重组TEV蛋白酶的特点及应用？

蛋白酶是一类催化蛋白质水解的酶，具有广泛的应用领域。重组TEV蛋白酶是经过基因工程改造的一种高纯度酶，其生物学功能是将多蛋白体酶解为单一蛋白。与其他酶相比，TEV酶对特定的氨基酸序列识别更加严格。作为生物工程下游技术中的重要工具酶，TEV酶的酶切特异性非常高。该酶的来源是经过高度纯化的重组大肠杆菌，具有良好的稳定性和特异性。最适酶切温度为30℃，但在4℃下仍然具有酶活性。酶切后，可以通过谷胱甘肽亲和柱层析去除酶切产物。酶切的条件可以根据具体蛋白进行优化。

纯度分析

经过SDS-PAGE电泳分析，重组TEV蛋白酶的纯度大于95%。

活性单位定义

一个酶活性单位定义为在4℃，pH8.0条件下，12~16小时在酶切反应缓冲液中将5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。

推荐酶切条件

融合蛋白：0.1mg

重组TEV蛋白酶：20U

10x酶切缓冲液：10μl

温度（℃）：4

总体积：100μl

时间（小时）：12~16

10x酶切缓冲液：500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5 mM EDTA, 1% Tween-20 (v/v), 10 mM DTT

保存条件

重组TEV蛋白酶可以在-20℃保存，活性保持２年以上。

主要参考资料

[1] 胡学智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生产和应用的进展 (Doctoral dissertation).