什么是RIP试剂盒及其应用领域? RIP试剂盒是一种研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术,可以帮助我们了解转录后调控网络动态过程。它可以用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBPs(RNA结合蛋白)的互作关系等。通过使用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中的内源性RNA结合蛋白,RIP技术可以防止非特异性的RNA结合。IP技术主要是利用针对目标蛋白的抗体将相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后通过分离纯化可以对复合物上结合的RNA进行验证或测序分析。 RIP技术是一种基于抗体的实验方案,用于定位体内RNA-蛋白质相互作用。它可以帮助我们研究单个蛋白质和RNA分子间的物理结合。通过将所关注的RNA结合蛋白与其结合的RNA一起进行免疫沉淀,然后通过实时PCR、微阵列或测序等方法对RNA进行分析。 使用RIP试剂盒进行实验的步骤包括:收集细胞、分离细胞核、裂解细胞核沉淀、染色质片段化、免疫沉淀、洗去未结合的物质、纯化免疫沉淀后的RNA、将RNA逆转录为cDNA,并通过qPCR、微阵列或测序进行分析。 RIP试剂盒具有方便、快速、易于操作的优点。它提供优化的磁珠,适用于沉淀RNA-蛋白复合物。同时,它具有高品质和稳定性好的特点,结果的重复率也很高。操作简单、耗时短,可以得到客观准确的结果。 RIP试剂盒的应用领域有哪些? RIP试剂盒可以应用于转录后调控研究、表观遗传调控、炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路和免疫学等领域。 例如,在研究c-FLIP基因在肝癌中的表达意义及其在TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用时,可以使用RIP试剂盒通过免疫组化法检测实验组和对照组中c-FLIP和RIP蛋白的表达情况。通过分析RIP和c-FLIP在肝癌组织中的表达与肿瘤的病理学分级、患者临床分期以及复发远处转移之间的相关性。 参考文献 [1] Cellular‐FLIP, Raji isoform (c‐FLIPR) modulates cell death induction upon T‐cell activation and infection. Tanja Telieps, Frida Ewald, Marcus Gereke, Michaela Annemann, Yvonne Rauter, Marc Schuster, Nana Ueffing, Dorthe Smolinski, Achim D. Gruber, Dunja Bruder, Ingo Schmitz. Eur.J.Immunol..2013(6) [2] Targeting c-FLICE-like inhibitory protein (CFLAR) in cancer. Simone Fulda. Expert Opinion on Therapeutic Targets.2013(2) [3] Survival Function of the FADD-CASPASE-8-cFLIP L Complex. Christopher P. Dillon, Andrew Oberst, Ricardo Weinlich, Laura J. Janke, Tae-Bong Kang, Tehila Ben-Moshe, Tak W. Mak, David Wallach, Douglas R. Green. Cell Reports.2012(5) [4] Local tumor progression following lipiodol-based targeted chemoembolization of hepatocellular carcinoma: a retrospective comparison of miriplatin and epirubicin. Jin Iwazawa, Jin Iwazawa. Cancer Management and Research.2012(defa) [5] Caspase‐mediated programmed cell death pathways as potential therapeutic targets in cancer. Z.‐Q. Lin, Y.‐Q. Wei. Cell Prolif..2012(3) [6] Loss of memory B cells during chronic HIV infection is driven by Foxo3a- and TRAIL-mediated apoptosis. van Grevenynghe, Julien, Cubas, Rafael A, Noto, Alessandra, DaFonseca, Sandrina, He, Zhong, Peretz, Yoav, Filali-Mouhim, Abdelali, Dupuy, Franck P, Procopio, Francesco A, Chomont, Nicolas, Balderas, Robert S, Said, Elias A, Boulassel, Mohamed-Rachid, Tremblay, Cecile L, Routy, Jean-Pierre, Sékaly, Rafick-Pierre, Haddad, Elias K. Journal of Clinical Investigation.2011(10) [7] cIAPs Block Ripoptosome Formation, a RIP1/Caspase-8 Containing Intracellular Cell Death Complex Differentially Regulated by cFLIP Isoforms. Molecular Cell.2011(3) [8] 孙吉春. RIP、c-FLIP基因在肝癌中的表达意义及其在TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用[D].中南大学,2013.查看更多
如何制备8-(4-二苯并噻吩基)-2-(4-吗啉基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮? 8-(4-二苯并噻吩基)-2-(4-吗啉基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮是一种常用的医药合成中间体。它可以通过2,4-二羟基苯甲酸甲酯与三氟甲酸酐、二苯并噻吩-4-硼酸反应制备而得。 制备步骤 1)制备2-羟基-4-三氟甲磺酰氧基苯甲酸甲酯 将三氟甲磺酸酐滴加到2,4-二羟基苯甲酸甲酯的溶液中,加入吡啶和二甲基氨基吡啶的混合物,反应16小时后洗涤、干燥并重结晶,得到2-羟基-4-三氟甲磺酰氧基苯甲酸甲酯。 2)制备2-氨基色烯-4-酮 在氮气保护下,将二异丙胺的溶液与正丁基锂反应,然后加入N-乙酰胺和羟基苯甲酸甲酯的溶液,反应后调节pH值并萃取,得到2-氨基色烯-4-酮。 3)制备三氟甲磺酸2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-铬-8基酯 将2-氨基色烯-4-酮与三氟甲酸酐反应,然后溶解于甲醇中,调节pH值并萃取,得到三氟甲磺酸2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-铬-8基酯。 4)制备8-(4-二苯并噻吩基)-2-(4-吗啉基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮 将三氟甲磺酸2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-铬-8基酯与二苯并噻吩-4-硼酸、K 2 CO 3 和四(三苯基膦)钯(0)反应,经过加热、稀释、洗涤和蒸发,最后进行柱色谱纯化,得到8-(4-二苯并噻吩基)-2-(4-吗啉基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮。 参考文献 [1] Hardcastle I R , Cockcroft X , Curtin N J , et al. Discovery of Potent Chromen-4-one Inhibitors of the DNA-Dependent Protein Kinase (DNA-PK) Using a Small-Molecule Library Approach[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2006, 48(24):7829-7846. 查看更多