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何谓热灭活?
一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
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血清如何避免产生沉淀物?
1、解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃,实验显示非常容易产生沉淀物。 2、解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。 4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。 5、若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
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如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
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为什么配PBS高压灭菌后有絮状沉淀?
1、絮状沉淀可能是磷酸盐的晶体,将水灭菌,然后再配; 2、可能出在氯化钠上,换氯化钠; 3、新配的PBS不稳定,要放置一天再高压; 4、灭菌后,放在4度冰箱; 5、配母液的水为双蒸水或超纯水。
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胰酶、胰蛋白酶怎么区分啊?
胰酶是从各种动物(如:猪、牛)胰脏制取的蛋白酶、脂酶和淀粉酶混合物。胰蛋白酶能使蛋白转化为蛋白胨,胰淀粉酶使淀粉转化为糊精与糖,胰脂肪酶则使脂肪分解为甘油和脂肪酸。 胰蛋白酶,为蛋白酶的一种,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成,含6对二硫键。猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸残基排列顺序中,只有41个氨基酸残基不同,但分子构型有很大区别。羊胰蛋白酶与牛、猪的相似,但其活力略高于牛和猪的。 重组胰蛋白酶:从重组毕赤酵母中分离纯化,再经冷冻干燥得到的重组胰蛋白酶粉末,具有天然胰蛋白酶相同的活性和特异性,具有无动物源、批次质量稳定、纯度高等特点。
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为什么新到的这瓶与原来购买的颜色不一样?
因为冷冻使得染料发生聚集,解冻后颜色恢复正常,这个和培养基一样,冻住以后有的颜色会有深浅不同,解冻后就都一样了
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胰酶的作用机理是什么?
胰酶是一种蛋白酶,酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽键,通过在特定位置上降解蛋白,使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解,使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力作用下成为球形。 图1. 胰酶酶切位点
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为什么使用胰酶一段时间后,消化的时间比以前还久?
一般消化时间控制在5分钟以内,若出现消化过久问题,有可能胰酶保存不当已经失活。建议将大瓶胰酶分装后冻存;使用前最好37℃水浴或培养箱回温;使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞;依据不同细胞种类调整胰酶用量和消化时间及温度。 消化条件不稳定会导致黏附力低的细胞被消化下来并进入传代培养,黏附力强的细胞可能无法顺利被消化而丢失,造成人工筛选细胞的过程。因此,在摸索好合理的消化条件后,应保持恒定的胰酶用量、消化时间及温度,避免细胞被筛选。
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传统胰酶一般取自猪的胰脏,如何保证胰酶没有携带病毒和支原体?
本公司在生产过程中将胰酶进行3次100nm孔径过滤器过滤并进行辐照。在质量控制中,胰酶需要经过无菌检测,猪细小病毒检测和支原体检测,以确保产品质量和安全性。
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在做细胞凋亡检测时,细胞为什么不能用含EDTA的胰酶消化?
Annexin V(膜联蛋白)是Ca 2+ 依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca 2+ 从而影响Annexin V,进而影响结果,因此选用不含EDTA的胰酶。
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用胰蛋白酶消化后,细胞还是成团,原因可能是什么?
(1)消化时间不够 (2)吹打力度不够 (3)胰酶消化液浓度不够 (4)胰酶保存不当已失效 (5)细胞密度过高之后才消化传代。
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为什么要对胰酶进行分装?如何分装储存?
多次使用同一瓶胰酶且反复冻融,会降低消化效果并有可能造成污染,因此有必要对胰酶进行分装。胰酶分装时遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则,因为冷冻保存时,试剂体积会膨胀。
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胰酶消化完全的标准是什么?
一般肉眼观察贴壁细胞层,多半细胞呈沙状移动就可以停止消化。
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胰酶中的酚红有什么作用?何种情况下使用不含酚红的胰酶?
酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明:酚红可以模拟固醇类激素(特别是雌激素)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测,在做流式细胞检测时,也会使用不含酚红的胰酶。
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胰酶适用于哪些细胞消化?影响消化效果的因素有哪些?
胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞,如胚胎、上皮、肝、肾等组织,但对纤维性组织和较硬的癌组织的效果差。胰酶的消化效果主要与pH值、温度、时间、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。
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工艺技术
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免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒相关使用操作说明?
Q: 步骤上的可选步骤能否省略? A: 该试剂盒是经过实验验证的, 在进行验证实验的时候实验室都是要做这个可选步骤的, 建议不要省略, 按照说明书操作。 Q: protein A和protein G beads怎么选? A: 各取5ul。 Q: 超声破碎冰上操作是必须的吗?4℃条件能否微调? A: 建议冰上操作,4℃可以微调。 Q: beads出现吸不出来的情况,怎么处理? A: 吸之前需注意枪头要剪一下再吸,如若beads吸不上来,可加入等体积的20%乙醇混匀后再吸。 Q: 如果没有超声破碎仪的话,能不能用酶解的办法破碎细胞? A: 酶解和超声都可以,酶按照实验室正常使用浓度配制即可。 Q: 实验的时候能抗体beads一起加吗?还是说先加抗体再加beads? A: 都可以,但我们建议参考产品说明书使用,先加抗体再加beads。 Q: 10*Wash buffer如何稀释?一定要使用配套的吗? A: dd水稀释即可,最终浓度是1 * washing buffer 即可。 Q: 怎么看出现的条带结果? A: 比较关注的是三条泳道,input和IgG以及检测互相作用的泳道,理论上input有一条目的条带, IgG没有条带。如果input没有条带,说明在进行免疫共沉淀之前没有进行WB验证,建议先验证之后 再重新操作。若IgG阴性对照出现条带,是不正常的,应是受重链和轻链的影响,说明使用的二抗 不正确, 建议更换特异性更强的二抗。 Q: 免疫共沉淀试剂盒裂解液能用于组织吗?比例又是如何? A: 可用于组织,要先将组织研磨成匀浆,比例和细胞比例一致。 Q: 阴性对照lgG组后续WB有条带一般是什么原因? A: 首先需要排除lgG和后续WB一抗同源导致的轻重链的干扰条带(25kd和50kd附近);再者建议参考本试剂盒免疫沉淀法“可选步骤”以排除Protein A/G的非特异性结合;再就是考虑lgG的问题可以换用其他品牌lgG尝试。
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预染蛋白marker有哪些注意事项?
【注意事项】 1. 在低浓度胶时,低分子量蛋白会泳动于染料前缘。 2. 大分子量蛋白 Western blot 时需要延长转膜时间或加高转膜电压。 3. 预染蛋白质在不同的缓冲体系下有不同的表观分子量,如果在该缓冲体系中事先用非预染蛋白质标定,可以大致确定蛋白质分子量。
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简介
职业: -
学校: -
地区:上海市
个人简介:
爱必信(上海)生物科技有限公司 Absin Bioscience Inc.,成立于2010年,公司位于浦东新区张江医谷园区,公司以销售自主品牌(Absin)产品。爱必信的目标是为生命科学等相关领域的客户提供全面的的生物化学试剂,努力打造高品质生命科学产品的知名品牌(Absin)。 目前爱必信的主要产品:生物化学试剂60万种,抗体10万种,以及各种特色优质的高性价比产品,我们的产品还在不断丰富和完善中!敬请及时关注。 爱必信特色产品线(全部现货): 二抗、标签抗体、对照抗体;WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;细胞因子、信号通路调节剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒;动植物提取物...
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企业简介
企业名称:爱必信(上海)生物科技有限公司
企业性质:生产商,
主营业务:生化试剂(常用生化试剂、生物学实验常用试剂、荧光染料、激动剂/抑制剂,植物提取物)、细胞生物学(细胞...
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