醛的拮抗作用不明显。RT-qPCR检测结果显示，与对照组相比，丙烯醛作用后P21mRNA表达在其他各组均明显下调，各干预组之间P21mRNA表达没有明显差异；P53基因表达在对照组和各干预组之间没有明显差异。

参考文献

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