感受态细胞（Competent Cells）转化效率低，常见原因有哪些？

转化（Transformation）是将外源 DNA 导入细菌的过程：感受态细胞失活： 感受态细胞对温度极度敏感。严禁在冰上反复冻融，从 -80°C 冰箱取出后必须立即置于冰上融化，且操作时动作要轻（细胞壁很脆弱）。热激时间/温度不准： 经典的 42°C 热激 45-90 秒必须严格控时。温度过高或时间过长会导致细菌大量死亡。连接产物加入量过多： 连接缓冲液中的盐离子会抑制转化，连接产物的体积通常不应超过感受态细胞体积的 10%。