胶回收（Gel Extraction）时，为什么回收率总是特别低？

胶回收往往是克隆效率的瓶颈，以下几个细节决定了回收率：切胶过多： 尽量只切带有条带的窄胶，过多的琼脂糖会超过纯化柱的结合负荷，并导致溶胶不彻底。溶胶温度与时间： 溶胶液（通常含大吸附盐）在 50–60°C 水浴时必须确保胶块完全融化。洗脱液 pH 值： 硅胶膜在 pH 7.0 - 8.5 的弱碱性条件下洗脱效率最高。如果使用灭菌双蒸水（经常呈弱酸性）洗脱，回收率会暴跌。提效建议： 洗脱时，将洗脱缓冲液（Buffer EB）提前在 55°C 水浴加温，加入柱子后静置 2-5 分钟再离心，回收效率会大幅提升。