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IPHASE/汇智和源 吞噬能力最强的免疫细胞——巨噬细胞? 巨噬细胞(Macrophages,m?)是一类具有吞噬和消化能力的白细胞,是免疫系统中的重要组成部分,具有强大的吞噬能力。作为单核-巨噬细胞系统的一部分,它们负责吞噬和清除体内的寄生虫、外来的细菌,以及异常或衰老的细胞。同时,巨噬细胞还具有参与调控炎症、促进伤口愈合、清除细胞残骸等功能,对维持机体免疫自稳和监视异常细胞起着关键作用。因此,在体外分离、纯化并扩增巨噬细胞对于免疫治疗等领域的研究具有重要意义! 一、巨噬细胞的简介 巨噬细胞也称组织细胞(histocyte),是由血液中的单核细胞穿出血管后分化而成,随后穿过血管内皮迁徙到不同组织,最终分化为具有组织特异性的巨噬细胞。在单核细胞分化为巨噬细胞的过程中,其体积增大、溶酶体增多,吞噬和消化能力逐渐增强,逐渐拥有发挥抵抗外界病菌入侵的能力。同时,还伴随着部分细胞表面受体增加、部分细胞内酶表达增强及分泌过氧化氢和超氧离子能力降低等变化。 在不同组织中巨噬细胞具有不同的名。 组织类型 名称 肝 Kupffer细胞 肺 Alveolar巨噬细胞 结缔组织 组织细胞 大脑神经组织 小胶质细胞 骨 破骨细胞 皮肤 朗格汉斯细胞 脂肪组织 脂肪组织巨噬细胞 结缔组织 组织巨噬细胞 淋巴结 淋巴结巨噬细胞 脾白髓 脾巨噬细胞 巨噬细胞分布广泛,在疏松结缔组织内数量较多。巨噬细胞形态多样,因其功能状态不同而变化,一般为圆形或椭圆形,并有短小突起,功能活跃者常伸出较长伪足而呈不规则形。胞核较小,呈圆形或椭圆形,着色较深。扫描电镜下,细胞表面有许多微皱褶和突起,呈彩球状。透射电镜下,胞质含有大量初级溶酶体、次级溶酶体、吞噬小泡和吞噬小体,此外还有较发达的高尔基复合体、少量线粒体和粗面内质网等。巨噬细胞在体外培养时可附着在玻璃和塑料表面,其胞质非特异性脂酶阳性,常以此收集和鉴别巨噬细胞 。 二、巨噬细胞的分型 对于巨噬细胞来说,不同的因素如信号分子、生长因子、转录因子及小生境信号等均会影响其活化状态和表型分类。一般来说,巨噬细胞可以根据其活化状态和发挥功能进可分为两种亚型:M1型即经典活化的巨噬细胞(classically activated macrophage),和M2型即替代性活化的巨噬细胞(alternatively activated macrophage),针对巨噬细胞的不同刺激,M2型又可以分为M2a、M2b、M2c、M2d。两种亚型的巨噬细胞具有不同的功能。 图片来源:Int Immunopharmacol . 2019 May;70:459-466. doi: 10.1016/j.intimp.2019.02.050. Epub 2019 Mar 9. M1 M2 激活因子 INF-γ、LPS Th-2细胞因子(IL-4、IL-13)、免疫复合物、IL-10 细胞因子 IL-12、IL-23、活化的细胞可以产生iNOS,炎症细胞因子(TNF、IL-6、IL-12、IL-15)在Th1反应中成为诱导性及效应性细胞。 高表达清道夫受体(CD163、甘露糖受体、半乳糖型受体),IL-10、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、干扰素诱导蛋白10(IP-10)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1)。 趋化因子 CXCL1、2、3、5、8、9、10 CCL2、3、4、5、11、17 CCL24、CCL17、CCL22、CCL2 三、巨噬细胞功能 巨噬细胞的功能主要表现在三个方面:吞噬作用、抗原呈递作用和分泌生物活性物质以参与免疫应答。 吞噬作用 当病原体微生物、寄生虫或其他外来的抗原进入机体后,可首先被巨噬细胞吞噬并清除。在吞噬过程中,巨噬细胞在微管、微丝和肌动蛋白等细胞骨架的参与下,通过伸出伪足来包裹并摄入病原体或其他异物。同时,细胞内膜发生内陷、形成吞隐小泡等变化,促进巨噬细胞的包裹和吸收吞噬。 图片来源:https://view.inews.qq.com/k/20230506A00PB300?no-redirect=1&web_channel=wap&openApp=false 抗原呈递作用 巨噬细胞通过捕获、内吞和表达自身或外来抗原并将其提呈给其他免疫细胞来作为启动免疫反应的一部分,并且还分泌不同的趋化因子和各种强大的物质来影响适应性免疫细胞的激活。 分泌生物活性物质以参与免疫应答 巨噬细胞分泌细胞因子、补体蛋白和酶等多种生物活性物质。这些物质通过调节其他免疫细胞的活性和功能来参与免疫应答和炎症反应。例如,白细胞介素(IL)可以激活和调节T细胞、B细胞和NK细胞的活性;肿瘤坏死因子(TNF)可以诱导炎症反应并杀死被感染的细胞。 因此,作为唯一能够通过不同机制来对抗病原体的巨噬细胞,对其进行体外收集、纯化并扩增来研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫具有重要意义! IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES/汇智和源生物技术(苏州)有限公司所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
抗体药物作用机制——补体依赖的细胞毒性作用(CDC效应) 目前,抗体类药物已成为肿瘤免疫或自身免疫性疾病治疗的热门研究方向,不同单抗应对肿瘤的作用机制也不尽相同。常见的抗肿瘤作用机制包括中和/阻断肿瘤特异性生长因子受体或免疫调节因子,以及发挥抗体结构上的效应功能即利用补体和细胞介导肿瘤细胞溶解。 一、CDC效应的概念 抗体的结构决定了其作用机制,抗体由Fab端和Fc端组成。其中Fab端可通过识别游离的分子(如VEGF)和细胞表面分子(如CD20,CD19)执行其功能);而Fc端则决定了抗体的效应功能,比如今天所要介绍的 补体依赖性细胞毒性作用(Complement dependent cytotoxicity; CDC)。 补体系统 是重要的免疫调节系统,补体及其补体系统是由多种血清蛋白组成的级联酶促反应,其家族成员超过40种蛋白质,且这些蛋白相互调控补体系统的三条重要途径为 经典途径(Classical Pathway,CP)、凝集素途径(Lectin Pathway,LP)和替代途径(Alternative Pathway,AP)。 补体依赖的细胞毒性,指的是补体参与的细胞毒作用,即通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合,形成复合物而激活补体 经典途径 ,所形成的攻膜复合物(MAC)对靶细胞发挥裂解效应。 补体经典途径由C1q分子起始。当抗体如IgG的Fab端与靶细胞上的抗原相结合后,IgG的Fc区域发生相互作用、联结,进一步暴露出C1q的位点。C1q是补体系统的第一个蛋白,它可以识别并结合到抗体上的补体结合位点,从而发生构型改变,随后激活C1r和基于Ca2+存在下具有酶活性的C1s。C1r和C1s开始引发一系列的级联反应,并涉及到C4,C2,C3,C5,C6,C7,C8和C9等补体家族成员。随后,C5b、C6-C9再组装成MAC并在细胞膜上凿孔,最终引起细胞裂解。 图片来源:Complement System: a Neglected Pathway in Immunotherapy. 二、影响CDC作用的因素及检测方法 目前已知的影响CDC效应的因素为5点。 抗体亚型: 通常,CDC效应强弱(或活化C1q能力高低)的抗体亚型比较为:IgM>IgG3>IgG1>IgG2。IgG4不具备激活补体经典途径的能力,但是凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。 靶细胞抗原的表达水平: 靶细胞表面的抗原需足够多才可激活补体,若抗原表达水平较低时,补体不被激活。 补体调节蛋白: 靶细胞表面或内部及血清中存在的部分蛋白可以调节补体的活性,进而影响CDC效应。 补体来源: 通常选用人源或SPF级空白食蟹猴血清作为试验中补体的来源,鼠源血清对细胞有毒害作用但没有CDC效应。(来自食蟹猴的未灭活血清可用于表达靶抗原的人类靶细胞的CDC检测。) 抗原-抗体结合方位: 抗原-抗体的结合方位及相邻抗体的排列方式会显著影响CDC效应。 图片来源: Complement System: a Neglected Pathway in Immunotherapy. CDC检测的流程通常为将靶细胞、待测抗体和作为补体来源的血清于37℃下共同孵育1-24小时,即可检查裂解后的死细胞或活细胞。目前常用的检测方法为:荧光染料(如PI)标记死细胞,台盼蓝标记死细胞,calcein-AM标记活细胞,Alamar blue标记活细胞,CCK-8检测细胞活力,51Cr释放实验等。 三、IPHASE相关产品 IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,可提供人源或SPF级空白食蟹猴血清,助力客户开发具有CDC效应的抗体药物,从而治疗肿瘤或自身免疫性疾病。 产品名称 规格 保存方式 空白人血清 50/100 ml 冷冻 空白食蟹猴血清 50/100 ml 冷冻 合规性 IPHASE所提供的空白人/食蟹猴血清均来源清晰,合法合规。 安全性 IPHASE提供产品的捐献者/食蟹猴均为健康供体,经过病毒或传染源检测。 专业性 IPHASE提供的产品,均由专业人员操作执行,每个批次的产品均提供相应COA,且全程冷链运输,安全、快速保证产品质量。 服务好 高质量的售后服务,确保试验一路绿灯。 可定制 可根据客户的特殊需求“专人专供”。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES/汇智和源生物技术(苏州)有限公司所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
喜讯:南方医科大学使用IPHASE产品在《Cell》子刊《Cell Host & Microbe》(IF30.3)发表文章? 近日,南方医科大学陈鹏组李冬平老师, 使用IPHASE品牌产品:Human liver microsome、 Mouse liver microsome在Cell host & microbe(IF=30.3) 权威期刊上发表题为Oral magnesium prevents acetaminophen-induced acute liver injury by modulating microbial metabolism的研究型论文,揭示了口服镁(Mg)来预防及减轻对乙酰氨基酚诱导的急性肝衰竭的机制。 对乙酰氨基酚的过度使用是急性肝衰竭(ALF)的常见原因。在ALF过程中,毒素被CYP2E1等酶代谢并转化为活性物质,导致肝的氧化损伤和衰竭。李老师团队证明口服镁可以通过调节双歧杆菌代谢来预防对乙酰氨基酚引起ALF。在关键酶甲酸C -乙酰转移酶的作用下,镁可以增加双歧杆菌吲哚-3羧酸的产量。吲哚-3羧酸与CYP2E1酶结合使其失活,从而抑制了肝细胞中引起氧化损伤的有害反应中间体的产生。 摘 要 Acetaminophen overuse is a common cause of acute liver failure (ALF). During ALF, toxins are metabolized by enzymes such as CYP2E1 and transformed into reactive species, leading to oxidative damage and liver failure. Here, we found that oral magnesium (Mg) alleviated acetaminophen-induced ALF through metabolic changes in gut microbiota that inhibit CYP2E1. The gut microbiota from Mg-supplemented humans prevented acetaminophen-induced ALF in mice. Mg exposure modulated Bifidobacterium metabolism and enriched indole-3-carboxylic acid (I3C) levels. Formate C-acetyltransferase (pflB) was identified as a key Bifidobacterium enzyme involved in I3C generation. Accordingly, a Bifidobacterium pflB knockout showed diminished I3C generation and reduced the beneficial effects of Mg. Conversely, treatment with I3C or an engineered bacteria overexpressing Bifidobacterium pflB protected against ALF. Mechanistically, I3C bound and inactivated CYP2E1, thus suppressing formation of harmful reactive intermediates and diminishing hepatocyte oxidative damage. These findings highlight how interactions between Mg and gut microbiota may help combat ALF. 再次恭喜文献发表,以及对我司产品的认可,希望以上文献能帮助大家了解目前研究进展及我们的核心技术,欢迎各位新老客户联系我们咨询、提出意见,愿我们的努力成果与您的科研碰撞出不一样的火花! 了 解 更 多 肝微粒体是指肝组织在匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构,包含了CYP450酶和一些Ⅱ相酶,如UGTs、ST等。肝微粒体用于CYP450酶研究时,只需要加入NADPH或NADPH的再生系统即可启动反应。对于UGT酶活性的研究,则需加入尿苷二磷酸葡萄糖(UDPGA)和丙甲菌素启动反应。 由于肝微粒体是Ⅰ相代谢酶的主要来源,故肝微粒体在体外药物代谢研究中被广泛使用。肝微粒体不但可以为系统的药物代谢提供定性的信息,而且可以在药物研发过程中用于大量化合物代谢稳定性的筛选及优化,同时可以用于评价潜在的药物药物相互作用。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE/汇智和源 PBMC在免疫治疗药物研发中的应用热点问题解答? —热点问题— 第一题 CD4+T细胞加普通培养基可以培养几天? 经多次验证,分选后的CD细胞在普通培养基中仅能维持24~48小时,且随着时间的延长细胞活力和状态都在不断的下降。 第二题 PBMC可以在体外扩增吗? PBMC在没有相关细胞因子存在情况下不能扩增。由于PBMC是一群混合细胞,即使添加了细胞因子也只能是某些亚型细胞的扩增,最终导致PBMC细胞组成比例发生改变。 第三题 分选后的细胞想要培养,应该选择什么培养基?普通1640是否可以? 不同亚型免疫细胞扩增需要在基础培养基中添加不同的细胞因子或细胞因子组合,基础培养基可选用1640培养基。为满足客户的不同需求,IPHASE正在陆续推出不同亚型细胞的扩增、分化培养基,敬请期待! 第四题 冻存PBMC,复苏后细胞亚群比例会改变么? 冻存PBMC复苏后细胞亚群比例是否改变与冻存液的冻存效果有关。冻存效果好的冻存液细胞冻存复苏后活率高,则细胞亚群比例不会发生显著改变。IPHASE推出的PBMC冻存液细胞复苏后活率>90%,完全满足后续实验要求。 第五题 阳选,阴选,适配体分选如何选择? 若靶抗原与磁珠偶联抗体的持续结合不影响后续实验,比如分选细胞用于RNA或蛋白的提取,则可以考虑阳选试剂盒。反之,则需要选择阴选或IPHASE的适配体无痕分选试剂盒。IPHASE适配体无痕分选试剂盒分选后纯度>95%,且细胞不带磁珠和与靶抗原结合的适配体分子,兼具有阳选试剂盒和阴选试剂盒的优点。 第六题 冻存PBMC能用于细胞分选试验吗? IPHASE推出的分选试剂盒均可用于冻存PBMC的细胞分选。 第七题 我公司最近想开发PBMC质控品,想寻找一款冻存效果较好的冻存液,有推荐吗? IPHASE无血清细胞冻存液适用于您的需求,细胞复苏存活率>90%,得率>85%,复苏后细胞亚群比例不发生改变。 第八题 通过阳性分选试剂盒得到的细胞是否可通过流式细胞仪进行检测? 通过阳性分选的方法得到的细胞与磁珠连接,但所使用磁珠为纳米磁珠,理论上不影响流式细胞仪的检测。如有疑虑,可尝试使用培养外加反复吹吸的方式使得细胞和磁珠脱离后再进行流式检测。需注意的是,流式抗体选择请严格参照产品说明。 第九题 IPHASE的人PBMC进行HLA分型鉴定吗?IPHASE的人PBMC供体库有多大? IPHASE的人PBMC均进行了HLA分型鉴定。IPHASE的人PBMC供体库目前有近百个donor,库容量正在逐渐增加,客户可以从我们人PBMC供体库中选择适合自己实验的PBMC。 第十题 冻存PBMC复苏操作上应注意哪些细节? 首先,需要37℃预热复苏培养基。其次,水浴解冻细胞时要注意管内细胞融化状态,当融化至少量冰晶时终止水浴。最后,离心力、离心时间需按随货说明书建议进行参数设置。 十一题 IPHASE人CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒刺激细胞扩增最长时间是多少? IPHASE人CD3/CD28+T细胞活化扩增试剂盒刺激细胞扩增我们只验证到15天,扩增效率超千倍,此时细胞仍保持良好状态,完全可以进一步延长时间进行扩增培养。 十二题 IPHASE提供的冻存人PBMC细胞有哪些规格? IPHASE可提供冻存、新鲜两种状态的细胞,且包含5million/支,10 million/支,50 million/支等多种规格。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。查看更多
IPHASE课堂开课了 | PBMC在免疫治疗药物研发中的应用? 2023年度IPHASE课堂 第 五 期 云端交互共探索·赋能研发新机遇 本年度第五期IPHASE课堂即将开课啦! 12月26日,IPHASE/汇智和源线上交流会将围绕PBMC在免疫治疗药物研发中的应用, 与各位与会嘉宾进行深入探讨,我们期待您的参加! 课程简介 外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC作为免疫系统的关键组成部分,在免疫学、传染病、恶性肿瘤、疫苗研发、移植治疗、个性化医学和毒理学等领域作为最基础的实验原料被广泛使用。 本次课堂,我们将围绕以下议题与参会嘉宾展开深入探讨: ·PBMC细胞概述 ·PBMC在免疫治疗药物效应评价中的运用 ·PBMC在免疫治疗药物体外安全性评价中的运用 ·IPHASE相关产品的介绍 主讲嘉宾 刘勇 博士 副研究员 IPHASE-研发副总 长期从事分子生物学、细胞生物学的基础研究和相关产品研发。江苏省“双创计划”企业创新类人才。负责和参与国家自然科学基金(面上项目)、北京市自然科学基金(面上项目)、973重大科学研究计划子课题、863项目等多项课题。 关于课程 举办时间 12月26日 19:00-20:00 报名方式 关注【IPHASE】公众号,回复【我要进群】 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
高效获取白细胞及PBMC的利器——白细胞单采术(Leukopak)? 外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,是白细胞(WBC)下的一个子集。白细胞是组成机体免疫系统对抗病毒的一部分,现常作为肿瘤免疫、自免疫等药物研发的基础细胞。因此,为保障客户的试验稳定性,作为药物研发基础的PBMC,既要有量,又要有效。然而,传统的PBMC获得方式为单独使用Ficolli密度梯度离心法,无法同时保证数量和批次间的稳定性。因此,IPHASE 采取白细胞单采术-Ficoll密度梯度离心 相结合的方法,打破传统提取白细胞和PBMC的局限性,获得稳定、大量的白细胞和PBMC! 一 白细胞单采术(Leukopak)的简介 白细胞单采术是血细胞分离单采术的一种。 血细胞分离单采术是通过利用血细胞分离机对全血进行处理,根据不同血液成分的密度、粘度等指标不同的特性,将全血进行不同血液成分的分离,分离出所需要的细胞成分,其余的血液成分回输给患者,以达到迅速改善临床症状或减少发生相关并发症风险的目的。白细胞单采术即在ACD-A抗凝剂的基础上进行血液体外循环,最终得到白细胞,而白细胞由少量的红细胞、粒细胞、CD34干细胞和大量PBMC组成,之后进行Ficoll离心即可得到高纯度的PBMC。 来源:青岛市胶州中心医院核心项目技术图 相较于从全血中提取PBMC的传统方法,白细胞单采术具有不可替代的优势。在传统方法中,理论上单独使用Ficoll的提取效率为1ml全血对应1-2 million PBMC,若一次抽取1*10e10个PBMC,则所需全血量大于人体总血液量(4-5 L)。因此,为在满足PBMC批次稳定性的基础上同时保障PBMC的供应量,IPHASE采用白细胞单采术,在血液总量相同的情况下, 仅需体外循环2次,即可得到1*10e10个PBMC, 极大地满足了客户对于PBMC的数量及质量的双重需求。 目前血细胞分离单采术的临床应用主要是采集有用细胞用于治疗和去除血液中的病理物质,可以分离淋巴细胞进行CAR-T治疗、造血干细胞采集、血小板去除、红细胞去除,也可以血浆置换、血浆吸附,血小板PRP采集等。 二 IPHASE白细胞单采术产品 IPHASE为保障捐献者的安全,白细胞单采术操作均由专业人士执行,体外循环次数在1.5-2个循环间,提取免疫细胞在个人总量的1/4~1/2间,同时为捐献者补充一定量的葡萄糖酸钙以中和ACD-A抗凝剂,确保在7-14个免疫细胞生长周期后捐献者能快速恢复。因此,在白细胞单采术的基础上,捐献者可间隔30天重复捐献,一年最多捐献12次,极大地降低了个体间免疫细胞的差异,也保证了个体免疫细胞的供应量,是客户进行大规模研究或临床前试验的理想选择! IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,为客户提供经白细胞单采术后的白细胞和经Ficoll离心得到的PBMC,助力广大客户对肿瘤免疫、自免疫等药物的深层研究。 技术 产品 白细胞 白细胞 单采术 PBMC 安全性 IPHASE提供产品的捐献者均为健康供体,经过预筛选,且病毒检测为阴性(HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒)。 合规性 IPHASE提供捐献者签署的知情同意书,来源清晰可溯源。 专业性 IPHASE提供的经白细胞单采术所得的产品,均由专业人员操作执行,每个批次的产品均提供相应COA,且全程冷链运输,安全、快速保证产品质量。 服务好 高质量的售后服务,确保试验一路绿灯。 可定制 可根据客户的特殊需求“专人专供”。 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE课堂开课啦 | PBMC在免疫治疗药物研发中的应用? 外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC作为免疫系统的关键组成部分,在免疫学、传染病、恶性肿瘤、疫苗研发、移植治疗、个性化医学和毒理学等领域作为最基础的实验原料被广泛使用。 本年度第五期IPHASE课堂即将开课啦! 12月26日,IPHASE/汇智和源线上交流会将围绕PBMC在免疫治疗药物研发中的应用, 与各位与会嘉宾进行深入探讨,我们期待您的参加! 汇智和源将携手专业技术同事与大家交流 赶紧搬好小板凳 一起get行业干货吧! 举办时间 2023年12月26日 19:00-20:00 联系电话 15910545801 报名方式 关注公众号【IPHASE】回复“我要进群” 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
以专业邂逅产品,用智慧创新研究 | IPHASE/汇智和源精彩亮相第十一届药物毒理学年会? 11月29-12月2日,第十一届药物毒理学年会已于广东省广州市白云国际会议中心成功召开。 1.大会掠影 本次大会邀请了知名院士、药物审评专家、各专委会主任委员或代表、NMPA领导、NMPA药品审核查验中心GLP专家、CDE专家、国内外药物毒理学相关领域的著名学者以及上市公司技术总裁和具有丰富实践医药研发经验的专家等,聚焦药物安全,引入国际视野,聚合创新技术,突破关键瓶颈,支撑创新研发,促推产业发展。 2.IPHASE展台 此次论坛,IPHASE携旗下ADME、遗传毒性、空白生物基质、细胞与细胞分选四大业务板块亮相北京创新论坛核心展示区。凭借过硬的产品实力、一流的技术平台、专业的研发团队快速帮助大家提升实验的成功率,赋能试剂研发新机遇。 IPHASE/汇智和源作为创新药体外研究生物试剂引领者,通过专业的技术团队和全面的售后服务,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,以专业邂逅产品,用智慧创新研究! 3.往期精彩 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
第十一届药物毒理学会 | IPHASE与您相约羊城广州,齐聚白云山下,共襄盛会? 为展示我国药物毒理学及相关领域工作者最新研究成果,搭建国内外药物毒理学研究进展、政策法规、技术指南、前沿技术方法、发展动向以及医药产业的高端学术交流平台,提高我国药物毒理学研究和应用水平,实现国内药物毒理研究在技术水平和规范与国际接轨,推进我国药物毒理学后备人才的成长,从而促进我国药物毒理学事业的发展。 第十一届药物毒理学年会”将于2023年11月29日-12月2日在广东省广州市白云国际会议中心召开。 届时,IPHASE/汇智和源将于会场设立展台,和参会人员分享IPHASE在药物研发领域的经验及成果。 IPHASE 展 位 IPHASE/汇智和源将于11.29-12.2携带优势资源,在第十一届药物毒理学年会E16展台亮相, 现场好礼多多,欢迎各位行业人士莅临现场。 时 间 地 点 论坛名称 第十一届药物毒理学年会 举办地点 广州白云国际会议中心 举办时间 2023年11月29日-12月2日 IPHASE展位 E16展台 关 于 IPHASE 作为一家专注于研发并生产药物体外研究相关试剂的高新技术企业,汇智和源生物技术(苏州)有限公司奉行“创新试剂,研发未来”的发展理念,凭借专业的技术团队和先进的研发平台,现可提供ADME研究、体外遗传毒性研究、空白生物基质、PBMC、免疫细胞亚型、磁珠分选试剂盒、重组蛋白和抗体等多品类的产品,成功打造最专业的体外研究生物试剂品牌——IPHASE,全面助力化药、ADC药、核酸药、抗体药、基因治疗及细胞治疗药等的早期筛选工作。 本次大会,IPHASE/汇智和源将携旗下ADME、细胞与细胞分选、空白生物基质、体外遗传毒性等产品线与大家见面, 我们将在现场介绍产品的适用场景和使用注意事项,力争解决大家在实验(试验)过程中碰到的问题。 11月29日,我们期待与您一起相聚羊城广州,齐聚白云山下,共襄盛会! 往 期 精 彩 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE/汇智和源走进中国医学科学院药物研究所? 11月27日,IPHASE/汇智和源将携全品类产品走进中国医学科学院药物研究所,开展【IPHASE产品在药物研发中的应用】主题演讲。 本次讲座我们将 以主题演讲加面对面沟通的形式开展, 深度了解大家在试验中的困扰,解决一线实验技术人员在产品使用中遇到的疑难问题,提高实验成功率。 PM 14:00-15:00 原代肝细胞与药物研发 刘勇 IPHASE-研发副总 肝脏是药物代谢的重要器官,体外代谢模型多以肝脏为基础。常用的体外模型有肝微粒体、肝S9、肝胞质液、原代肝细胞、肝组织切片、重组人代谢酶等。其中,原代肝细胞因具有较好的体外试验重现性,基本维持了肝脏的代谢功能,特别是较好的保留了与体内一致的酶水平,成为了体外药物试验的“金标准”,广泛应用于药物代谢与毒理学研究中。 PM 15:00-16:00 体外药代动力学研究 王倩 IPHASE-总经理 体外药代动力学研究作为广泛应用于药物研发过程中各个阶段的方法,可以帮助我们更好的了解药物的药理作用,其药代动力学参数等,而体外药代动力学研究也逐渐成为了药物研发和剂量安排的有利证据。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
ADC药物体外研究“一站式”产品解决方案? 抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate,ADC) 是通过连接子将小分子化合物偶联至靶向性抗体或抗体片段上的一类新型的生物技术药物,可以增强药物靶向性和稳定性、减少临床毒副反应、提高治疗指数,兼具传统小分子药物的杀伤效应和抗体药物的靶向性,主要应用于抗肿瘤或者其他疾病的靶向治疗。 一 ADC药物的结构组成 ADC药物由抗体或抗体片段、连接子和小分子化合物三个部分组成。 其中,抗体通常选用可内吞的抗体,主要作用是靶向性介导抗体依赖性细胞吞噬;连接子具有一定的循环稳定性,可以支持药物在到达靶器官前不被降解或者少量降解,进入细胞后能够快速释放活性小分子化合物;小分子化合物能够对靶细胞产生药效作用。 ADC分子进入体内后,可通过单克隆抗体的导向作用与靶细胞表面的抗原结合,并进一步转入靶细胞内,进入细胞内 (主要在溶酶体内) 的ADC分子,可通过化学/或酶促作用释放小分子毒素和/或毒素类似物 (即效应分子) 以 “杀灭”靶细胞。ADC药物在结合了单克隆抗体的高度靶向性和小分子毒素的强细胞毒性等优点时,也给其药代动力学研究带来了诸多挑战。 图1 ADC药物结构 二 ADC药物的药代动力学特征 从分子量大小和空间体积来讲,抗体构成了ADC结构上的主体。作为整体,ADC表现出诸多与抗体本身类似的药代动力学特征,但由于ADC药物是多分子组成的混合物,各部分分子及其代谢物的存在和分布均需被同时研究。 因此,ADC药物较传统抗肿瘤药物,其药代动力学研究更困难,且 主要体现在吸收(Absorption)、分布(Distribution)、代谢(Metabolism)和排泄(Excretion),即ADME过程中。 ADC采用注射方式给药,其分布同抗体药物类似,均特异性的随抗原分布在于血液量大的组织中,如肝、肾等器官中。肝脏是人体最大的药物代谢器官。ADC药物进入溶酶体(或酸化的肝匀浆液)内,之后从ADC药物上释放的小分子毒性效应成分和具有药效的代谢产物均在肝脏中的细胞色素P450酶进行代谢,也会发生由酶诱导或酶抑制导致的药物—药物相互作用现象发生。最终,ADC药物经代谢后部分游离效应小分子、部分分子量较小多肽及氨基酸连接的效应分子、分子量较小的抗体代谢片段可能通过肾小球滤过或转运体介导而被排泄至粪便中。 图2 ADC药物作用机制 (来源:Acta Pharm Sin B. 2020 Sep;10(9):1589-1600) 三、ADC药物体外研究“一站式”产品解决方案 根据国家药品评审中心(CENTER FOR DRUG EVALUATION, CDE)发布的《ADC非临床研究技术指导原则》,对ADC药物在非临床阶段的研究策略和基本框架提出了相关要求,并着重强调了ADC药物需要进行体外和体内药理机制和药效作用的研究的必要性。 为满足客户对ADC药物非临床阶段体外早研的需求,IPHASE作为创新药体外研究生物试剂引领者,建立了ADC药物体外研究“一站式”产品解决方案。 对于ADC药物的开发,首先需确定其释放有效载荷(payload)的具体形式,而通常体外payload释放试验是在 肝S9组分、溶酶体环境、酸化的肝匀浆液 或者靶细胞的孵育体系中完成。其次,针对ADC药物复杂的药代动力学特征,IPHASE开发出 完整的、多种属、多品类、多器官的ADME产品 供客户选择,用于支持药物代谢的初期筛选。 合规性 生产产品的组织均由正规渠道获得,来源清晰。 安全性 动物经过传染源检测,保证产品质量安全。 纯度高 细胞纯度可达到90%以上。 活率高 细胞活率可达85%以上,满足客户需求。 复苏率高 冻存复苏率可达90%以上。 可定制 可根据客户特殊需求,提供特殊种属、特殊组织细胞的定制服务。 以下为IPHASE部分产品列表。 类别 分类 亚细胞组分 肝溶酶体 酸化肝匀浆液 肝 / 肠 / 肾 / 肺微粒体 肝 / 肠 / 肾 / 肺 S9 肝 / 肠 / 肾 / 肺胞质液 原代肝细胞 悬浮肝细胞 贴壁肝细胞 重组酶产品 CYP重组酶 UGT重组酶 转运体 ABC转运体 SLC转运体 专属血浆 血浆蛋白结合 血浆稳定性 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE/汇智和源 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验热点问题解答【下】? 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答 —热点问题— 第一题 一张玻片可观察到200个中期分裂相吗?如果不够,该如何处理? 大多数情况下,一张玻片很难找到200个可用于分析的中期分裂相,建议同一个剂量组多制作一些玻片,本公司一个剂量组通常会制作至少4张玻片,以保证足够中期分裂相细胞可供分析。 第二题 如何辨别细胞是否处于中期分裂相? 中期分裂相细胞染色体数目、形态比较固定,染色体包含两条染色单体,具体见下图: 第三题 有丝分裂指数测定的意义是什么? 中期分裂相指数是指所观察的细胞中中期分裂相细胞的占比,是一项反映细胞增殖程度的指标。 第四题 油镜如何使用?是否要将油镜镜头整个浸入油中? 油镜的使用需要搭配香柏油,香柏油与玻璃的折光率相近,光线穿过载玻片进入香柏油发生折射较少,而进入油镜的光较多,视野较为明亮。油镜使用时,需要将油镜镜头浸入香柏油中,并与玻片接触,使用结束后使用少量二甲苯擦拭干净镜头。 第五题 中期分裂相细胞少是什么原因导致?如何优化? 中期分裂相细胞少的原因如下: (1)秋水仙素的剂量过小,作用时间过短; (2)重悬时固定液量过大,细胞密度过低。 优化策略: (1)秋水仙素剂量大,则作用时间短; (2)秋水仙素剂量小,则适当延长作用时间,请选择适宜的剂量和时间; (3)根据细胞的收集量确定重悬体积; (4)适当增加滴片的数量。 第六题 染色体聚集可能是由哪些原因导致? 染色体聚集的可能原因如下: (1)秋水仙素用量过多,导致染色体的过度浓缩; (2)低渗时间不足,导致染色体聚集在一起分散不开; (3)细胞悬液未充分吹打均匀; (4)载玻片未进行预冷,玻片表面张力不够; (5)滴片高度不够。 第七题 染色体分散过度可能是由哪些原因导致? 染色体分散过度的根本原因就是细胞膜破裂。主要由以下可能: (1)低渗时间过长; (2)离心速度过高; (3)细胞操作过程不注意,操作过度; (4)滴片距离过高。 第八题 染色体畸变试验阅片需要配套什么样的显微镜?如何操作? 染色体畸变试验使用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙胺)处理细胞,使细胞停止在中期分裂相,此时染色体形态、数目都比较固定,使用普通生物显微镜即可进行染色体结构畸变观察。先于低倍镜下寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的中期分裂相细胞,再于油镜下进行染色体畸变观察并记录。 第九题 玻片想要长期保存,需要如何处理? 如果玻片要长期保存,必须要做好封片(可使用中性树脂胶并加盖玻片),并置于阴凉干燥处保存。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE/汇智和源 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验热点问题解答【上】? 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答 —热点问题— 第一题 细胞被“黑胶虫”污染了该如何处理? 如果培养的细胞被“黑胶虫”污染,需先去评估污染的严重程度。如果污染不严重,可选用市售的“黑胶虫”清除试剂进行处理;如果污染较严重,建议直接丢弃该细胞,分析造成“黑胶虫”污染的原因并进行治理。 第二题 CHL细胞为试验系统,细胞准备时推荐的接种密度是多大?接种后培养多久可以开始染毒? 本公司使用T25瓶进行试验,接种密度为6~9×10^4/mL,接种量为5mL,即每瓶细胞量是3×10^5个~4.5×10^5个。一般情况下,接种后24h左右细胞的融合率可达到80%即可进行染毒,如果融合率不够,也可以继续培养直至满足试验需求。 第三题 一般如何确定秋水仙素的浓度和处理时间啊? 秋水仙素剂量大,则作用时间短;秋水仙素剂量小,则适当延长作用时间。本公司使用的秋水仙素浓度是1μg/mL,4h。 第四题 秋水仙素工作的机理是什么? 秋水仙素可以抑制纺锤体的形成,导致纺锤丝无法捕捉到着丝粒而造成染色体不能向细胞两极移动。同时,秋水仙素处理后,染色体将会不能排列在赤道板,所以在细胞中会散乱分布。 第五题 细胞收集量少是什么原因导致的?如何优化? 细胞收集量少的原因主要有以下几点: (1)酶消化过程消化不干净; (2)离心速度过低,细胞不能沉淀,导致细胞丢失; (3)铺板细胞量不够; (4)样品对细胞有毒性,细胞死亡。 优化策略: (1)酶消化过程需于显微镜下观察,确保消化完全; (2)适宜的离心条件,通常250g,5min; (3)细胞悬液需混合均匀,必要时多次计数; (4)如有需求,请于正式试验前开展预试验。 第六题 低渗目的是什么?有什么注意事项? 在低渗环境中,细胞易吸水膨胀,染色体铺展,以便能在一个平面上观察所有染色体形态,为后续染色做准备。在低渗过程中我们需要注意以下几点: (1)低渗时间。低渗时间过长,可引起细胞破裂,染色体丢失;低渗时间不足,细胞膨胀度不够,染色体聚集,分散不好,不利于阅片。本公司低渗是使用0.075mol/L的氯化钾溶液37℃水浴30~40min。 (2) 细胞操作需轻柔。低渗后的细胞会胀大,通透性增强,细胞操作过程一定要轻柔,以防细胞破裂。 (3)离心条件需适合。低渗后细胞膨胀,离心力过高,细胞容易破裂,导致染色体丢失;离心力过低,细胞不能沉淀,收集不到细胞。 第七题 细胞在固定过程中丢失是什么原因导致的? 细胞在固定过程中丢失可能是因为离心速度过低,细胞不能沉淀或沉淀不够,在更换固定液的过程中导致细胞丢失。 第八题 每次固定的时间是多久?固定几次比较合适? 本公司使用的是预固定加重复固定的方法。预固定在低渗结束前进行,一般3~5min,步骤虽简单却不能省略,可有效预防细胞因加入大量的固定液而凝结成块。固定步骤共重复3次,一般30±5min。 第九题 玻片干燥怎么操作? 可于室温下自然干燥,也可于37℃干燥箱中烘干。 第十题 使用吉姆萨染液同样条件下染片,为什么会出现有的片子是蓝色的,有的是红色的? 根本原因是因为染色过程中pH的变化。吉姆萨染液由天青,伊红组成,所带电荷随溶液PH而定。在偏酸性环境中下在电荷增多易与伊红结合染色偏红;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE课堂开课啦 | 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答? 染色体是细胞核中遗传物质的主要载体,由染色质螺旋缠绕,逐渐缩短变粗形成。 环境中的有害因素或致突变物作用于机体或培养的细胞后可导致染色体畸变。 体外细胞染色体畸变试验即是检测体外细胞染色体畸变的一项致突变性试验, 该试验是在有和无代谢活化条件下,将细胞培养物暴露于受试物一定时间,并经过有丝分裂中期相阻断剂处理、细胞收获、制片染色,分析中期相细胞的染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性,广泛应用于农药、食品、化妆品和药品等安全性评价。 本年度第四期IPHASE课堂即将开课啦! 10月31日, IPHASE/汇智和源线上交流会将围绕 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答, 与各位与会嘉宾进行深入探讨,我们期待您的参加! 汇智和源将携手专业技术同事与大家交流 赶紧搬好小板凳 一起get行业干货吧! 举办时间 2023年10月31日 19:00-20:00 联系电话 15910545801 报名方式 关注公众号【IPHASE】回复【进群】即可参加 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
IPHASE/汇智和源猫原代肝细胞及肝微粒体研发成功? PART.01 原代肝细胞、肝微粒体简介 肝脏是药物代谢的重要器官,体外代谢模型多以肝脏为基础,而其中原代肝细胞和肝微粒体是较为常用的两种体外模型。 原代肝细胞(Primary hepatocytes)是指从动物肝脏直接分离的肝实质细胞,具有不可替代的优势。原代肝细胞与体内环境保持一致,酶量与辅助因子水平浓度与正常生理浓度贴合,满足在接近生理状态情况下研究药物代谢和毒性的需求,真实反应了体内的代谢情况。同时,利用原代肝细胞在体外进行研究,无须担心动物实验的伦理问题,也减少了动物实验所需的成本开支。目前,原代肝细胞已广泛应用于药物研究,包括探讨药物在肝中的代谢途径和药物药代动力学的研究;预测并解释药物—药物间的相互作用;研究药物的细胞毒性等。 作为肝亚细胞结构的肝微粒体(Liver Micresomes),相较肝细胞而言,其操作简单、价格合理、储存方便,在药物代谢的初期筛选方面也得到了广泛应用。肝微粒体是指肝组织匀浆和差速离心过程中获得的由破损的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构,包含I相CYP450酶和一些II相酶。作为I相代谢酶的主要载体,肝微粒体广泛适用于体外代谢稳定性、代谢表型、酶抑制和代谢产物鉴定等试验研究。 目前,常见的原代肝细胞及肝微粒体为人、猴、大鼠、小鼠、犬等多种属,广泛适用于体外药物研究。 PART.02 猫原代肝细胞、肝微粒体的重要性 然而,除以上常见的啮齿/非啮齿类试验用动物,猫在生物医药等领域的研究已越来越重要。猫作为中型试验用动物,相对于大/小鼠来说,体型更大,便于试验操作和观察。美国农业部动植物卫生检疫局(APHIS)的统计数据显示,2017年美国在科研、教育及药物研发等领域使用了约1.8万只猫。据文献报道,中国的试验用猫年使用量约在5000只以上,其中浙江省每年的药品质量监测使用的试验用猫量为400-500只。使用试验用猫进行药物研发和监测,大部分需使用猫的原代肝细胞和肝微粒体进行体外研究。 猫的原代肝细胞和肝微粒体除适用于验证人类药物外,也对研究兽药具有重要作用。相较于人类药物,兽药研究和开发相对滞后,但兽药市场的规模逐年增大。越来越多人选择猫作为宠物,以猫原代肝细胞或肝微粒体为载体进行体外药物代谢和毒性研究,便于家禽家畜、哺乳类动物等兽药开发,明确药物在动物疾病预防和治疗中的作用分析。 鉴于此,IPHASE顺应生物医药发展,成功分离出国内首家猫原代肝细胞及猫肝微粒体产品,助力新药研发! PART.03 原代肝细胞、肝微粒体相关产品 IPHASE作为创新药体外研究生物试剂的引领者,凭借先进的设备,专业的技术人员和多年研发的经验,成功分离出国内首家猫原代肝细胞和肝微粒体,为客户研发提供新选择! 1 合规性 生产产品的组织均由正规渠道获得,来源清晰。 2 安全性 生产人员及动物均经过传染源检测,保证产品质量安全。 3 纯度高 细胞纯度可达到90% 以上。 4 活性高 IPHASE技术人员以7-乙氧基香豆素(500μM)为底物验证细胞色素CYP450酶的活性,结果表明满足顾客需求。 5 复苏率高 冻存复苏率可达90% 以上。 6 可定制 可根据客户特殊需求,提供特殊种属、特殊组织细胞的定制服务。 除国内首家猫原代肝细胞及肝微粒体产品,IPHASE技术人员亦从人、猴、犬、大鼠、小鼠、猪、兔等多个种属中分离得到相应的原代肝细胞及肝微粒体产品,以7-乙氧基香豆素(500μM)为探针底物来验证原代肝细胞和肝微粒体中细胞色素CYP450的活性。经活性测定结果表明,IPHASE多种属原代肝细胞和肝微粒体活性高、纯度好,可满足不同领域客户的多层次需求。 IPHASE不同种属原代肝细胞部分产品 产品描述 规格 人原代肝细胞 5 million 食蟹猴肝细胞 2 million 恒河猴肝细胞 2 million 比格犬肝细胞 2 million SD大鼠肝细胞 2 million ICR/CD-1小鼠肝细胞 2 million C57BL/6小鼠肝细胞 2 million 小型猪肝细胞 2 million 新西兰兔肝细胞 查看更多
重磅 | 国内首家 IPHASE肝溶酶体产品研发成功? 经过研发团队的不断优化,IPHASE肝溶酶体产品取得了突破性的进展,并顺利通过多家合作单位的内部测试,得到了一致好评!预计与2023年9月将正式投入市场销售,欢迎大家来电咨询! PART.01 溶酶体简介 溶酶体是由Christian deDuve在20世纪50年代发现并确立其作为细胞中降解和代谢的中心细胞器。溶酶体是单膜、动态、异质性的细胞器,其位置、形态、大小、酶含量和底物各不相同。溶酶体膜包含数百个外周膜蛋白,包括多种转运蛋白和离子通道。溶酶体多亚基V-ATPase维持着酸性溶酶体腔。这种的低pH(4.5-5.5)值能够激活>50种溶酶体内水解酶,这些酶消化包括蛋白质、核酸、脂质和碳水化合物在内的大分子。溶酶体接受和消化小分子和细胞内吞物质,吞噬大颗粒如凋亡的细胞尸体和致病菌,或自噬细胞质内容物,包括受损的线粒体、内质网和溶酶体。因此,溶酶体长期以来被认为是细胞的“回收箱”。 PART.02 溶酶体与新药研发 小核酸药与溶酶体 小核酸药物是指能够与特定的mRNA结合,通过干预mRNA翻译效率,最终达到治疗效果的特定序列的小片段核苷酸。小核酸药物包括反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)药物、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)药物、微小RNA(microRNA,miRNA)药物、RNA适配体(Aptamer)药物等,其中ASO和siRNA是目前主流的小核酸药物研究方向。 给药后,小核酸药物首先需要躲避血浆和组织中核酸酶的降解、免疫系统的捕获,顺利到达靶组织,并通过胞吞作用进入细胞,并在内吞体与溶酶体结合前实现逃逸,进入细胞质,与目标mRNA结合实现基因沉默,进而发挥药效。溶酶体可作为高效的试验系统,在体外评估修饰后的小核酸药经溶酶体作用后稳定性的变化,为小核酸的研究提供数据支持。 抗体偶联药物(ADC)与溶酶体 抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)是通过连接子将小分子化合物偶联至靶向性抗体或抗体片段上的一类新型的生物技术药物,可以增强药物靶向性和稳定性、减少临床毒副反应、提高治疗指数,兼具传统小分子药物的杀伤效应和抗体药物的靶向性,主要应用于抗肿瘤或者其他疾病的靶向治疗。 ADC分子进入体内后,可通过单克隆抗体的导向作用与靶细胞表面的抗原结合,并进一步转入靶细胞内,进入细胞内 (主要在溶酶体内) 的ADC分子,可通过化学/或酶促作用释放小分子毒素和/或毒素类似物 (即效应分子) 以 “杀灭”靶细胞。ADC需要功能性溶酶体分解释放发挥药效的小分子药物,通过溶酶体膜渗透或转运出溶酶体,与胞质或细胞核中的分子靶标相互作用。ADC与溶酶体的体外实验可以评估连接子能否被溶酶体有效果切割进而释放出所携带的小分子药物,为ADC连接子的设计提供体外评估工具。 PART.03 IPHASE肝溶酶体产品 IPHASE作为药物开发所需体外生物试剂的研发、生产和供应的领先供应商,凭借专业的研发和生产团队,通过不断的优化和测试,现推出人、猴、犬、大鼠、小鼠五个种属的肝溶酶体产品,助力于药物研发。 1 酶活高 IPHASE肝溶酶体均进行过组织蛋白酶B和酸性磷酸酶活性的测定,酶活可对标或高于同类进口产品。 2 批量生产 采用批量生产方式,库充充足,可保证同一批次产品的供应。 3 货期短 自主研发,国内现货,保障客户使用需求。 4 售后服务机制健全 有专业技术人员提供全方位服务。 产品 规格 Human Liver Lysosomes 2mg/ml,250μL Monkey Liver Lysosomes 2mg/ml,250μL Dog Liver Lysosomes 2mg/ml,250μL Rat Liver Lysosomes 2mg/ml,250μL Mouse Liver Lysosomes 2mg/ml,250μL IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为遗传毒性研究提供便捷产品。此外,IPHASE/汇智和源可提供特殊产品的定制服务,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 发 文 章 得 奖 励 凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于北京汇智和源/IPHASE所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品: 非SCI论文及IF≤5分,500元礼品; 5分<IF≤8分 800元; 8分<IF≤10分 1000元; IF≥10分 2000元; 注:礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券; 活动多多,礼品丰厚,快来参与吧! 关 于 我 们 汇智和源,致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂,IPHASE为公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。 查看更多
好消息 | IPHASE体外染色体畸变试剂盒推出新版本啦? 1 体外染色体畸变试验介绍 染色体是真核细胞在有丝分裂或减数分裂时DNA存在的特定形式,是细胞核中遗传物质的主要载体,由染色质螺旋缠绕,逐渐缩短变粗形成。在细胞分裂中期,所有染色体以其浓缩形式在细胞中心排列,通常在显微镜下可观察到染色体的特定形态。 体外染色体畸变试验便是基于中期染色体的特性而建立起来的一项致突变性试验,用于检测体外细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性。体外细胞染色体畸变试验是在有和无代谢活化条件下,将细胞培养物暴露于受试物一定时间,并经过有丝分裂中期相阻断剂处理、细胞收获、制片染色,分析中期相细胞的染色体结构畸变,从而评估受试物的致突变作用,广泛应用于农药、食品、化妆品和药品等的安全性评价。 正常中期分裂相染色体 三辐体 双着丝粒 断裂 环状 2 IPHASE体外染色体畸变试剂盒 2.1 试剂盒介绍 中国仓鼠肺细胞(CHL),易在体外建立细胞系,便于控制试验条件,重复性好,自发突变率低,染色体数目正常时非突变型为25条,便于分析,是进行染色体畸变试验常用细胞。IPHASE/汇智和源综合公司多年的研发经验和在遗传毒理学研究方面的实践经验,以中国仓鼠肺细胞CHL作为试验系统,将开展体外染色体畸变试验的主要试剂和细胞整合在一起,推出了体外染色体畸变试剂盒,试剂盒各组成成分均经过严格的质量检测,实验结果准确、可靠、重现性好,适用于多个领域的体外染色体畸变研究。 l 便捷性 省去诱导S9制备、试剂配制时间,可以直接使用,大大缩短了实验周期。 l 准确性 试剂盒各成分均经过严格的质量检测,实验结果准确、可靠、重现性高。 l 稳定性 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。 l 应用广 应用范围广,可用于食品、化学品、农药、消毒剂、食品添加剂、化妆品、等多个方面的遗传毒理学检测。 2.2 新、旧版试剂盒比较 IPHASE以各领域染色体畸变试验的国家标准和指导原则为技术指导,以客户在使用试剂盒过程中反馈的意见为优化方向,经过不断的验证和测试,特推出新版本的体外染色体畸变试验试剂盒,满足各领域的试验需求。新版本的试剂盒针对产品组成、规格、使用方法等多方面进行优化,使用更简单、便捷。 ①产品规格 ?从20test增加至30Test。 ? 可满足短时间和长时间染毒需求。 ②产品组成 ? 增加了吉姆萨染色试剂。 ? 增加了制品过程所需耗材和试剂。 ③使用说明 ? 试剂盒使用方法更加详细。 ? 增加了关键点把控和试验注意事项等内容。 3 相关产品 产品描述 规格 标准Ames试验试剂盒 100/150/200/250 dishes Mini-Ames试验试剂盒 6孔板*24板/6孔板*40板 Micro-Ames试验试剂盒 24孔板*6板/24孔板*10板 微量波动Ames试验试剂盒 16*96 wells/4*384 wells Ames Ⅱ试验试剂盒 16*96 wells/4*384 wells Ames菌株鉴定试剂盒 2 Tes TK基因突变试剂盒(L5178Y) 36 Test HGPRT基因突变试剂盒 36 Test 体外染色体畸变试验试剂盒 30 Test 体外微核试验试剂盒 32 Test 彗星试验试剂盒 20/50 Test IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为遗传毒性研究提供便捷产品。此外,IPHASE/汇智和源可提供特殊产品的定制服务,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。 查看更多
【系列三】IPHASE/汇智和源 体外药代动力学研究热点问题解答? 体外药代动力学研究 —热点问题— 第一题 体外PPB实验的实验方法如何选择? 目前,常用于血浆蛋白结合率测定的方法主要包括平衡透析法(equilibrium dialysis, ED)、超滤法(ultrafiltration, UF)和超速离心法(ultracentrifugation, UC)。但是,具体选用哪种方法需综合化合物的物理性质、化学性质和个人经验等。一般来说,ED可用于亲水性药物和高PPB药物(85-100%);UF可用于不稳定、高度亲水的药物,具有中等至低PPB(<85%);UC可用于疏水性化合物的PPB研究。 第二题 体外PPB实验的缓冲液如何选择? PPB实验中最常用的缓冲液是 pH为7.4的磷酸钠或磷酸钾缓冲液。对于某些化合物,由于不溶性盐的形式或与蛋白质上药物的结合位点之间的相互作用等原因,可能需要用到其他的缓冲液。 第三题 使用平衡透析法进行血浆蛋白结合实验时,应该如何选择适宜孔径大小的透析膜? 血浆中与药物结合的蛋白主要有白蛋白(Albumin,65KDa)、脂蛋白(Lipoprotein,200~3400 KDa)、a1-酸性糖蛋白(Alpha acid glucoprotein,44KDa)。白蛋白是血浆中含量最高的蛋白,占血浆蛋白总量的60%,是主要的药物结合蛋白,华法林即是与白蛋白结合的典型代表。透析膜孔径选择的原则是截留分子MW的一半,需达到90%以上的截留,且是透过分子MW的两倍。 第四题 平衡透析法中二氧化碳是必须的吗? 体内血液(或血浆)的生理pH值范围是7.2~7.6,血液一旦从动物体内取出,血液中的二氧化碳便会逸出,导致pH的升高,从而影响化合物血浆蛋白结合的性质和程度。为了避免pH的变化,建议在实验之前使用少量高浓度磷酸将血浆pH调整至7.4或在二氧化碳培养箱中进行孵育培养。 第五题 在平衡透析法中,是否需要设置缓冲液组,考察药物是否在设定时间内达到平衡? 建议设置该对照组,一方面可以考察这个药物会不会在特定时间内达到平衡,另一方面也可以评估药物在缓冲液中是否稳定。 第六题 PPB实验要做几个种属? 原则上除人外,至少还需要选取毒理研究的动物种属,如果药效和毒理的种属不同,也需要加上。 第七题 PPB实验的浓度如何设计? 一般应包括正式PK实验中的代表性有效浓度,高浓度建议接近或超过PK最高剂量的Cmax,建议几个种属设置相同浓度,也可以依据种属PK差异设置不同浓度,一般至少10倍的测定范围。 第八题 非特异性吸附高怎么办? 使用表面活性剂预清洗UF装置可以最大程度地减少滤膜引起的非特异性吸附(NSB)。碱性化合物可使用5%苯扎氯铵,中性和酸性化合物可使用0.5~5%吐温80。为了对药物与超滤装置之间的NSB进行校正,可以将已知量的药物溶于血浆水(超滤后的空白血浆)并进行超滤,非特异性吸附的校正因子,即超滤前初始血浆中的药物浓度与超滤后血浆水中的药物浓度之间的比率。 查看更多
【系列二】IPHASE/汇智和源 体外药代动力学研究热点问题解答? 体外药代动力学研究 —热点问题— 第一题 酶诱导的受试物浓度一般设置多少?如果体系待测物溶解度很差有没有什么解决办法? 酶诱导试验需要设置3个不同的浓度,浓度水平需涵盖预期人体内有效血药浓度,最高浓度的选择至少比平均的人体内的有效血药浓度高一个数量级。如果在水相中溶解度很差,可以选择有机溶剂作为其溶剂,如DMSO,但是需要控制有机溶剂在体系中加入量。 第二题 在酶诱导试验中是否需要在酶活性和mRNA两个水平上进行评估? 通常需要结合酶活性和mRNA两个水平上的结果做结论,且mRNA水平更能真实反映诱导源头上的效应,且更为敏感。仅测量酶活性主要存在问题是:当同时存在抑制作用时,可能会掩盖诱导作用,而通过测量mRNA水平进行转录分析可解决该问题。且应通过阳性对照验证系统,证明其中所有主要的CYP酶有功能且可被诱导。 第三题 酶诱导研究中,研究初期为什么只关注CYP1A2,CYP2B6 和 CYP3A4三个酶? CYP诱导的根源是药物与主要核受体的结合从而使相应的mRNA表达量增高,从而导致CYP酶表达水平的升高。其中,CYP3A、CYP2C的核受体是孕烷X受体(PXR),CYP1A2的核受体是多环芳香烃受体(AhR),CYP2B6的核受体是组成型雄烷受体(CAR),而CYP2D6则未发现可被诱导。若体外试验未见对 CYP3A4 酶的诱导,则可不必再评价对 CYP2C 酶的诱导作用;若在研药物体外研究结果显示可以诱导 CYP3A4,且结果提示应进一步开展临床试验,则需评估其诱导 CYP2C 的可能性。 第四题 在诱导试验中为什么要连续加药诱导? 一般情况下促变药应多次给药直至其达到稳态后,再评价其对底物药物的影响。若促变药并非诱导剂或者时间依赖型抑制剂,并且可证明单次与多次给药对酶/转运体的影响相似时,可采用单次给药进行 DDI 研究。 第五题 肝细胞代谢试验中阳参药物的代谢较参考数据慢很多,可以考虑哪些原因? 可能会有多种原因会导致该结果。首先,需要确认试验过程是否存在问题,不同厂家的产品在使用上会存在或多或少的差异,我们需参照产品COA确认自己的试验结果和厂家提供的数据是否存在差异。其次,确认肝细胞的质量是否达标,质量不好会直接影响试验结果。质量的确认可以从复苏存活率、维持状态等多个方面进行考察。 第六题 请问本公司是否可承接原代肝细胞相关项目? 本公司有专业的技术人员和完善的分析检测平台,可承接原代肝细胞相关项目,如果感兴趣可与我们商务人员对接。 第七题 什么情况下需要进行UGT表型研究? 体外或体内研究的数据显示UGT酶是候选药物的主要代谢酶时,需要考虑进行UGT表型研究。化学抑制法和重组酶法仍然是UGT酶表型研究的常用方法,但因UGT酶暂未筛选出较为全面的选择性较强的抑制剂,重组酶法常为其首选方法,也是最有效的方法。 第八题 酶抑制研究中什么时候测定Ki值? 当IC50<1 μM时,强烈推荐进行Ki值测定;当IC50为1~10 μM之间,较为接近有效浓度时,也可以考虑测定Ki值。 第九题 是否需要评估化合物是否为时间依赖性抑制剂? TDI是一种比可逆抑制带来更严重的副作用的状况,初步推荐单点法或2点法评估,高点可以为50×Cmax或剂量/250mL的0.1倍,一旦发现,则必须精确评估。 第十题 酶抑制试验中,底物的消耗量为什么要小于20%? 通常情况下,酶抑制试验我们会检测产物的生成量,会尽量选择相对高的底物浓度,且保证选择的孵育时间点是在线性反应时间点内。如果底物浓度过低,有可能会很快达到平衡,从而导致结果判定有误或难以判断。 十一题 酶抑制研究中,是否可以用Cocktail探针底物法? 文献和资料中提到,IND申报需要使用单底物法进行酶抑制研究的,筛选型研究可以使用cocktail探针法。 十二题 筛选阶段酶抑制试验可以不设置平行吗? 建议试验中设置平行,如果平行做不好,可能试验系统问题存在。设置平行可确保组内精密度、准确度得到有效控制,也是试验结果有效性的直接证据。 十三题 体外代谢试验需要设计很多对照组,请问对照组是必须的吗?是否可以删减? 对照组的目的是考察化合物本身在不同组分中的稳定性,对照组结果稳定是整个代谢试验成立的前提条件。 十四题 化合物在有机溶剂中可以检测到,但加入孵育体系后检测不到? 初步判定可能是化合物在水相中溶解度不好或者化合物在水相环境中易水解导致的。若是由于在水相中溶解度不好导致,可优化样品前处理过程;若相同浓度化合物在水溶液和有机溶剂的响应相差50%以上,判定化合物易水解(0.1M PBS对某些化合物而言,可能存在基质效应,判定前需排除基质效应影响),不易进行体外代谢试验,建议确认化合物发生药效是化合物本身还是其水解产物。 十五题 有机溶剂的加入对试验结果有什么影响? 孵育体系中有机溶剂的含量要控制在1%以内。孵育体系中发挥代谢作用的组分是酶,而酶的本质是蛋白,有机溶剂加入过多,会导致酶变性,活性降低或丧失,故孵育体系中要控制有机溶剂的加入量。 查看更多
【系列一】IPHASE/汇智和源 体外药代动力学研究热点问题解答? 体外药代动力学研究 —热点问题— 第一题 在代谢稳定性研究中,需要使用肝微粒体和原代肝细胞两个试验系统进行试验吗? 肝微粒体是肝组织在匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构,包含了CYP450酶和一些二相酶,如UGTs、ST等。原代肝细胞(Primary hepatocytes)是指从动物肝脏直接分离后立即培养的肝细胞,基本维持了肝脏的代谢功能,特别是较好的保留了与体内一致的酶水平。在代谢稳定性研究中,不需要考虑成本,可同时选择两种试验系统进行试验;也可根据化合物的代谢特性选择合适的试验系统,原则是哪个系统代谢速率高选哪个。一般情况下,化合物分子水溶性较强、一相代谢为主要代谢途径(尤其是经由CYP)等情况下,肝微粒体为最优选择;二相代谢为主要途径、水解作用为主要代谢途径、肝微粒体中非特异性蛋白结合很高、肝微粒体中代谢不明显的时候,可使用原代肝细胞进行试验。 第二题 代谢稳定性试验中微粒体浓度是考察过的吗?过高或过低有什么影响呢? 在代谢稳定性试验中,蛋白浓度也会影响代谢速率,通常选择的微粒体蛋白浓度为0.1mg/mL~1mg/mL,具体选用多大蛋白浓度需根据化合物自身代谢特性去选择。微粒体蛋白浓度过高,会导致药物和微粒体蛋白非特异性的结合;而微粒体浓度过低,则可能导致药物的代谢不明显。 第三题 非特异性蛋白结合对试验结果有什么影响? 如果候选药物与微粒体蛋白发生非特异性结合,则会导致动力学参数的改变。随着蛋白浓度的增加,Km值也会增大,从而造成推测的内在清除率偏低。同时,候选药物与微粒体中蛋白的结合,也会造成不同实验室和不同体系结果差异较大。 第四题 药物只做一相代谢可代谢10%,只做二相代谢也只代谢10%,但使用二相代谢试剂盒却可代谢50%,如何解释? 药物的生物转化,分为一相代谢反应和二相代谢反应。药物在一相代谢反应中主要发生氧化、还原和水解的反应,经过一相代谢反应,药物可能带有一些极性基团,如羟基、羧基等。二相代谢,又称结合反应,一相代谢产物或原型药物在酶的影响下与内源性小分子发生结合,使药物毒性、活性降低或极性增加而易于排出的反应。一般来说,药物先进行一相反应进行转化,如果极性依然较弱,则会启动二相反应,但有些药物可直接进行二相反应。所以,才会有以上现象的存在。 第五题 半衰期和清除率怎么计算? 将受试物在0min浓度作为100%,各时间点的受试物浓度与0min浓度相比得到剩余百分数。各时间点的受试物剩余百分数的自然对数与孵育时间经线性回归,求得斜率(k),由公式求得各种属微粒体中的消除半衰期t1/2和体外肝微粒体中的固有清除率Clint in vitro。 第六题 原代肝细胞代谢稳定性试验细胞密度推荐多少?清除率计算和肝微粒体一样的吗? 原代肝细胞代谢稳定性试验推荐的细胞密度为0.5~2×106个/mL,清除率计算和肝微粒体代谢稳定性试验的结果处理方法是一致的。 第七题 代谢稳定性研究试剂盒中阳性底物的作用是什么?孵育时间点应如何设置? 试剂盒中阳性底物的作用主要是为了证实试剂盒的有效性。孵育时间点的设置主要看是基于什么试验目的,若只是为了验证孵育系统是否正常工作,仅需设置0点和一个非零时间点即可;若需考察阳性底物的代谢稳定性特征,则需设置0点和3~5个非零时间点。 第八题 肝微粒体试验中,孵育时是否要开盖保证有氧气的参与? 理论上来讲,一相代谢反应是有氧反应,需要有氧气的供应,我们内部曾做过验证,孵育时开不开盖对结果没有影响。 第九题 代谢稳定性试验中必须要有镁离子吗?镁美离子的作用是什么啊? 代谢稳定性研究可以有肝微粒体和原代肝细胞两种试验系统可供选择。如果使用原代肝细胞为试验系统不需要添加镁离子,如果选择肝微粒为试验系统则需要添加镁离子来辅助代谢,镁离子可以有效的提高酶的活性。 第十题 代谢产物鉴定试验中孵育时间该如何选择? 代谢产物鉴定的试验系统需与代谢稳定性试验保持一致。如果选用肝微粒体为试验系统,孵育时间通常控制在60min内(最长不超过2h);如果选用肝细胞为试验系统,孵育时间需控制在120min内(最长不超过4h),在设定的孵育时间内调整肝微粒体的加入量或肝细胞的终浓度,让药物的剩余量控制在10%~50%的范围内,以保证有足量的代谢产物生成而便于进行产物推断。 十一题 代谢稳定性药物浓度一般为1μM,代谢产物鉴定一般10μM,这个浓度如果体内远远达不到该怎么办? 在代谢稳定性试验的目的是得到半衰期和体外清除率的数据,从而推断体内的清除率。理论上,孵育浓度低至<<Km值时,测得的Clint就基本上不在变化了,而大部分化合物的Km>>1μM,故一般未知化合物都会选1μM进行试验;代谢产物鉴定试验提高化合物的浓度的目的是能够有足量的产物生成而利于产物鉴定。如果体内达不到,可以根据实际情况进行调整。 十二题 一相代谢和二相代谢所用的缓冲液是不一样的吗?PBS和Tris缓冲液? 有文献报导,对于大多数UGT酶亚型,由于PBS缓冲液会降低其选择性和酶活性,所以二相代谢中选用了Tris缓冲液,故导致了一相代谢和二相代谢所使用的缓冲液有差异。 十三题 如果需要同时考察一相和二相代谢,试验系统应如何选择? 如果要同时考察一相和二相代谢,选择原代肝细胞作为试验系统是最好的选择。原代肝细胞具有完整的细胞结构,不需要额外添加辅助因子,可以很好的模拟体内的代谢情况。 十四题 磷酸盐缓冲液的目的是什么啊?为什么要磷酸根呢? 磷酸盐缓冲液的目的是模拟生理环境,磷酸根是维持体内体液环境最重要的缓冲对之一,故选择了磷酸根。 十五题 0min代谢点总是会发生代谢反应,该如何处理? 建议先加入终止液,再启动代谢反应。查看更多
简介
职业:北京汇智和源生物技术有限公司 - 经理
学校: -
地区:北京市
个人简介: IPHASE/汇智和源致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的试剂产品,品牌宗旨“Innovative Reagents for Innovative Research”。 公司主要产品:ADME产品,空白生物基质,遗传毒性产品,重组蛋白,抗体,原代细胞,分选细胞等。 查看更多
企业简介
企业名称:汇智和源生物技术(苏州)有限公司
企业性质:生产商,
主营业务:微粒体,S9,CYP450重组酶,悬浮肝细胞,贴壁肝细胞,PBMC,免疫T细胞,细胞分选试剂盒等
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