混悬液试剂法和固体复合酶法哪个好?

国家食品药品监督管理局于2011年8月31日颁布执行的《果糖二磷酸钠药品标准》含量测定中规定使用的测定方法。 固体复合酶试剂法 （1）试剂 空白酶溶液：取固体复合酶（酶活力测定方法见注1，活力应符合规定）60mg，用盐酸三乙醇胺缓冲液（取三乙醇胺17.5g，加水约200ml，加盐酸4ml，混匀，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/l氢氧化钠溶液或2mol/l盐酸溶液调节ph值至7.6，加水稀释至250ml。滤过后4℃保存，一周内使用。）溶解并稀释至20ml。垂熔漏斗过滤，4℃保存，两天内使用。 测定酶溶液：取空白酶溶液10ml，加还原型辅酶ⅰ（nadh）3.0mg，溶解后4℃保存，两天内使用。 （2）供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml约含0.4mg（按无水物计)的溶液。 （3）测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml，测定酶溶液1ml，置石英吸收池中；另精密量取上述缓冲液2ml，空白酶溶液1ml置另一吸收池，作为空白，摇匀，静置15分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅳa），在340nm波长处测定吸光度a1。各池再分别精密加入供试品溶液0.1ml，摇匀，于20℃～25℃放置10分钟，在340nm的波长处测定，直至吸光度基本不变，读取吸光度a2。求出吸光度差值δa（δa= a1－1.0333a2），按下式计算，即得。 式中 3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积（ml）； 6.29 103为还原型辅酶ⅰ(nadh)的摩尔吸收系数； 2为果糖二磷酸钠反应系数； 406.06为c6h11na3o12p2的分子量； 0.1为供试品溶液加入体积(ml)； w为供试品的取样量(mg) （以无水物计）。 混悬液酶试剂法 (1)试剂 盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/l，ph7.6）：取盐酸三乙醇胺18.6g，加水200ml溶解，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/l氢氧化钠溶液(约18ml)调节ph值至7.6，加水稀释至250ml。或取三乙醇胺17.5g，加水约200ml，加盐酸4ml，混匀，加乙二胺四乙酸二钠3.7g，溶解后，用2mol/l氢氧化钠溶液或2mol/l盐酸溶液调节ph值至7.6，加水稀释至250ml。滤过后4℃保存,一周内使用。 还原型辅酶ⅰ（nadh）溶液：取nadh二钠盐7mg，溶于2ml盐酸三乙醇胺缓冲液（ph7.6）中。4℃保存。 3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液（gdh/tim）：取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液（gdh）与磷酸丙糖异构酶混悬液（tim）适量，用3.2mol/l硫酸铵溶液（ph6）稀释成每1ml约含gdh310u和tim1550u的溶液。4℃保存。 醛缩酶混悬液（ald）：取醛缩酶混悬液（ald）适量，用3.2mol/l硫酸铵溶液（ph6）稀释成每1ml中约含ald90u的溶液。 （2）供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml约含0.2mg（以无水物计）的溶液。 （3）测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液（ph7.6）3.0ml，供试品溶液0.1ml，还原型辅酶ⅰ溶液0.05ml，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml，置1cm吸收池中，摇匀，放置15分钟；另取盐酸三乙醇胺缓冲液（ph7.6）3.15ml，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml，置另一吸收池中，摇匀，作为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅳ a），在340nm波长处测定供试品溶液的吸光度a1，再在每池中加醛缩酶混悬液0.02ml，摇匀，于20℃～25℃放置约5分钟，在340nm波长处测定供试品池的吸光度，直至吸光度基本不变读取吸光度a2。求出吸光度差值δa（δa=0.9937a1-a2），按下式计算，即得。 果糖二磷酸钠（%）= 式中 0.9937为3.17/3.19； 3.19为样品池中溶液的最终体积（ml）； 6.29 103为还原型辅酶ⅰ(nadh)的摩尔吸收系数； 2为果糖二磷酸钠反应系数； 406.06为c6h11na3o12p2的分子量； 0.1为供试品溶液加入体积(ml)； w为供试品的取样量(mg)（以无水物计）。