异硫氰酸甲酯的应用领域是什么? 异硫氰酸甲酯是一种常温常压下的无色固体，微溶于水，但易溶于常见的有机溶剂。它在有机合成和农药化学中起着重要的作用，常被用于功能有机分子和农药分子的结构修饰和合成。此外，它还可以作为土壤熏蒸剂，用于杀灭土壤中的真菌、线虫、地下害虫和杂草种子。 异硫氰酸甲酯的结构性质 异硫氰酸甲酯是一种不稳定的化合物，容易分解。在空气中暴露或受热时，它会逐渐分解生成异硫氰酸和甲醛等产物。作为一种亲核试剂，它在有机化学反应中常被用作试剂，可以与胺、醇等亲核试剂反应。 异硫氰酸甲酯的应用 异硫氰酸甲酯在有机合成和农药化学中起着重要的作用。例如，它是合成1,3,4-噻二唑的合成砌块，可用作除草剂。一些知名药物如雷尼替丁、西咪替丁和舒立托唑也是使用异硫氰酸甲酯制备的。此外，它还被用作一种危险有毒的催泪剂。 图1 异硫氰酸甲酯的应用 在一个干燥的反应烧瓶中，可以通过将1-甲基高哌嗪溶于干燥的乙醚中，然后缓慢加入异硫氰酸甲酯来合成目标产物分子。 异硫氰酸甲酯的毒性 异硫氰酸甲酯具有强烈的刺激性，可以刺激眼睛、口腔、呼吸道和皮肤等生物组织。对眼睛的刺激作用可以导致眼部疼痛、流泪、发红等症状。口腔和呼吸道受到刺激时，可能引起喉咙痛、咳嗽、呼吸困难等症状。皮肤接触后，可以引起瘙痒、灼热、起泡等皮肤症状。此外，异硫氰酸甲酯还具有一定的神经毒性，可能影响中枢神经系统的正常功能。 参考文献 [1] Shim, Young Sun; Bulletin of the Korean Chemical Society (2013), 34(8), 2317-2320 [2] Fuente Revenga, Mario; et al European Journal of Medicinal Chemistry (2015), 102, 352-362 查看更多
重组抑肽酶的合成和应用？ 重组抑肽酶(RTI16)是一种非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，可以抑制激肽酶和胰蛋白酶的活性。它由58个氨基酸残基组成的单链碱性蛋白，具有3个二硫键相互交联。抑肽酶在医学领域有广泛的应用，早期用于治疗急性胰腺炎，后来开始用于心肺胸外科手术，用以保护血小板，减少出血和渗血，并且对凝血障碍病人的治疗也具有临床价值。因此，抑肽酶成为重要的生化药物之一。 图一：重组抑肽酶的结构 重组抑肽酶的生产 目前市售的重组抑肽酶主要是从牛肺等器官提取的，这种方法工艺复杂且成本较高。因此，研究人员开始探讨使用基因工程方法生产重组抑肽酶。采用分泌表达体系时，抑肽酶的产量和活性都较低。通过融合表达的方法，可以显著提高重组抑肽酶的表达量。研究人员构建了重组抑肽酶表达质粒pGrxA-BPTI，并在融合伙伴和重组抑肽酶之间设计了FXa的识别位点。通过凝胶过滤纯化和复性的方法，可以得到与天然产物活性相当的蛋白。通过优化表达条件，重组抑肽酶的产量比以往的表达系统有明显提高。 工程菌表达优化的步骤如下：首先将甘油管菌种接种到LB/Amp平板上培养，然后将菌落接种到LB/Amp液体培养基中，在37℃、200 r/min的条件下过夜培养。接下来，将菌体接入玉米浆培养基中，在37℃、220 r/min的条件下培养，并在诱导7小时后离心收集菌体。最后，通过SDS-PAGE检测表达情况。 另外，还可以使用发酵罐培养的方法来表达重组抑肽酶。在德国Biostat 30 L发酵罐中，控制溶氧和pH值的条件下，可以得到较高的重组抑肽酶产量。 通过以上步骤，可以得到包涵体粗品和包涵体溶解液，进而得到重组抑肽酶。 参考文献 [1] Ascenzi P, Bocedi A, Bolognesi M, et al. The bovine basic pancreatic trypsin inhibitor (Kunitz inhibitor): a milestone protein[J]. Curr Protein Pept Sci, 2003, 4(3): 231-251. [2] Sylvie R, Bertil K. Aprotinin[J]. Ann Pharmacother, 1996, 30(4): 372-376. [3] Conni L, Poul E. BPTI and N-terminal extended analogues generated by factor Xa cleavage and cathepsin C trimming of a fusion protein expressed in E. coli[J]. Protein Expr Purif, 1991, 2(5-6): 372-378. [4] Bjorn N, Cara B. Secretion incompetence of bovine pancreatic trypsin inhibitor expression in E. coli[J]. J Biol Chem, 1995, 266(5): 2970. [5] Gu ZY, Marianne Weidenhaupt. Chromatographic methods for the isolation and refolding of proteins from E. coli inclusion bodies[J]. Protein Expr Purif, 2002, 25(1): 174-179. [6] 姚佳(Yao J), 杨坤(Yang K), 杨建波(Yang JB), 等. 新型重组纤维蛋白原受体拮抗剂的表达、纯化及活性研究[J]. 中国药科大学学报(J China Pharm Univ), 2005, 36(2): 173-178. 查看更多
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