为什么三氟乙酰基是一种优秀的保护基? 卤原子的高电负性使得酰基碳的电子云密度减小,亲电性增加,更容易脱除。三氟乙酰基是一种性能优秀的保护基,它是Weygand最早引入到多肽合成中的一种保护基。 三氟乙酰基(Tfa)可以通过三氟乙酸酐导入,然后在稀碱液中很容易脱除。除了在肽的合成中使用外,它还可以用于甾体和糖上的氨基保护。当分子中同时存在伯胺和仲胺时,三氟乙酸乙酯可以优先与伯胺反应。与乙酸酐类似,三氟乙酸酐在存在18-冠-6的条件下,可以选择性地酰化仲胺。相反地,三氟乙酸-丁二酰亚胺可以选择性地酰化伯胺,而不影响仲胺。 三氟乙酰基在碱性条件下(如0.2M NaOH,1M Piperidine,K2CO3/MeOH/H2O或NaBH4/EtOH),对于Boc,Cbz,Trt,Alloc,Fmoc等氨基保护基不会产生影响。由于三氟乙酰基保护的氨基酸或多肽在高真空下更易气化,因此可以用于气相层析来检测消旋程度和测定天然肽的排列顺序。此外,由于三氟乙酰基中含有氟,也可以使用19F NMR来检测合成肽的纯度、消旋程度以及类似物的鉴定。 参考文献: 1. F. Weygand, E. Csendes, Angew. Chem., 1952, 64, 136 2. F. Weygand, D. Hoffmann, A. Prox, Z. Naturforsch., 1968, 23b, 279 3. N. Ikekawa, J. Biochem., 1963, 54, 279 4. E. Bayer et al., J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 265 氨基化合物TFAA引入Tfa保护基 To a stirred suspension of the hydrobromide salt of compound 1 (1.3 g, 3.6 mmol) and 4-N,N- (dimethylamino) pyridine(0.04 g, 0.3 mmol) in CH2Cl2 (40 mL) was added Et3N(16.0 mL, 12.0 mmol), and the mixture was cooled to 0°C. Trifluoroacetic anhydride (2.5 mL, 17 mmol) was then added to the reaction dropwise. The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 8 h. The mixture was then diluted with CH2Cl2 (50 mL) and washed with 2 N HCl (50 mL), saturated NaHCO3 (50 mL), and brine (50 mL). The organic phase was then dried (MgSO4), filtered, and evaporated to leave compound 2 as a white solid, which was recrystallized from Et2O (1.2 g, 92% yield): mp 197~198°C. 来源:LabNetwork 查看更多
人慢性髓系白血病细胞的特点及应用? 人慢性髓系白血病细胞是一种来源于患者胸水的细胞系,具有高度未分化的特点。该细胞对自然杀伤细胞具有高度敏感性,因此在相关研究中得到广泛应用。 人慢性髓系白血病细胞K562是一种恶性肿瘤细胞,具有多向分化潜能,可以分化为红系、粒系和单核系的祖细胞。该细胞表达CD7。 慢性髓系白血病是一种特异性染色体异常的血液肿瘤,其染色体异常发生于第9号和第22号染色体的长臂断裂,形成Ph染色体。Ph染色体破坏了正常基因结构,形成BCR-ABL融合基因,导致酪氨酸激酶活性过强,进而造成髓细胞系的增殖失控,最终引发慢性髓细胞白血病。 miR-150调节c-Myb抑制慢性髓系白血病细胞增殖的研究 本研究旨在探讨miR-150在慢性髓系白血病细胞中的功能和作用机制。 研究使用临床收集的慢性髓系白血病患者和健康人的外周血细胞作为实验材料,通过实时定量PCR检测miR-150和c-Myb mRNA的表达水平。实验结果显示,慢性髓系白血病患者中miR-150表达降低,而c-Myb表达升高。进一步的实验表明,过量表达miR-150可以抑制慢性髓系白血病细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进行。此外,miR-150还可以下调c-Myb的表达。 综上所述,miR-150在慢性髓系白血病中的表达下调,通过抑制c-Myb的表达来抑制白血病细胞的增殖。 参考文献 [1] Guillermo Aquino-Jarquin. Emerging Role of CRISPR/Cas9 Technology for MicroRNAs Editing in Cancer Research. Cancer Research. 2017(24). [2] Grace T. Kwok, Jing Ting Zhao, Jocelyn Weiss, Nancy Mugridge, Himanshu Brahmbhatt, Jennifer A. MacDiarmid, Bruce G. Robinson, Stan B. Sidhu. Translational applications of microRNAs in cancer, and therapeutic implications. Non-coding RNA Research. 2017(3-4). [3] Young Ho Ban, Se-Chan Oh, Sang-Hwan Seo, Seok-Min Kim, In-Pyo Choi, Philip D. Greenberg, Jun Chang, Tae-Don Kim, Sang-Jun Ha. miR-150-Mediated Foxo1 Regulation Programs CD8+ T Cell Differentiation. Cell Reports. 2017(11). [4] Jun Lu, Shangqin Guo, Benjamin L. Ebert, Hao Zhang, Xiao Peng, Jocelyn Bosco, Jennifer Pretz, Rita Schlanger, Judy Y. Wang, Raymond H. Mak, David M. Dombkowski, Frederic I. Preffer, David T. Scadden, Todd R. Golub. MicroRNA-Mediated Control of Cell Fate in Megakaryocyte-Erythrocyte Progenitors. Developmental Cell. 2008(6). [5] 陈连香, 曹丽霞. miR-150通过调节c-Myb抑制人慢性髓系白血病细胞系K562增殖. 基础医学与临床. 2019, 39(09): 1259-1264.查看更多
吖啶橙荧光染色试剂盒的应用及其在肾癌患者中的临床价值? 背景 [1-3] 吖啶橙荧光染色试剂盒(Acridine Orange Detection Kit)是一种常用于细胞凋亡检测的试剂盒。它由AO Stain和AO Stain Buffer组成。染色后,通过荧光显微镜观察,吖啶橙可以透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光。而在凋亡细胞中,由于染色质固缩或断裂,形成凋亡小体。 吖啶橙可以使细胞染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒,而坏死细胞的黄荧光会减弱甚至消失。吖啶橙染色常与EB染色合用双染,EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可以区分出正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞。 吖啶橙荧光染色试剂盒是一种可以标记DNA和RNA的异染性荧光染料。它具有膜通透性,可以透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此,吖啶橙常用于细胞内DNA和RNA的检测。吖啶橙与核酸的结合方式主要有插入性结合和静电吸引。插入性结合是指吖啶橙嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要发生在吖啶橙与DNA的结合上。静电吸引是指带正电荷的吖啶橙与单链核酸的磷酸根之间产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要发生在吖啶橙与RNA的结合上。吖啶橙与DNA结合时发出绿色荧光,与RNA结合时发出红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。 应用 [4][5] 吖啶橙荧光染色法在肾癌循环肿瘤细胞检测中的临床意义 吖啶橙荧光染色法(acridine orange fluorescent, AO-F)被应用于循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)的筛选平台,并在肾癌患者的外周血CTCs筛查中得到应用,评估其在肾癌患者中的临床价值。 方法1:通过对肾癌组织原代细胞和肿瘤细胞株769-P进行AO-F染色,观察细胞形态和着色情况。分别制备死亡肿瘤细胞和活肿瘤细胞,然后进行AO-F染色,计算两组细胞中AO-F+细胞所占的比例,评估AO-F染料对肿瘤细胞的敏感性。 方法2:从健康体检者的静脉血中提取单个核细胞,通过逐级稀释的方法制备含有106个单个核细胞的细胞悬液。将不同数量的769-P细胞与106个单个核细胞混合,模拟肾癌患者外周血CTCs模型,然后进行AO-F染色,计算各组肿瘤细胞的回收率,验证该方法的敏感性和可重复性。 方法3:使用上述方法检测139例肾癌患者(112例早期患者和27例转移患者)、10例良性肾病患者的外周血中CTCs的表达水平。并分析10例健康志愿者的外周血样本,评估此方法的特异性。 方法4:分析CTCs表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、T分类、furhman分级、是否转移等临床病理参数之间的关系。 参考文献 [1]Circulating tumor cells in prostate cancer:A potential surrogate marker of survival.Jérme Doyen,Catherine Alix-Panabières,Paul Hofman,Scott K.Parks,Emmanuel Chamorey,HervéNaman,Jean-Michel Hannoun-Lévi.Critical Reviews in Oncology/Hematology.2012 [2]Detection of circulating tumor cells and its clinical value for different stages and various subtypes of breast cancer.Li L,Liu Y,Zhang S,et al.Chinese Medical Journal.2014 [3]Long term survival following the detection of circulating tumour cells in head and neck squamous cell carcinoma.Stuart C Winter,Sally-Anne Stephenson,Selva K Subramaniam,Vinidh Paleri,Kien Ha,Conor Marnane,Suren Krishnan,Guy Rees.BMC Cancer.2009 [4]Acridine orange flow cytometric analysis of renal cell carcinoma.Clinicopathologic implications of RNA content.El-Naggar A K,Batsakis J G,Teague K,et al.American Journal of Pathology.1990 [5]刘敏.吖啶橙荧光染色法检测肾癌循环肿瘤细胞及其临床意义[D].天津医科大学,2015.查看更多