胞系鉴定是确保实验数据准确性的关键步骤,主要通过以下方法实现:
1. STR鉴定(短串联重复序列分析)
目前被ICLAC、ATCC等权威机构视为金标准。通过检测细胞基因组中特定STR位点的重复次数,建立独特的遗传指纹图谱,可有效识别细胞系身份及交叉污染。例如,Promega GenePrint® 10系统可同时分析7个STR位点和1个性别决定位点。
2.其他常用方法
形态学观察:通过光学/电子显微镜观察细胞形态特征,但需结合其他方法确认。
免疫表型分析:利用流式细胞术或免疫荧光检测细胞特异性标志物(如CD分子)。
基因分析:通过PCR、RT-PCR或DNA测序检测细胞特异性基因表达或遗传标记。
同工酶检查:检测不同细胞系中同工酶的表达差异。
染色体核型分析:观察染色体数目和结构异常,辅助鉴定物种来源和恶性转化。
鉴定时机建议
建立或获得新细胞系时;
细胞冻存前或连续培养2个月后;
开始关键实验或发表文章前。