我认识一位是从动物乳汁中提取一种肽，好像确定了多肽的大致分子量范围，然后透析获得肽样品，最后通过HPLC分理处肽样，不过这时还不知道多肽的序列，需要做多肽二级质谱测序，确定多肽最有可能的多肽序列，然后固相合成多肽序列。前期准备工作的话，我就不了解了。

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< >多肽小知识：

< > ◎　多肽的保存

< > < > 　　多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。

< > < > 　　对于含cys, met ortrp的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化， 在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含gln或asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。

< > < > ◎　多肽的溶解性

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　　大多数肽的首选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽， 需要dmf、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。

　　残基ala, cys , ile, leu, met, phe和val将全增加多肽的溶解难度。

　　您需要特殊的多肽或任何技术帮助，请随时与我们联系。 我们包你完全满意，对于我们不能适当合成的顺序，我们不收费。

◎　多肽的保存和操作

　　包装 1mg或更少的多肽按净重包装，声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如，氨基酸分析决定的肽含量是80%， 在1mg样品中，那么瓶中毛重是1.25mg。

　　大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水， 例如，25mg样品中肽百分比为90%，那么，实际肽量为25mg×90%=22.5mg

　　不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如arg, lys ）的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。

◎　冻干肽的保存

　　所有产品应存于冰箱， 最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。

◎　肽溶液的保存

　　溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性ph(ph5-7), -20℃保存的，为避免样品的反复冻融， 最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完， 应扔掉，细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦， 为克服此，肽应溶于无菌水， 或肽溶液用0.2μ m滤膜过滤。

◎　多肽的重建和操作

　　多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时，要注意使初始浓度比要求浓度大，如果多肽仅有限溶解性， 这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。

　　如果多肽在水中的溶解性有限，有几种选择可帮助溶解：

　　对碱性肽用稀乙酸（含arg , lys , his）

　　酸性肽用稀氨水（含asp, glu）

　　对极疏水的肽用10%有机修饰物（acetonitrnile , methanol）

　　极不溶的肽用dm50或dmf

　　guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用， 与上述方法合用， 声处理也是溶解多肽的有效手段。

◎　多肽应用和保存

　　多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外，这点都会发生， 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用声处理。溶解仍有问题， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，会便于溶解。

　　要长期保存多肽， 最好冷冻干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。 多肽易受细菌降解，应用无菌纯化水溶解。

　　含有met, cgs或try残基的多肽溶液由于氧化，寿命有限。应溶于无氧溶剂， 为防止重复冻融的破坏， 建议溶解过量的肽的便实验，其余多肽以固体形成保存。

◎　hplc分析和纯化

　　分析hplc使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。

　　hplc分两类：离子交换和反相。 离子交换hplc依*多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定ph范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。 分离是一种电荷相互作用，通过可变ph， 离子强度， 或两者洗脱出多肽，通常， 先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性ph中带正电来分离。

　　反相hplc条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱， 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为g4-g8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的， 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而，总体实践中， 这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成， 比如苯基。

　　典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%tfa-h2o和80% acetonitrile 0.1%tfa--h2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)

　　大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀he formic酸(5-6%, ph2-4), 10-100mm nh4hco3, 醋酸钠/氨，tfa/tea，磷酸钠或钾，异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意一点：硅反相柱料不能长时间暴露于高ph，甚至微碱ph， 因为这样会破坏柱子。

目前市面上有多家品牌，主要有abi、roche、bio-rad和mj

荧光定量pcr的技术

定量pcr技术自产生以来，不断发展完善，到目前为止已经非常成熟了。标记方法由最初单一的染料法，发展到了特异性更高的探针法，如taqman、molecular beacon、fret等不同方法的标记探针，其中由于taqman探针的广泛使用，实时定量pcr的方法也称为tagman法。

在过去很长一段时间里，由于pcr检测的灵敏性和不稳定性，容易产生假阳性，国家对这种检测方法在临床上的应用是禁止的。但是随着荧光定量pcr技术的发展成熟和完善，特别是taqman方法的广泛使用，使得荧光定量pcr以一种新的pcr检测技术得以在在临床检测上使用，如对病毒、病菌及其它致病微生物，致病基因的检测。

taqman探针法具有高适应性和可*性，实验结果稳定重复性好；由引物、探针序列和引物探针相互作用关系的双重保证克服了普通pcr的缺陷，现在国家对这方面的限制正逐步解开，目前正在规范相应的法律法规，为荧光定量pcr技术在分子诊断中的广泛使用做准备工作。

最常用的有三种检测模式：

１、r green i检测模式。

2、taqman探针法

3、杂交探针

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虽然我不是这个专业，但这个问题似乎有点模糊。
一个直链是指完全拉直吗？那就应该是指的氨基酸竖着放的直径？
如果是某一个特定的多肽的话，大概可以用VMD测一下？

我以前也是做多肽的，现在改做核苷这块，也想自己搞搞，手工合成多肽比较好控制！

< >那么最近十年多肽研究主要集中在哪些方面？未来多肽发展趋势是什么？前景如何？共同讨论。

[em01]

< >固相多肽反复机械的合成,没有很高的技术,只有液相的需要很高的技术!!

多肽液生产 我3年前做过的，对多肽液功能及生产那是相当了解，，有时间可以当面交流 电话已发你 邮箱 那你现在从事什么工作呢？

< >多肽的反相梯度加压毛细管电色谱分离

< >奇文共欣赏----估计制备级很难了.

< >分数限制是不是太高了,我降了一些,希望楼主不要见怪.

< >摘要􀁽以c18为固定相,采用电压和压力联合驱动流动相,研究反相加压毛细管电色谱分离多肽􀁾考察了加压电色谱中􀁯电压对带电和中性物质迁移的影响,实现了梯度加压毛细管电色谱分离,种多肽.结果表明,加压电色谱可以很好地抑制气泡形成􀁯实验结果准确􀁯重复性好􀁾梯度加压毛细管电色谱在复杂样品的分离分析中,具有很大的潜力.

楼主，你好，我最近分离出来了一种细菌分泌的物质，可能是多肽，我想问一下，做液质的话，多肽样品是怎么准备的？需要萃取吗？我的样品含盐

我现在就处于完事开头难的境地，抓不到头绪，想找大神指点迷津
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我今年做过1个多肽冻干制剂，我建了一个QQ群，你可以加一下，有问题随时指导。群号：44377653