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保存有什么需要注意的?
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或包装瓶冻裂; (2)热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化; (3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法: -20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀; (4)提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清; (5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下""小黑点"":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象""小黑点"",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清; (6)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量"。
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拔梳子后,上层浓缩胶梳齿处不是规则状怎么办?
可能是因为凝胶不充分,就拔梳子了。在制胶杯中留少许剩余胶溶液,以判断凝胶状态, 确定拔梳子时间。
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拔梳子后,胶孔变形怎么办?
胶孔变形可能是因为浓缩胶与梳子吸附较紧或上层胶凝固时间过长,胶干了。浓缩胶凝好后,即可拔掉梳子,(切勿等待胶干了在拔掉梳子)缓慢平移梳子, 吸力较大可在电泳液中浸湿润滑后,再拔梳子,不建议强行拔。
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爱必信的ELISA试剂盒显色液是双组份的,有些其他品牌的是单组分的,使用单组分的有影响么?
HRP 酶标二抗的 ELISA 试剂盒,显色底物一般为 TMB , TMB 不稳定,曝光或污染氧化后会出现显色反应,导致实验背景升高,或无法使用,所以爱必信的 ELISA 试剂盒将显色液调整为双组份,方便稳定保存,仅在使用前混合,避免了 TMB 的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液,在使用前检测是否为无色透明,如果是正常的,对结果也没有影响,可以放心使用。
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T细胞分选活化磁珠如何使用?
常规建议方式如下图。具体可根据实验需求在此基础上优化。
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TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤,但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有?
试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。
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Running buffer粉末如何溶解?
电泳前,将running buffer 粉末用ddH2O溶解至500ml即可。
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RIPA裂解液网站有强中弱三种,该如何选择?
请见下表参数对比: 产品名称 RIPA 裂解液(强) RIPA 裂解液(中) RIPA 裂解液(弱) 货号 abs9229 abs9228 abs9230 有效裂解成分 1%Triton X-100, 1% NP-40, 1% NP-40, 1% sodium 0.5% sodium 0.25% sodium deoxycholate, deoxycholate, deoxycholate 0.1% SDS 0.1% SDS 裂解强度 强 中 温和 膜蛋白提取 很好 较好 一般 胞浆蛋白提取 很好 很好 很好 核蛋白提取 很好 较好 较好 主要用途 WB,IP WB,IP WB,IP,CO-IP
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生物医药
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MMP-9 重组蛋白活化步骤?
1. 准备TCNB缓冲液(50 mM Tris abs9148 , 10 mM CaCl2 abs47050020 , 150 mM NaCl abs47052148 , 0.05% Brij-35 (w/v) abs42073170 , pH 7.5 无菌水配置,100ml为例,加入6g Tris, 111mg CaCl2, 877.5mg NaCl,0.05g Brij-35 ); 2. 使用TCNB缓冲液稀释蛋白至100ug/ml; 3. 配置 p -aminophenylmercuric acetate (APMA)储存液(DMSO,100mM); 4. 在蛋白稀释液中加入APMA至其终浓度为1mM。37°孵育24h即可完成活化。
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lysis buffer和PMSF怎么使用?
根据使用量,取每1ml lysis buffer加入10ul PMSF(100mM),使PMSF的最终浓度为1mM,混匀备用 (PMSF现用现加)。
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ELISA数据处理有专门的软件吗?
有,可以到如下链接下载免费版软件, 点击下载 。
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ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么?
不是的,在双抗夹心法 ELISA 实验中,会同时用到捕获抗体和检测抗体,这两个抗体是针对同一抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体,这样才可以同时结合抗原分子。
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ELISA实验中,酶标抗体识别的是哪个抗体?
在双抗夹心法 ELISA 中,酶标抗体识别的是检测抗体,对检测抗体进行识别和酶标记。
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ELISA实验中,检测计算抗原的浓度,临界值怎么确定?
根据曲线测定的浓度,建议落在标准曲线的中间位置较好,极限最好不要超过标准曲线的上下限,如果超出较多,会影响计算结果准确性,建议调整稀释比例。
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ELISA可以检测胞内蛋白么?
可以的,选用支持组织匀浆的 ELISA 试剂盒即可,将组织样品或细胞样品进行裂解,提取胞内蛋白后进行蛋白定量,保证每孔上样总蛋白量一致即可。
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ELISA可以测DNA的表观么?
不可以, ELISA 是利用免疫学原理,定量检测蛋白质表达的技术。测 DNA 表观遗传学,主要是检测 DNA 甲基化,可以选用 ChIP 技术。
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DAPI染色中避光的操作到底要多严格才不至于影响结果?
DAPI相对很容易染上色,避光处理时加样等操作短时见光没有关系,但是不操作的时候需要暗盒或锡纸包裹,染色后应尽快检测。
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CHIP实验目的蛋白怎么选择?没有CHIP级别的抗体怎么办?
建议优先选择CHIP/CHIP-Seq验证后的抗体,提高实验的成功率。优宁维提供多种CHIP/CHIP-Seq验证货号。不建议使用WB验证抗体开展CHIP实验,可以尝试IHC/IF验证抗体,但没有售后保障。
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CHIP实验对超声仪和超声条件有没有什么要求?
探头式、震荡式和水浴式超声仪均适用于CHIP实验超声处理,但是不同的仪器、细胞类型和细胞密度,超声的条件和超声结果差别较大。实验前需要进行超声功率和时间的优化。超声功率建议做几个梯度,比如10%-60%,或100W-400W。超声时间也需要做几个梯度,比如1min-5min,这个是指超声总时长,不包括间隔时间。注意超声要在冰上进行,且要设计时断时续的超声程序,保证低温;探头式超声仪的探头要尽量深入管中,但不接触管底或侧壁,以免产生泡沫;总超声时间也不要太长,以免蛋白降解。
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CFSE配制参考?
用DMSO溶解成5mmol/l的储存液,于-20℃避光保存。。 使用时,用无血清DMEM培养液稀释成5umol/Lde 工作液备用。
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简介
职业: -
学校: -
地区:上海市
个人简介:
爱必信(上海)生物科技有限公司 Absin Bioscience Inc.,成立于2010年,公司位于浦东新区张江医谷园区,公司以销售自主品牌(Absin)产品。爱必信的目标是为生命科学等相关领域的客户提供全面的的生物化学试剂,努力打造高品质生命科学产品的知名品牌(Absin)。 目前爱必信的主要产品:生物化学试剂60万种,抗体10万种,以及各种特色优质的高性价比产品,我们的产品还在不断丰富和完善中!敬请及时关注。 爱必信特色产品线(全部现货): 二抗、标签抗体、对照抗体;WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;细胞因子、信号通路调节剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒;动植物提取物...
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企业简介
企业名称:爱必信(上海)生物科技有限公司
企业性质:生产商,
主营业务:生化试剂(常用生化试剂、生物学实验常用试剂、荧光染料、激动剂/抑制剂,植物提取物)、细胞生物学(细胞...
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